植物乳杆菌C010产细菌素的分离纯化及理化稳定性分析

为从植物乳杆菌C010 (Lactobacillus plantarum C010)发酵液中分离提纯出细菌素，实验采用硫酸铵沉淀、有机试剂萃取、pH吸附解析3种方法对L.plantarum C010发酵液进行粗步提取，通过Sephadex G-25、Sephadex LH-20凝胶层析结合半制备液相色谱法分离出单一抑菌活性组分物质，并对其结构及理化稳定性进行分析。结果表明，L.plantarum C010发酵液的3种粗提方法中，有机试剂萃取显著优于硫酸铵盐析和吸附解析(P<0.05);再经凝胶层析和半制备液相色谱分离得到单一组分抑菌活性物质，经EI质谱(electron ionization, EI)和核磁共振图谱分析，该活性物质分子质量为260.116 1 Da的环(L-苯丙氨酰-反式-4-羟基-L-脯氨酸)二肽，为首次从乳酸菌中分离提取到的细菌素(命名为Plantarum C010)。进一步理化稳定性分析，该细菌素对多类蛋白酶耐受性强，耐热性强、耐强酸，但pH>5.0时，对韩国假单胞菌PS1和梭状芽胞杆菌J4抑菌活性显著下降(P<0.05)甚至失活。该结果为L.p...     

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中10种氨基糖苷类药物残留

目的 建立了利用QuEChERS净化高效液相色谱-串联质谱法同时检测禽蛋中10种氨基糖苷类药物(潮霉素B、阿米卡星、安普霉素、卡那霉素、庆大霉素C1、庆大霉素C1a、庆大霉素C2、巴龙霉素、西索米星、奈替米星)残留的方法。方法 样品经5% (V/V)三氯乙酸振摇提取,QuEChERS净化,采用Amide高效液相色谱柱分离,以1% (V/V)甲酸水和90% (V/V)乙腈水进行梯度洗脱,外标法定量。结果 在20-1000 μg/L质量浓度曲线范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,方法的检出限为0.2 mg/kg,定量限为0.5 mg/kg,对各种基质进行1、2、10倍定量限进行3水平的加标实验,平均回收率(n＝6)为63.6-119.0%,相对标准偏差为0.9-7.5%。利用该方法对市场销售的鸡蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋各20批次进行检测,均未检出氨基糖苷类化合物。结论 该方法利用QuEChERS净化可以更简便、快速、准确的实现禽蛋中10种氨基糖苷类药物残留的检测。     

乳脂中1,3-甘油二酯检测方法的研究

建立一种乳脂中1,3-甘油二酯(1,3-DG)定性定量的检测方法.通过薄层色谱法(TLC)对乳脂中1,3-甘油二酯进行分离和定性,再用甘油氧化酶法进行定量检测.研究结果显示:薄层色谱法能有效分离出1,3-甘油二酯;定量方法RSD小于等于3.78%,回收率在86.73%～101.83%之间.该方法能准确、快速、灵敏地分离检测乳脂中的1,3-甘油二酯.     

反相液相色谱和HILIC对奶制品中三聚氰胺的检测

应用Sepax GP-C8和Sepax Bio-C18柱按照国标(GB/T 22388-2008)对市场上购买得到的奶粉,以及应用Polar-Silica柱对鲜牛奶中的三聚氰胺进行了检测.结果表明,C18体现出比C8更高的分离选择性,避免了应用C8可能出现的假阳性检测结果.应用Polar-Silica检测鲜牛奶中的三聚氰胺,流动相为含挥发性醋酸铵盐的乙腈-水体系,可满足LC/MS的要求.Polar-Silica对三聚氰胺保留强度适中,且待测物在出峰处不会受到鲜牛奶中其它组分的干扰,因此可用于液态奶中三聚氰胺的快速检测与分析.     

液相色谱法测定奶油中苯并(a)芘的研究

目的建立液相色谱法检测奶油中苯并(a)芘的快速检测方法。方法试样中的苯并(a)芘经正己烷溶解提取,通过苯并(a)芘专用SPE小柱分离纯化,液相色谱-配荧光检测器检测,通过保留时间定性、外标法定量。结果该方法检测苯并芘回收率范围在88.4%~98.7%之间,相对标准偏差在1.23%~3.22%之间,最低检出限为0.3μg/kg。结论该方法简单、快速、分离度好,适用于批量样品的测定。     

