微生物基因组DNA氯化苄提取方法优化的研究

Picbiapastoris GS115为例，通过正交设计对氯化苄提取基因组DNA条件进行优化，并获得最优水平组合提取条件：提取液pH9、氯化苄加量300μL、保温时间60min。Piclda pastoris GS115的基因组DNA为模板，PCR扩增泛素基因（Ubi）在琼脂糖凝胶电泳228bp处出现DNA亮带。利用该法提取其他微生物基因组DNA也能够获得很好的结果。     

烤后烟叶基因组DNA提取条件优化

为解决烤后烟叶基因组DNA提取稳定性差的问题,以烤后烟叶为材料,对CTAB法提取基因组DNA进一步改良优化:对CTAB沉淀缓冲液使用量、裂解时间、Tris平衡酚的处理次数和RNase处理时间4个影响因素进行单因素优化.实验结果表明:CTAB沉淀缓冲液使用DNA溶液体积的1.5倍、裂解时间40 min、Tris平衡酚抽提1次和RNase(10 mg/mL,1μL)处理10 min,能得到主带清晰的烤后烟叶基因组DNA.该方法提取得到的烤后烟叶基因组DNA OD260/OD280为1.7～1.9,OD260/OD230>2.0,35 ng左右基因组DNA即能得到清晰的RAPD和SCAR图谱,适用于以PCR为基础的分子生物学实验.     

一种蚜茧蜂基因组DNA提取方法

为有效获得蚜茧蜂基因组DNA,并保留其虫体做形态鉴定。本文对常规试剂盒提取方法（柱离心法）进行改进,采用穿刺法提取7种蚜茧蜂的基因组DNA,同时以研磨法提取4种常见蚜茧蜂成虫基因组DNA做对照,比较两种方法提取的基因组DNA的纯度和产量,并通过线粒体COI基因序列扩增进行验证。结果表明:穿刺法能从单头蚜茧蜂中提取DNA而不影响形态鉴定。该方法提取的DNA产物产量在29~55 ng/μL,提取物的OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.51~1.91,可以稳定地进行线粒体COI基因序列扩增,PCR扩增条带清晰完整。      

玻璃微珠法提取葡萄球菌基因组DNA的研究

作为革兰氏阳性细菌,葡萄球菌的细胞壁非常坚固,为提取其DNA造成很大困难。本实验比较了不同方法破除金黄色葡萄球菌细胞壁的结果,确定了玻璃微珠法破除其细胞壁具有简单有效快速廉价等优点,提取得到的基因组可用于PCR实验,此方法扩展到人葡萄球菌和耳葡萄球菌能够达到同样的提取效果。     

PCR 检测牛乳中大肠杆菌基因组DNA 的提取方法

为获得一种适于牛乳样品大肠杆菌PCR 检测的基因组DNA 提取方法,对饱和酚法、CTAB 法、试剂盒法及溶剂裂解法等4 种提取方法加以比较,通过考察DNA 的纯度、定量分析以及PCR 分析,确定一套有效、快速、适合牛乳中提取大肠杆菌的基因组DNA 方法--溶剂热裂解法。结果显示该方法提取的DNA 模板,适于PCR扩增大肠杆菌DNA,可以用于牛乳中的大肠杆菌检测。     

食品污染微生物基因组DNA提取的简易方法

本文报道了直接抽提食品污染微生物的基因组DNA的方法。污染的食品溶于PBS缓冲液后,直接用含SDS的裂解液裂解微生物细胞。抽提出的微生物基因组DNA在23kb处有清晰条带,利用P1和P2扩增出16SrDNA基因约180bp的目的条带,克隆后随机测定一个阳性克隆的序列,分析表明我们测定的与细菌的KVD-1921-15菌株非常接近。     

简便易行的食用菌菌丝体基因组DNA提取法

用CTAB法直接从食用菌菌丝体培养物中提取DNA，并将所提取DNA进行PCR，得到了较清晰的扩增图谱，用该法提取的食用菌菌丝体DNA可用于分子生物学研究，具有简便易行的优点。     

平菇基因组DNA提取方法的研究

以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8～2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。      

