转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上的固定化

研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上的化学固定化的影响因素,确定了最佳固定化工艺条件,即为:第一步光照反应6 min,单体质量分数为20%,第二步光照时间25 min,接枝率最高可达35.2%;己二胺质量分数为25%,胺烷基化时间150 min,胺烷基化温度60℃;戊二醛质量分数3%,戊二醛作用时间45 min;酶液浓度10 mg/mL,固定化时间20 h,固定化温度4℃,固定化酶膜的活力最高可达游离酶的45%.并研究了温度、pH、金属离子对固定化酶膜的酶学性质的影响,其贮存性能和操作稳定性也做了初步研究.     

MTG酶催化羊毛固定化溶菌酶的酶学性质及抗菌性能

利用新型的生物催化剂微生物谷氨酰胺转胺酶（MTG）催化溶菌酶在羊毛织物上的固定化。采用SDS-PAGE法探讨了溶菌酶作为MTG催化底物的可行性以及固定化溶菌酶的酶学性质及抗菌性能。研究结果表明,羊毛织物经过高锰酸钾预处理后可以实现溶菌酶的固定化。固定化酶的pH值稳定性和温度稳定性优于游离酶;与物理吸附法相比,MTG催化法可赋予固定化溶菌酶的羊毛织物更好的耐水洗性和操作稳定性;此外,固定化酶的低温（4 ℃）干储藏稳定性良好,30天内酶活仍维持在80%以上。抗菌测试结果表明,MTG催化法固定化溶菌酶的羊毛织物对金黄色葡萄球菌的抑菌率达73.23%,抗菌效果良好。     

超氧化物歧化酶的固定化及其酶学性质

目的制备固定化超氧化物歧化酶(SOD),并分析其酶学性质。方法以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化超氧化物歧化酶。以邻苯三酚自氧化法分别测定溶液酶与固定化酶的活力,并计算回收率。对固定化酶的温度和pH稳定性、半衰期、重复使用的回收率及米氏常数(Km)进行测定。结果固定化超氧化物歧化酶活力为333U/g,酶活回收率为86.32%,半衰期为43.8d;固定化酶室温保存5d后,相对酶活力仍保持在80%以上,最适反应温度为45℃,使用一次后回收率为70.12%,重复使用两次后回收率为51.72%;固定化酶与溶液酶在pH6时活性最强,Km分别为0.18mmol/L和0.16mmol/L。结论该固定化酶较溶液酶的稳定性得到提高,便于贮存,在食品、药品、日用品等领域有良好的应用前景。     

转谷氨酰胺酶促壳聚糖/壳聚糖衍生物对蛋白质糖基化 作用的研究进展

转谷氨酰胺酶途径糖基化具有效率高、特异性高、安全性高等优点被广泛地应用于蛋白质改性。为了研究采用转谷氨酰胺酶途径进行蛋白质糖基化对蛋白质功能性质、结构的影响,本文对国内外该途径糖基化的研究现状进行综述。首先介绍了糖基化选用的代表性多糖——壳聚糖及其衍生物,以及转谷氨酰胺酶催化蛋白质与多糖交联的机理。然后,重点阐述了酶法糖基化对蛋白质表面疏水性、溶解性、乳化性等加工性能的影响,以及对蛋白质结构变化的影响,包括一级结构、二级结构、微结构。其次,对目前该法修饰蛋白质在可食膜、医用敷料、抑制晚期糖基化终末产物方面的应用做了简要介绍,充分显示其在各领域的应用价值。最后展望了转谷氨酰胺酶途径蛋白质糖基化的未来研究方向和亟待解决的问题。     

sol-gel法固定化漆酶及其性质

采用sol-gel法固定化漆酶,最佳固定化条件为:聚乙二醇分子量PEG600;聚乙二醇添加量1.5%;酶液浓度15mg/mL;水/前驱体质量比1:6;缓冲液pH值4.5。固定化漆酶活性保持在游离漆酶的50%以上,最适反应温度为60℃,最适pH值为pH4.5。同时,热稳定性、酸碱稳定性和贮存稳定性都有明显的提高。当以ABTS为底物时,固定化漆酶的K_m值(122.8μmol/L)比游离漆酶的K_m值(32.9μmol/L)高,与底物的亲和力有所降低。     

固定化细胞延胡索酸酶性质的研究

探讨了海灌酸钠固定化普通变形杆菌延胡索酸酶的性质。研究结果表明：酶催化延胡索酸为Ｌ－苹果酸的最适温度为４０℃,最适ｐＨ为７．０。在温度低于４０℃和ｐＨ５。０～８．０的条件下,固定化细胞酶活力稳定性好,显示其热稳定性和ｐＨ稳定性明显优于游离细胞。Ｃｙｓ对固定化细胞酶活力无影响,ＧＳＨ对前激活作用。     

