衍生化法测定水果中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基含量

用衍生化试剂5,5-二硫硝基苯甲酸（DTNB）对巯基化合物的衍生化反应和邻苯二甲醛（OPA）与GSH的荧光衍生化反应,分别采用UV-vis分光光度法和荧光光度法测定了猕猴桃、大枣、酸浆中总巯基含量和GSH的含量。被测样品中GSH和总巯基相对含量分布有较大的差异,其中猕猴桃和大枣中含有相对较高的GSH浓度分布,分别达0.7092、0.8374mol/g,酸浆中含有较高的总巯基含量分布,达1.4173mol/g。本测定方法的回收率达95.38%¹01.9%,满足测定准确度的要求,总巯基含量和GSH含量测定最低检测限分别为9.6×10-7、2.69×10-7mol/L。      

邻苯二甲醛荧光衍生化法测定食用海藻中还原型谷胱甘肽

用质谱和光谱测定方法研究了OPA和还原型谷胱甘肽(GSH)荧光衍生化反应,发现OPA分子苯环上相邻醛基的歧化反应,使得其与GSH发生衍生化反应时生成三环和二环结构的两种衍生化产物,其中三环结构的衍生化产物具有较强的荧光发射特性。利用OPA荧光衍生化法分别测定了马尾藻、鹿角菜、龙须菜中GSH的含量。在含OPA的PBS缓冲溶液、激发波长λex=350nm时,样品溶液在428nm处发射灵敏的荧光,检测限达3.6×10-8mol/L。用标准加入法分别测定样品中GSH含量分别为:0.0714mg/g(马尾藻),0.1183mg/g(鹿角菜),0.1970mg/g(龙须菜),方法的回收率达到99.22%～100.41%。     

食用菌中还原型谷胱甘肽的提取及荧光检测

检测食用菌中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。采用热水提取法、超声波法、化学渗透法、复合酶法和超声复合酶法提取样品GSH,以邻苯二甲醛(OPA)与GSH反应形成荧光体系,荧光光度法测定GSH含量,并对这几种提取方法的最佳提取条件和提取量进行了比较。结果发现,超声与复合酶法的协同作用可使GSH提取量大为提高;因此,在最佳提取条件下,用超声复合酶法分别提取了金针菇、鸡腿菇、双孢菇、平菇、杏鲍菇和香菇中的GSH,荧光光度法测定GSH的提取量为0.133~0.407 mg/L。荧光光度法的回收率达96.5%~99.6%,满足测定准确度的要求。      

应用OPA柱前衍生法测定西红柿中的谷胱甘肽

研究了采用OPA柱前衍生法测定西红柿中的谷胱甘肽。通过ODSC─18柱分离,流动相为60％的0．15mol／L乙酸钠溶液（pH7．0）和40％的甲醇。荧光检测器波长为：EX：340nm和EM：420nm。回收率为99．78－99．87％,变异系数（CV）为1．19％。     

山黧豆中还原型谷胱甘肽的荧光检测

对应用荧光分光光度法测定山黧豆中还原型谷胱甘肽含量的方法进行了研究。以邻苯二甲醛与还原型谷胱甘肽反应形成荧光体系,研究了室温下溶液酸碱度、邻苯二甲醛浓度、反应时间等对测定结果的影响,从而确定了荧光法测定山黧豆中还原型谷胱甘肽含量的最佳检测条件:激发波长为347nm,发射波长为425nm;溶液pH为8.0;反应体系中邻苯二甲醛浓度为0.30mg·mL-1;衍生化反应时间为20min。还原型谷胱甘肽含量在0.05～0.80μg·mL-1范围内与荧光强度有良好的线性关系,回归方程为y=1084x+63.148,相关性系数0.9990。该法快速、灵敏、准确,适合批量样品检测。     

HPLC法测定莲子中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)含量

利用5,5'-二硫双-2-硝基苯甲酸(DTNB)为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取、HPLC法测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。本文对样品前处理过程和色谱流动相的选择分别进行了优化,有效的阻止了前处理过程中巯基氧化变性对测定灵敏度降低而导致的漏检及消除了衍生化产物3,5-硝基-3-巯基-苯甲酸(NTB)色谱峰拖尾所造成的干扰,并借此选择性测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。结果表明;三次测定莲子中GSH和总巯基(-SH)含量均值分别为0.971 1μmol/g和1.368 6μmol/g,方法的回收率分别为101.02%和100.09%,检测限分别为4.21μmol/L和4.63μmol/L。     

