金黄色葡萄球菌LAMP可视化快速检测方法的建立

建立金黄色葡萄球菌LAMP可视化检测方法。通过对2套引物的筛选,最终选取nuc基因的6条引物建立LAMP反应体系。整个反应在63℃恒温条件下进行45min,即可通过肉眼直接对反应结果进行判定。对金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为0.001ng/μL,且与其他致病菌无交叉反应。该方法快速、特异性高,操作简便,适合基层快速检测。     

金黄色葡萄球菌及其快速检测方法

金黄色葡萄球菌(Saphylococcus aureus)是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种重要细菌,在自然界中分布广泛.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特点及其致病性进行了简要综述,并重点介绍了金黄色葡萄球菌的几种快速检测方法.     

金黄色葡萄球菌检测方法概论

近期，人们想起了淡忘很久的一个词：金黄色葡萄球菌，你可以忘记对它的检测，可它不会忘记自己的使命——繁殖。     

基于纳米金显色的非标记核酸适配体可视化检测重金属镉的方法研究

目的建立以特异性非标记核酸适配体为识别探针的重金属镉可视化检测方法。方法根据适配体与镉的高亲和力结合特性,利用纳米金溶液在盐诱导下凝聚后引起的颜色变化反应,通过分光光度计检测溶液的吸光度来检测镉离子浓度。通过优化适配体DNA浓度、盐离子浓度和纳米金溶液体积,确定最佳反应条件,建立样品溶液中镉离子浓度与吸光度的线性关系。结果该方法的线性范围和检测限分别是0.14~10 ng/m L和0.14 ng/m L,可以满足痕量检测要求。通过对灌溉水样的加标回收实验证明,检测体系具有很好的实用性和复杂基体适应性。结论利用核酸适配体和纳米金显色实现了镉的痕量可视化检测,该方法是一种简单、快速、灵敏的检测方法,在现场快速检测和高通量分析中都具有很好的应用前景。     

基于可视化环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为：1.6 μmol/L内引物（FIP和BIP）,0.2 μmol/L外引物（F3和B3）,4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶,120 μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60 ℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物（LF和LB）反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。     

食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究

对MPN法、Baird-Parker法和纸片法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果进行了比较研究。结果显示,纸片法和B-P法与MPN法符合率分别为80%和87.5%,纸片法和B-P法检测结果无显著差异(P>0.05),线性相关关系极为显著(R2=0.910)。因此,这三种方法的检测结果有较好的一致性。由于纸片法在简便性、劳动量、检测准确性、检测时间等方面的比较中优于其它两种方法,建议其在相关行业中得到推广应用。     

食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究

对MPN法、Baird-Parker法和纸片法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果进行了比较研究。结果显示,纸片法和B-P法与MPN法符合率分别为80%和87.5%,纸片法和B-P法检测结果无显著差异（P>0.05）,线性相关关系极为显著（R2=0.910）。因此,这三种方法的检测结果有较好的一致性。由于纸片法在简便性、劳动量、检测准确性、检测时间等方面的比较中优于其它两种方法,建议其在相关行业中得到推广应用。      

食品中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的重要致病菌之一,检测食品中金黄色葡萄球菌对于预防和控制金黄色葡萄球菌引起的食物中毒具有重要意义。论述和分析了传统培养方法、传统检测方法的改进、免疫学方法、以分子生物学为基础的快速检测方法以及商业化快速检测方法。      

食品中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的重要致病菌之一,检测食品中金黄色葡萄球菌对于预防和控制金黄色葡萄球菌引起的食物中毒具有重要意义。论述和分析了传统培养方法、传统检测方法的改进、免疫学方法、以分子生物学为基础的快速检测方法以及商业化快速检测方法。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子,目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中,曾有过多种检测肠毒素的方法,通过对各种检测方法的原理及特点的概述,介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是主要的食源性致病菌之一。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。本文综述了Real-time PCR技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望。      

发酵食品中金黄色葡萄球菌快速检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌的检验在发酵食品检测中具有重要意义。该文介绍了金黄色葡萄球菌的各种快速检测方法的原理、研究进展，并对目前常用的各种快速检测方法在检测限、特异性、检测速度、简便性、检测成本、自动化程度等方面进行了比较。最后对金黄色葡萄球菌快速检测方法的发展方向及其在发酵食品生产企业中的应用进行了展望。     