酶的固定化及化学修饰

综述了酶的固定化与化学修饰方法 ,对改善酶在工业应用时的各种性质 ,使酶制剂实现大规模工业应用具有积极的意义。     

固定化L-天门冬酰胺酶的性质及其填充床反应器的研究

利用海藻酸钙包埋、戊二醛交联的方法对L-天门冬酰胺酶进行固定化。研究了固定化L-天门冬酰胺酶的最适pH、最适温度、米氏常数、半衰期等酶学性质,并考察了影响固定化酶柱式填充床反应器转化率的因素。结果表明:固定化酶最适pH值为8.5,最适温度为67°C,固定化酶的米氏常数Km增大,固定化酶半衰期随着温度的增加而逐渐减小;温度、反应柱内径、底物溶液浓度、流速等因素对填充床反应器转化率均有显著影响。     

兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-转硫酶P1及其表征

谷胱甘肽-S-转硫酶P1(Human glutathione-S-transferaseπ1,h GSTP1)为肿瘤耐药增敏药靶。为探索磁珠固定化h GSTP1的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体,重组表达6×His-h GSTP1,分别用Ni2+-NTA琼脂糖和GSH-Sepharose 4B层析柱纯化,采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和Ni2+-NTA磁珠固定化6×His-h GSTP1,表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性。羧基磁珠不能有效固定GSH-Sepharose 4B层析柱纯化h GSTP1,可有效固定Ni2+-NTA层析柱纯化h GSTP1,但最大保留酶活仅约30%。Ni2+-NTA磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白,其饱和固载容量约为羧基磁珠的1.7倍且最大保留酶活均可达80%。Ni2+-NTA磁珠固定化h GSTP1在pH 6.5 PBS中0℃振摇8 h活性未见明显改变,相同条件游离酶活性下降约20%;在筛选后甲醇80℃处理20 min不脱落。Ni2+-NTA磁珠固定化h GSTP1和游离酶对抑制剂依他尼酸(Ethacrynic acid,EA)的IC50无显著性差异(P0.05)。因此,Ni2+-NTA磁珠固定化h GSTP1可适用于指数富集筛选混合物库中抑制剂。     

磁性磷脂酶D交联酶聚集体的制备及其酶学性质

以磁性Fe3O4为载体,采用吸附-聚集-交联的方法固定来源于Streptomyces chromofuscus的磷脂酶D （scPLD）。该方法制备的磁性磷脂酶D交联酶聚集体（MCLEA）酶活回收率可达72.89%,酶活为（437±6.60）U/g。与游离酶相比,MCLEA在不同温度和pH下的稳定性都得到了一定程度的提升,但由于与底物的亲和力降低,需要更高浓度的磷脂酰胆碱（PC）和Ca2+作为反应底物与MCLEA结合。另外,还研究了MCLEA的有机溶剂耐受性,发现乙醇、四氢呋喃、叔丁醇、乙酸乙酯、乙醚和甲苯等有机溶剂对MCLEA的酶促反应具有促进作用,此发现为scPLD催化转磷脂酰作用生成磷脂酰丝氨酸（PS）过程中构建双相体系时有机溶剂的选择提供了参考。MCLEA在进行连续13次酶促反应后,酶活仍可保留在76%以上,其半衰期为331.67 min,说明所选择的固定化方案可以提高酶的稳定性,从而提高其在催化反应过程中的重复利用性。     

大豆脂肪氧合酶(LOX)的固定化及增强稳定性

以活性白土、滑石粉为载体采用吸附法固定化大豆脂肪氧合酶(LOX)的优化条件为:(1)酶液对活性白土的用量比为897U/mg,在浓度为0 05mol/L、pH=7 0的磷酸盐缓冲液中20℃搅拌吸附30min;(2)酶液对滑石粉的用量比为238U/mg,在浓度为0 05mol/L、pH=8 0的磷酸盐缓冲液中10℃搅拌吸附15min。经放大后实验重复性良好。上述固定化酶置于0～4℃保存20d,酶活损失分别为19 2%和17 7%;与游离酶相比,能加快酶促反应的速度并使产率分别提高9 6%和42 5%。以海藻酸钠为载体采用包埋法得到的固定化酶珠的耐热、耐酸碱、耐有机溶剂能力较游离酶有很大提高,在φ(甘油)=75%的水溶液中保存33d,酶活基本保持不变;在50℃热处理60min后酶活仍能保持90%。     