应用OPA柱前衍生法测定食品中的牛磺酸

本文研究了采用ＯＰＡ柱前衍生法测定食品中的牛磺酸。样品经粉碎、振荡、离心等前处理，通过ＯＤＳＣ－１８柱进行衍生和分离。柱前衍生剂为含有０．５ｇＯＰＡ和５ｍｌα－巯基乙醇的０．２ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ９．５）硼酸缓冲液。流动用为５５％的０．０５ｍｏｌ／Ｌ乙酸钠溶液和４５％的甲醇。荧光检测器波长为：Ｅｘ：３３５ｎｍ和ＥＭ：４５５ｎｍ．食品中牛磺酸浓度在５μｇ／１００ｇ范围内能够被定量测定。回收率为９９．６３～１００．０１％，变异系数（ＣＶ）为１．３８％。     

邻苯二甲醛柱前衍生法测定食品中盐酸氨基葡萄糖的含量

目的：建立邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生法测定食品中盐酸氨基葡萄糖含量的分析方法。方法：取样品加入约40 mL水,超声处理30 min,用水定容至50 mL,用0.45μm滤膜过滤,经SHIMAZDU ODS-SP(4.6 mm×150 mm,5μm)分离,以0.68%醋酸缓冲液:甲醇(80:20,v:v)为流动相等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,二极管阵列检测器340 nm波长采集数据,外标法定量。结果：盐酸氨基葡萄糖在10～1000 mg/L浓度范围内线性良好,相关系数R2为0.9995,3个浓度水平的加标回收率在91.1%～95.60%,相对标准偏差(n=6)为0.84%～1.10%,精密度的相对标准偏差(n=6)为0.61%,方法检出限为0.0050 g/100 g,定量限为0.0125 g/100 g。结论：该方法操作简便、灵敏度高,具有良好的准确度和精密度,适用于食品中盐酸氨基葡萄糖含量的测定。     

反相高效液相色谱柱前在线衍生法测定氨基葡萄糖硫酸钾盐的含量

目的建立一种反相高效液相色谱柱前在线衍生法测定保健品中氨基葡萄糖硫酸钾盐的含量。方法利用邻苯二甲醛衍生试剂与氨基葡萄糖硫酸钾盐中的氨基进行柱前在线衍生化反应,采用C18色谱柱分离,以0.68%醋酸缓冲液:甲醇(V:V=82:18)为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长340 nm。结果 D-盐酸氨基葡萄糖浓度在0.052~1.045 mg/m L之间呈现良好的线性,平均回收率为97.5%,RSD%=1.2(n=9)。结论该方法推广性高、简便、准确,可用于制剂及保健品中氨基葡萄糖硫酸钾盐的含量测定。     

邻苯二甲醛柱前衍生化时间对反相高效液相色谱法测定稻米氨基酸含量的影响

目的确定反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)测定稻米氨基酸含量最适柱前衍生化时间。方法以氨基酸标准品以及稻米氨基酸提取物为对象,对柱前衍生化时间与氨基酸检测结果之间的关系进行研究。结果邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde, OPA)和3-巯基丙酸与氨基酸的衍生化反应进行到15 min时,氨基酸的峰面积达到最大值,不同OPA-氨基酸衍生化产物的稳定性存在很大的差异。在15～300min的衍生化反应中,酪氨酸和苯丙氨酸衍生物的峰面积保持在非常稳定的水平上;而侧链含有羟基的丝氨酸和苏氨酸对衍生化时间特别敏感,衍生化时间超过15min后,其衍生物的峰面积开始快速下降;当衍生化时间在15～60min之内时,15种氨基酸中,只有酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和丙氨酸9种氨基酸的衍生物峰的面积下降幅度小于5%。结论柱前衍生化时间对稻米氨基酸衍生物峰面积的检测值较为敏感,衍生化时间控制在15 min之内能有效减小实验误差。     

HPLC法测定四种食用坚果种子中还原型谷胱甘肽（GSH）和蛋白巯基（P-SH）含量

用5,5’-二硫双-2-硝基苯甲酸（DTNB）为柱前衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取,HPLC梯度洗脱,测定了市售开心果、巴旦木、澳洲坚果、腰果干品中谷胱甘肽（GSH）和含半胱氨酸残基的蛋白巯基（P-SH）含量。结果发现四种坚果均含较丰富的GSH和P-SH巯基,其含量分别为,开心果:GSH（1.2303±0.01126）μmol/g,P-SH（3.5414±0.0531）μmol/g;巴旦木:GSH（0.3069±0.0185）μmol/g,P-SH（1.9001±0.0194）μmol/g;澳洲坚果:GSH（1.5708±0.0216）μmol/g,P-SH（0.5905±0.0238）μmol/g;腰果:GSH（0.3373±0.0047）μmol/g,P-SH（2.2458±0.0225）μmol/g。在优化的选定条件下,测定方法的回收率为99.37%¹01.45%,GSH和P-SH测定检测限分别为0.1386μmol/g和0.2184μmol/g。本研究对坚果活性成分的构成及其巯基化合物在保健防病作用研究及其功能性食品开发均提供了有用的参考数据。      