食品中金黄色葡萄球菌PCR-ELISA检测技术建立

针对食品中金黄色葡萄球菌检测,选取金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因作为靶标,利用地高辛标记引物扩增的PCR产物与生物素标记的探针杂交,然后与ELISA平板上的链霉素杂交,通过抗地高辛抗体显色建立PCR-ELISA检测技术。应用该方法检测人工污染牛奶中金黄色葡萄球菌,同时将大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单增李斯特菌等常见食源性致病菌作为阴性对照。结果显示,金黄色葡萄球菌的纯培养物以及人工污染金黄色葡萄球菌牛奶,金黄色葡萄球菌为阳性,其他对照菌为阴性,两者PCR-ELISA检测敏感性均为10¹CFU/m L,比普通PCR检测的敏感性（10³CFU/m L）高100倍。因此,该研究建立的PCR-ELISA方法具有良好的特异性与敏感性,能够特异、敏感、准确地检测牛奶中的金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄菌的快速鉴定、风险评估与有效监测提供重要技术手段。      

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

鉴定金黄色葡萄球菌的多重PCR方法

建立了一种快速鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌的多重PCR方法。利用金黄色葡萄球菌的特异基因、耐甲氧西林基因和4种肠毒素基因nuc、mecA和sea、sec、sed、see建立6重PCR反应体系,并对PCR体系,引物浓度进行优化。6对PCR引物均能特异地扩出相应的目的基因。对47株金黄色葡萄球菌的检测结果与应用单重PCR鉴定结果完全一致。实验所建立的多重PCR方法能在一个反应体系中鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效的检测手段。     

食品中金黄色葡萄球菌概况及新型检测技术研究进展

金黄色葡萄球菌是食品中常见的食源性致病菌,是引起细菌性食物中毒最普遍的原因之一,感染后可引起人食物中毒、急性肠胃炎和动物腹泻等疾病,严重危害人类安全及健康。因此研究食品中金黄色葡萄球菌的特性及快速准确的检测方法、对及时有效控制病原菌传播、预防食物中毒,减少食源性疾病事件的发生具有重要的现实意义。     

食源性MRSA双色荧光PCR检测方法建立

目的建立快速检测食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)Taqman探针双色荧光PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌种属鉴定nuc基因和MRSA决定因子mec A基因,设计合成引物探针,建立双色荧光PCR扩增体系。利用所建立的方法检测特异性及灵敏度。将金黄色葡萄球菌依次传代培养,检测不同代次的菌株验证方法的稳定性,并对实际样品分离株进行检测验证方法的可行性与实用性。结果该方法可准确并特异性检测出MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),检测MRSA的nuc基因和mec A基因的灵敏度可达2.7×103 CFU/m L,不同代次的菌株的检测结果一致。结论本实验所建立的双色荧光PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度及稳定性,可用于快速检测食源性MRSA。     

单测试片法定性快速检测乳中金黄色葡萄球菌的研究

目的 建立单测试片定性快速检测乳中金黄色葡萄球菌的方法。方法 选择7.5%氯化钠肉汤增菌液, 使用拍打式均质器, 匀浆时间1~1.5 min进行样品处置。采集不同基质样品, 设计多种方案对研究单测试片方法、国标方法与测试片方法同时进行验证。结果 该方法检测金黄色葡萄球菌特异性高, 特异性达到96.7%。最小检出量0.5 CFU/mL。阳性检出率高。结论 该方法准确性可靠, 特异性、灵敏度都高, 检出限低, 适用于乳中的金黄色葡萄球菌快速定性检测。     

国标培养法与2种金黄色葡萄球菌快速筛检方法的比较

目的将mini-VIDAS法和膜芯片2种快速筛检方法与国标培养法进行比较,评估2种快速筛检方法的效果和可操作性。方法以金黄色葡萄球菌为目标菌,针对3种筛检方法设计灵敏性、特异性、抗干扰性实验和人工污染实验,通过比较获得3种筛检方法的应用效果情况。结果国标培养法和mini-VIDAS法的灵敏性较好,mini-VIDAS法和膜芯片法的特异性和抗干扰性较好,人工污染实验中3种方法的结果均符合设计预期。结论日常检验中可采用国标培养法和mini-VIDAS法进行筛检工作,应急任务可使用膜芯片法,以缩短筛检时间,mini-VIDAS法和膜芯片法是金黄色葡萄球菌快速筛检的可靠工具。