海藻酸钠与聚乙烯醇包埋活性污泥强化聚酯废水生物处理

分别用海藻酸钠与聚乙烯醇（PVA）作为包埋剂包埋活性污泥，并添加活性炭作为添加剂，采用正交试验法．以聚酯废水COD的去除率为主要指标，小球强度和传质性能为辅助指标，确定了最佳包埋条件，将其应用于聚酯废水处理。研究结果表明，海藻酸钠小球COD去除率较普通活性污泥法提高了10％-20％，而聚乙烯醇小球则低于活性污泥法；且海藻酸钠小球传质性能也优于聚乙烯醇小球，但前者小球强度略低于后者。     

SA-CMC固定反硝化细菌好氧反硝化性能探究

为扩大反硝化菌应用和抗逆性,以海藻酸钠(SA)和羧甲基纤维素钠(CMC)为载体、用CaCl2交联,联合包埋脱氮副球菌,制作反硝化菌剂,探究有氧条件下,菌剂的好氧反硝化性能.结果表明,有氧条件下,所得菌剂对硝态氮的还原能力显著高于游离态菌(总氮氧化物去除率分别为95.6％和9.6％).CMC含量升高能显著提高菌剂好氧反硝...     

固定化木瓜蛋白酶载体的研究

本文主要概述了近年来国内外对于固定化木瓜蛋白酶载体的研究情况。木瓜蛋白酶是100％纯天然产物，也是一种有着广泛用途的重要生化试剂，在我国有着诱人的开发应用前景。目前，被用做固定木瓜蛋白酶的载体已从有机高分子载体、无机载体发展到了复合载体。用这些载体对木瓜蛋白酶进行固定化大多取得了较好的效果。相信对固定化木瓜蛋白酶载体的研究将会加快木瓜蛋白酶的工业化应用进程。     

淀粉凝胶强度及其影响因素研究

研究了淀粉凝胶以及添加了食品添加剂的改性淀粉凝胶的强度及其影响因素,包括淀粉的浓度、体系的pH值、凝胶陈化时间以及金属离子浓度等对淀粉凝胶强度的影响。实验结果表明:控制淀粉浓度为15%时,明胶的添加量为2.0%、海藻酸钠的添加量为1.5%、凝胶陈化时间为7 d、体系pH值为6~7、钙离子含量为1.0%时,淀粉凝胶的强度达最大值;海藻酸钠和明胶对淀粉凝胶强度具有明显的增强作用。     

海藻酸钠-硅藻土包埋石油脱硫菌Rhodococcus sp.H-412

生物菌固定化研究对生物脱硫技术的推广应用具有重要的意义。本文以实验室筛选的、符合4S脱硫代谢途径的Rhodococcus sp．H．412为研究对象,二苯并噻吩（DBT）为生物催化脱硫模拟化舍物,考察了脱硫菌Rhodococcus sp．H．412的固定化操作条件和使用条件。试验结果表明：在交联温度为4℃,交联剂氯化钙溶液浓度为0．10mmol／L,海藻酸钠质量分数为3．0％,添加剂硅藻土质量分数为1．0％,菌胶比（菌体湿重：胶体体积）为1：20的条件下,用8号医用针头造粒,可以得到具有较高的脱硫活性、较好的机械强度和传质性能的固定化细胞颗粒。固定化细胞相对游离细菌而言,具有较高的温度适应能力和较宽的pH适应范围。     

海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究

研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸（sAM）合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为：海藻酸钠质量分数3％、CaCl2质量分数4％、SAM合成酶加量（以每克海藻酸钠计）75mg、固定化时问30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42％。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69％的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7．5～9．0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84％以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82％的酶活力。     

乙酰胆碱酯酶固定化方法的研究

以戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,将乙酰胆碱酯酶(AchE)交联固定到商品载体上,制备固定化酶片。对影响酶固定化的重要因素进行了考察,获得了最佳固定化条件。实验结果表明,以孔径为0．45μm的硝酸纤维素滤膜作栽体,乙酰胆碱酯酶用量10U,5％(体积分数)戊二醛2μL,1％(质量分数)BSA10μL,配成70μL的酶溶液,3℃固定8h,可获得较好的固定化效果。不同批次制备的酶片,其活力值标准偏差为3.27％～5．03％,酶片在0．1mol／L pH8．5磷酸盐缓冲溶液中3℃下可保存60d。‘     

脂肪酶固定化研究和应用

采用硅藻土作载体,进行了脂肪酶的固定化。利用固定化酶选择性催化1-苯乙醇与乙酸乙烯酯的转酯化反应,得到R-乙酸苯乙酯,进行1-苯乙醇的拆分。实验考察了不同吸附方法固定化酶的效果,确定效果最好的固定方法为载体涂布法,并对该法的固定化条件进行了优化。制备的固定化酶的转酯比活比游离酶提高了14．3倍。固定化没有改变酶的选择性．对映体过剩值仍大于98％。初步探讨了固定化酶和游离酶的反应过程。