平菇基因组DNA提取方法的研究

以实验室自行培育的平菇为实验材料,分别使用CTAB法、SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取平菇基因组DNA,并通过紫外分光光度计、限制性酶切及PCR检测来衡量基因组质量。结果表明,使用CTAB法很难得到高质量的基因组DNA,OD260/280仅为1.5左右,而且伴有较多的杂质,电泳条带拖尾严重;使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,效率较低,同时PCR检测不能得到有效扩增;而使用优化后的SDS-CTAB法及高盐酶解法提取平菇DNA,能够获得质量高、纯度好的基因组DNA,OD260/280基本保持在1.8～2.0之间,电泳条带较为清晰均一,使用EcoRI限制性酶对其进行酶切分析,酶切效果较好,并且DNA质量能够满足PCR检测的模板要求。说明SDS-CTAB法以及高盐酶解法提取的平菇DNA能够满足分子水平操作的要求,两者相比,前者成本较低,后者产率较高。     

快速提取肉类基因组DNA的裂解液的研究

目的配制一种快速提取肉类DNA且满足重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)要求的裂解液。方法分别配制3种裂解液:Na OH裂解液、Chelex裂解液与PBS裂解液,取200μL裂解液与20 mg肉类样品进行混合,振荡5 s,取上清液稀释10倍直接作为扩增模板。结果 3种裂解液中Na OH裂解液提取DNA在稀释与未稀释条件下均有较好的扩增,Chelex裂解液提取DNA在稀释与未稀释下均无扩增,PBS裂解液提取DNA在稀释作用下有较好的扩增,在未稀释作用下无扩增。裂解液提取法和试剂盒方法提取的纯度、产物的大小几乎一致,所扩增的为同一产物,裂解液所需成本与试剂盒方法相比较低。结论 Na OH裂解液可以在5 min内提取肉类中的DNA,浓度与纯度均较高,所需时间短,成本低,且满足分子检测要求。     

生乳细菌总数检测仪测定生乳细菌总数的应用

以还原法为理论基础,研制生乳细菌总数检测仪进行生乳细菌总数快速检测,以克服经典还原法目测比色主观性强的缺点,而且检测结果可以定量表示。该仪器连续检测加入试剂后的生乳样品颜色(RGB),通过数理统计分析,采用斜率法以R值斜率表示样品颜色的变化速度。研究以标准平板计数法(SPC法)为标准,建立了R值斜率与菌落总数之间的标准方程,经验证生乳细菌总数检测仪检测结果与SPC法检测结果差异不显著。与流式细胞仪比较,在与SPC法的相关性、运行成本及便携性等方面具有一定优势。     

原料乳中微生物的多样性

牛乳营养丰富,适合各种微生物的生长繁殖。该文介绍了原料乳中微生物的种类,综述了国内外近年来关于原料乳中微生物多样性的研究进展。并对非培养微生物学在研究原料乳中微生物多样性的应用进行了总结,高度评价了非培养方式的快速、敏感以及可定义纯培养方式无法发现的微生物的特点。     

普洱茶发酵过程中微生物总DNA提取方法的比较

为了快速提取普洱茶发酵过程中微生物总DNA,便于分析微生物群落的多样性及演替情况,对比研究了总DNA提取的四种方法-酶法、试剂盒法、超声波法和变性剂法,以16S rRNA区域通用引物(27F和1492R)和18S rRNA区域通用引物(NS1和NS8)对四种方法提取的总DNA分别进行扩增,根据总DNA提取的大小、产量、纯度和PCR扩增产物进行评估。综合各项指标来看,总DNA提取方法以变性剂法为优,其次是试剂盒法、超声波法和酶法。     

饲养和挤奶方式对原料奶中细菌总数的影响

系统评价了昆明雪兰牛奶有限公司来自6个机械挤奶规模化奶牛场、6个机械挤奶奶牛合作社和6个手工挤奶奶站的原料奶的细菌总数。结果表明,机械挤奶规模化奶牛场、机械挤奶奶牛合作社原料奶和农户手工挤奶站原料奶细菌总数分别平均为346875mL-1,155206mL-1和2385167mL-1,农户手工挤奶站原料奶细菌总数显著高于机械挤奶规模化奶牛场和合作社(P<0.05),后两者之间无显著差异(P>0.05);     

Determination of protein concentration in raw milk by mid-infrared fourier transform infrared/attenuated total reflectance spectroscopy