在线固相萃取-二维色谱快速测定配方奶粉、米粉中维生素D的含量

建立了在线固相萃取结合二维色谱快速测定婴幼儿配方奶粉、米粉中维生素D(VD)含量的方法。样品溶液皂化后经简单定容便可直接检测,进样后样品溶液经第一个六通阀通过在线固相萃取小柱净化,净化液进入一维色谱,一维色谱采用C8色谱柱,进行初步分离,根据维生素D在一维色谱上的出峰时间,确定切换时间,将这一段时间内的流出液经另一六通阀上的捕获柱富集维VD转入二维色谱进一步分离,实现配方奶粉、米粉中VD的快速测定。通过该方法检测得到VD的加标回收率为91. 3%～97. 2%,相对标准偏差<5%,并通过配对t检验法与标准方法测定结果进行比较分析,测定结果无显著性差异。该方法简单、快速、准确,适用于大批量样品检测。     

吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化

吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)是一种新型辅酶,具有广阔的应用前景。传统PQQ检测方法在检测发酵液中PQQ浓度时都存在一定的缺陷,且检测效率偏低。本研究在大肠杆菌(Escherichia coli BL21(DE3))中表达E.coli K-12来源的葡萄糖脱氢酶(PQQGDH),并通过亲和层析分离纯化PQQGDH,得到了高浓度、高纯度的PQQGDH。通过酶液和PQQ样品用量的双因素正交实验对传统重组酶法的反应体系加以改进,得到适用于96孔板高通量检测的反应体系。结果表明30μL纯化后酶液、2μL PQQ样品配合1.2 m L的显色剂组成的显色体系检测效果最佳。该方法线性范围大且具有较高的精确度和重现性。本研究中利用高浓度、高纯度的PQQGDH配合96孔板和酶标仪,所建立的PQQ高通量检测方法,不仅降低了实验误差,而且大幅提高了PQQ发酵液样品的检测效率。     

海洋链霉菌GB-2抗细菌物质的溶解性质和分离纯化

本实验主要对海洋链霉菌株GB-2产生的抗菌物质的溶解性进行了研究,并将其分离纯化.通过对GB-2的发酵液中抗菌物质的溶解性测定,可推知是一种极性较大的水溶性物质.超滤实验发现,抗细菌组分能通过截留分子量(COMW)≤1kD的超滤膜.Sephadcx LH-20色谱柱分离后,经抗菌活性检测发现两个活性峰,其中第1个峰对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性最强.将第1个峰的收集液进一步用高效液相色谱(HPLC)纯化,在图谱上出现两个峰,其中第2个峰具有抑菌活性,表明该物质得到了纯化.     

超滤分离蝙蝠蛾拟青霉胞外多糖工艺优化

为获得超滤膜法分离蝙蝠蛾拟青霉发酵液中胞外多糖的工艺参数,采用切向流超滤比较不同膜组件对该胞外多糖的截留率。结果表明:分别采用0.1μm和100 ku膜组件进行分离,可将发酵液中胞外多糖分为分子质量2 000 ku,100~2 000 ku和100 ku 3部分;通过单因子和正交试验对100 ku膜组件的操作参数如料液比、操作压力、p H进行了优化,得出该膜组件的最佳操作参数为料水比3:2,操作压力0.2 MPa和p H 8.5。在此条件下,膜通量和多糖截留量分别达到19.5 L·m2·h-1和122.47 g·m2·h-1,损失率为2.58%。经HPLC检测,截留液中800 ku多糖组分的纯度达89.7%。与传统的分离方法相比,超滤膜法分离发酵液中胞外多糖具有快速、能耗低和损失率低等优点。     

乙醇-硫酸铵双水相萃取紫色红曲菌发酵液中的红曲色素及其稳定性分析（英文）

建立一种采取乙醇-硫酸铵双水相体系,从紫色红曲菌YY1-3菌株发酵液中简单、高效萃取红曲色素(Monascus pigments,MPs)的方法,利用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)分析提取液的色素成分,并考察了该菌株产红曲色素的稳定性。结果表明:当萃取体系中添加质量分数16%的乙醇和28%的硫酸铵时,MPs的分配系数与回收率达到最大,分别为171.91和98.13%;当上相萃取液-乙醇体积比为1∶0.5时,可有效分离回收上相中的硫酸铵;TLC分析结果表明,萃取液中有6种主要色素组分,其中以红曲红和红曲黄色素为主;色素稳定性实验结果表明,在避光、pH 4～8、25～65℃以及常规金属离子和食品添加剂溶液中,该菌株所产的MPs具有良好的稳定性。