还原型谷胱甘肽在果酒酿造中的应用

谷胱甘肽是一种广泛存在于生物细胞中的活性三肽,分为还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）两种,但绝大部 分是以GSH的形式存在的。 由于GSH具有重要的生理功能,所以它被广泛用于食品加工领域,可以起到增加食品营养价值和强化食品 风味的作用。 文章综述了外源GSH的添加对果酒品质特性的影响,讨论了GSH在果酒酿造中扮演的抗氧化、抑制褐变、改善果酒风味 以及促进苹果酸-乳酸发酵的作用,同时阐述了富集谷胱甘肽非活性干酵母制剂（g-IDY）在果酒中的应用现状,为GSH作为一种添加 剂应用于果酒酿造提供了理论依据。     

利用衍生化试剂DTNB测定枸杞中谷胱甘肽

利用5,5'-二硫硝基苯甲酸(DTNB)衍生化试剂和植物材料同步破壁提取的样品处理方法,采用电喷雾质谱法和分光光度法对枸杞中还原型谷胱甘肽(GSH)进行定性、定量分析。枸杞样品提取过程中GSH受破壁后胞外化学环境的影响导致氧化变性。利用5,5'-二硫硝基苯甲酸(DTNB)衍生化试剂同步提取,因生成稳定的GSH的衍生化产物避免了GSH氧化变性导致的GSH分析信息丢失。用UV-Vis分光光度法测定GSH含量,发现枸杞中含有丰富的GSH。标准加入法测定枸杞干品中GSH,其含量范围达(6.56±0.54)mg/g,是目前所测植物样品中GSH含量较高的物种。本研究对药用植物胞内活性物质的准确分析提供方法学的尝试,并通过测定发现枸杞中富含GSH。     

气相色谱分析多糖衍生化方法的研究与比较

采用糖腈衍生化和糖醇衍生化两种方法分析多糖组分,找出线性关系,计算摩尔比,测定加样回收率、精密度、重复性等。糖醇衍生化中,果糖经过还原可得到山梨醇和甘露醇的混合物,测定结果容易导致色谱峰的混乱,不易定性分析,并且衍生化方法反应时间较长,操作比较麻烦。糖腈乙酸酯衍生物气相色谱法具有衍生物制备简便、试剂易得等优点,并且每种糖都能得到单一的色谱峰。通过对气相色谱糖腈衍生化法和糖醇衍生化法的研究和比较,表明糖腈衍生化方法是气相色谱研究食品多糖较为合适的衍生化方法。     

还原型谷胱甘肽对四氧化二氮致小鼠肺损伤的防护作用

目的:探讨还原型谷胱甘肽（GSH）对四氧化二氮（N2O4）吸入致小鼠肺损伤的防护作用。方法:动物模型采取在120 L静式染毒柜内吸入N2O4的方法制作。雄性ICR小鼠64只,随机分为对照组,染毒组,GSH低、中、高剂量干预组（GSH低、中、高剂量+染毒）,共五组,对照组8只,其余每组14只。染毒前,干预组分别灌胃GSH（1.25、2.50、3.75 g/kg bw·d）,对照组和染毒组灌胃等体积生理盐水,连续7 d,第7 d灌胃1 h后染毒。脱臼处死动物,检测肺组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量,观察肺病理改变。结果:与对照组比较,染毒组肺组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量均极显著降低（p<0.01）;与染毒组比较,GSH低、中剂量干预组肺组织SOD和GSH-Px活性均极显著提高（p<0.01）,GSH低剂量干预组MDA含量极显著提高（p<0.01）,GSH中剂量干预组MDA含量显著提高（p<0.05）。病理切片显示,GSH干预组比染毒组肺损伤程度轻。结论:GSH对N2O4吸入致小鼠肺损伤具有显著防护作用,其作用机制可能与其抑制氧化损伤有关。      

Determination of free reduced and total glutathione in wheat flours by an isotope dilution assay

Summary An isotope dilution assay (IDA) for free reduced glutathione (GSH) and total glutathione (GSH, oxidised glutathione and protein-bound glutathione) was developed and its accuracy and sensitivity were established. The new method for GSH required extraction of flour samples with a buffer at pH 4.5 containingN-ethyl maleimide (NEMI) and¹⁴C-labelled S-(N-ethylsuccinimido) glutathione ([¹⁴C]GS-NEMI), purification of the labelled and unlabelled GS-NEMI by three Chromatographic steps and assay of the specific radioactivity of the GS-NEMI isolated. Total glutathione was assayed after reduction with dithioerythritpl. Applications of the IDA indicated that the levels of GSH (16–41 nmol/g) and total glutathione (170–185 nmol/g) were relatively low in flours with low ash contents, but increased with increasing extraction grade. The level of GSH was higher in a flour obtained from kernels that were ground in the absence of gaseous oxygen. Storage of flours reduced the GSH concentration. IDA of fractions obtained from flour showed that the extraction residue, mainly consisting of starch and glutelins, contained most of the bound glutathione.