This study investigates the potential use of attenuated total reflectance spectroscopy in the mid-infrared range for determining protein concentration in raw cow milk. The determination of protein concentration is based on the characteristic absorbance of milk proteins, which includes 2 absorbance bands in the 1500 to 1700 cm(-1) range, known as the amide I and amide II bands, and absorbance in the 1060 to 1100 cm(-1) range, which is associated with phosphate groups covalently bound to casein proteins. To minimize the influence of the strong water band (centered around 1640 cm(-1)) that overlaps with the amide I and amide II bands, an optimized automatic procedure for accurate water subtraction was applied. Following water subtraction, the spectra were analyzed by 3 methods, namely simple band integration, partial least squares (PLS) and neural networks. For the neural network models, the spectra were first decomposed by principal component analysis (PCA), and the neural network inputs were the spectra principal components scores. In addition, the concentrations of 2 constituents expected to interact with the protein (i.e., fat and lactose) were also used as inputs. These approaches were tested with 235 spectra of standardized raw milk samples, corresponding to 26 protein concentrations in the 2.47 to 3.90% (weight per volume) range. The simple integration method led to very poor results, whereas PLS resulted in prediction errors of about 0.22% protein. The neural network approach led to prediction errors of 0.20% protein when based on PCA scores only, and 0.08% protein when lactose and fat concentrations were also included in the model. These results indicate the potential usefulness of Fourier transform infrared/attenuated total reflectance spectroscopy for rapid, possibly online, determination of protein concentration in raw milk.     

原料乳生产过程中微生物污染的来源追溯研究

为研究原料乳微生物污染的来源,2011-2012年间,研究者对北京市原料乳产地的牛乳、牛体涂抹、挤乳设备涂抹等及生活用水、卧床土壤、饲料等进行了大量采样分析和调查,并针对采集样品中分离出的目的菌株进行了生化鉴定及分析.研究结果表明,该地区原料乳中的特征病原菌为金黄色葡萄球菌,对后期加工乳品质影响较大的微生物种类为嗜冷菌和芽孢杆菌属.在此基础上,研究者对原料乳和其他来源样品中的这三种菌利用16S rRNA分子生物学技术建立了目的菌株来源系统发育树,以此来进行基因序列比对分析,确定了原料乳中这三种菌的主要来源,为有效减少和控制该地区原料乳污染提供了参考.     

高效液相色谱法分析原料乳和奶粉中三聚氰胺

建立了二极管阵列检测器-高效液相色谱测定原料乳及奶粉中三聚氰胺的方法。奶粉样品经三氯乙酸超声提取,乙酸铅沉淀蛋白,三氯甲烷除去脂肪和非极性杂质,PROELUTPXCSPE阳离子交换固相萃取小柱进一步除去样品基质干扰,氨化甲醇洗脱。实验对色谱分离条件进行了优化,三聚氰胺的质量浓度在1.0～100.0μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,回归方程为y=89.763x-113.72,相关系数为R2=0.9988。加标回收率为90.5%～105.0%,相对标准偏差(RSD)小于4.0%。该方法简单、快速,结果准确可靠。     

原料乳与乳制品中碳水化合物质量控制研究进展

原料乳与乳制品中碳水化合物具有极高的营养价值,对人体健康具有重要作用,但其掺伪现象较普遍,严重影响了原料乳与乳制品的品质。文章综述了原料乳与乳制品中碳水化合物及其掺伪物质检测技术研究进展,旨在为做好原料乳与乳制品中碳水化合物质量控制提供科学依据。      

生产贮藏条件对原料奶中微生物的影响

以手工挤奶条件下不同来源的原料奶为研究对象,在冷藏(4℃)、室温(19℃)条件下,分别贮藏0,3,6,9 h后检测原料奶中菌落总数(TBC)、芽孢总数(TSC)、耐热芽孢数、嗜冷菌总数。结果表明,随着贮藏温度增加、时间延长,原料奶中微生物增幅加快(P<0.05),冷链条件下(4℃)贮运原料奶对控制微生物生长繁殖具有重要作用。手工挤奶条件下室温(19℃)贮奶3h、冷藏(4℃)贮奶6h后原料奶中菌落总数超过5×105 mL-1的国家标准,原料奶的芽孢总数、耐热芽孢数和嗜冷菌数均超出液态奶的生产要求,特别不利于长效奶(保质期30 d以上)的生产。改善牛奶生产环境对提高原料奶品质具有重要的作用。