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Bestimmung von freiem reduziertem und vom gesamten Glutathion in Weizenmehlen durch Isotopenverdünnungsanalyse

Zusammenfassung Eine Isotopenverdünnungsanalyse (IVA) wurde für das freie reduzierte (GSH) und das gesamte Glutathion (GSH, GSSG proteingebundenes Glutathion) entwickelt und auf seine Genauigkeit und Empfindlichkeit überprüft. Die neue Methode für GSH erfordert die Extraktion der Mehlprobe mit einem Puffer bei pH 4,5, der N-Ethylmaleinsäureimid (NEMI) und [¹⁴C]-GS-NEMI enthält, Reinigung des markierten und unmarkierten GS-NEMI durch drei chromatographische Schritte sowie die Bestimmung der spezifischen Radioaktivität von dem isolierten GS-NEMI. Das gesamte Glutathion wird nach Reduktion mit Dithioerythrit bestimmt. Anwendungen der IVA zeigten, daß die Konzentrationen von GSH (16 bis 41 nmol) und von gesamtem Glutathion (170 bis 185 nmol/g) relativ gering waren in Mehlen mit niedrigen Aschegehalten, aber daß sie mit steigendem Ausmahlungsgrad zunahmen. Die GSH-Konzentration war in einem Mehl höher, das aus Körnern stammte, die in Abwesenheit von Sauerstoff gemahlen worden waren. Die Lagerung von Mehlen erniedrigte den GSH-Gehalt. Die IVA von Mehlfraktionen zeigte, daß der Extraktionsrückstand, der hauptsächlich aus Stärke und Glutelinen bestand, das meiste gebundene Glutathion enthielt.

     

柱前衍生高效液相色谱法测定面制品中溴酸盐的含量

针对目前离子色谱电导法检测面制品中溴酸盐的假阳性问题,建立柱前衍生高效液相色谱测定面制品中的溴酸盐的方法。面制品经超纯水提取、过滤、衍生,采用C18色谱柱,紫外检测器检测。结果表明,采用亚铁氰化钾-乙酸锌作为沉淀剂,待测液在45℃时衍生60 min,溴酸盐浓度在0.025¹ mg/L范围内与峰面积呈现良好线性关系,方法的加标回收率为87.90%⁹4.80%,检出限为0.3 mg/kg,定量限为1 mg/kg。与离子色谱法相比,该方法具有干扰少,灵敏度高,成本低等优点,可很好地满足面制品中溴酸盐的检测和质控要求。      

食用菌甲醛含量测定的柱前衍生条件优化及其应用

目的 对食用菌甲醛含量测定中的衍生条件进行优化, 并检测6种常见食用菌的甲醛含量。方法 样品匀浆后, 4 °C超声30 min, 滤液加一定量的缓冲液及2,4-二硝基苯肼, 一定温度下衍生一定时间, 冷却后用二氯甲烷萃取3次, 氮吹至干, 乙腈定容, 然后采用液相色谱法检测, 外标法定量。结果 甲醛与2,4-二硝基苯肼在pH为5.0时反应趋向稳定, 温度在80 °C、时间为100 min时衍生效果最好。该方法回收率在90.59%~97.80%之间, 相对标准偏差1.95%~4.61%, 稳定性和重现性的相对标准偏差分别为0.90%、2.72%。进一步将该方法应用于海鲜菇、金针菇、茶树菇、黑木耳、毛木耳、杏鲍菇等食用菌的甲醛含量测定, 结果显示, 以上食用菌的甲醛含量在0.52~0.81 μg/g, 均未超标; 加标回收率均在85%以上。结论 该方法稳定, 准确度和精密度好, 适用于食用菌甲醛的检测。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定狭叶红景天中氨基酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定狭叶红景天中游离及水解氨基酸种类及含量。方法以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱采用Ultimate Amino Acid氨基酸柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为80%(V:V)的乙腈-水溶液,流动相B为7%(V:V)的乙腈-CH_3COONa溶液(pH=6.5);检测波长为254 nm。结果 21种氨基酸在0.0019~2.700mmol/L内呈良好的线性关系(r~20.9990)。游离氨基酸平均回收率在97.80%~116.82%之间,RSD在1.93%~2.47%之间(n=6);水解氨基酸平均回收率在99.26%~111.23%之间,RSD在1.70%~2.23%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合对狭叶红景天中氨基酸含量的测定。