珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤作用初步研究

目的:初步探讨珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤作用。方法:采用MTT法检测珠母贝糖胺聚糖对人宫颈癌Hela细胞、小鼠白血病L1210细胞和人慢性粒细胞白血病K562细胞生长的抑制作用。采用动物体内模型检测马氏珠母贝糖胺聚糖对荷L1210小鼠生命延长率的影响。结果:珠母贝糖胺聚糖PGI、PGII在25¹00μg·mL-1浓度范围内对三种肿瘤细胞有显著抑制作用。在100μg·mL-1时PGI、PGII对小鼠白血病L1210细胞作用最强,抑制率分别达到48.2%与40.4%;PGII与抗癌药物（5-Fu、DDP）合用时对人宫颈癌Hela细胞、小鼠白血病L1210细胞有增敏作用;珠母贝糖胺聚糖具有延长荷L1210小鼠生命的作用,其中100mg·kg-1剂量组的生命延长率达19.3%。      

熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究

为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制,采用80%丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物,通过MTT法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化。结果发现,与空白对照组相比,0.1~1.0 mg/m L熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用,且呈现剂量效应关系,IC50为0.72 mg/m L。0.4、0.6、0.8 mg/m L熊猫豆丙酮提取物处理72 h后的Caco-2细胞,可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带,细胞周期G1期延长,Cyt C、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升。熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖,这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的。     

冬虫夏草菌丝体水提液对SP2/0细胞周期的作用

用四唑篮比色法试验,琼脂糖凝胶电泳方法及流式细胞仪研究了冬虫夏草菌丝体水提液对小鼠骨髓瘤细胞生长、凋亡及细胞周期的影响。结果发现浓度为100mg/ml水提液抑制瘤细胞的增殖,抑制率为70%,使细胞周期阻滞,在DNA电泳出现明显凋亡带,这提示水提液对瘤细胞抑制作用可能是由于细胞周期阻滞诱导细胞凋亡的结果。     

一种红色素对HeLa细胞体外生长的影响

本文研究青霉菌TA150301发酵产物类红曲色素的体外抗肿瘤作用。用倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜和流式细胞仪检测凋亡细胞,Western-blotting检测Caspase-3的表达。结果表明,HeLa细胞随着红色素浓度的升高,细胞凋亡形态较典型;MTT法显示:当红色素质量浓度为200mg/L时,HeLa细胞凋亡率为75.40%;添加红色素达200 mg/L,流式细胞术检测凋亡率为26.58%;与对照组相比,添加红色素使HeLa细胞Caspase-3表达水平上调。该红色素对HeLa细胞有良好的抑制效果,具有浓度依赖性。     

卵叶娃儿藤生物碱对宫颈癌细胞株HeLa的体外作用

为了观察卵叶娃儿藤总生物碱[Tylophora ovata(Lindl.)Hook.ex Steud,alkaloids TOHa]体外抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖、诱导细胞凋亡的作用,将不同浓度的TOHa与HeLa细胞在体外培养,用MTT法观察TOHa对HeLa细胞的生长抑制作用,测定其在490nm的OD值;用细胞形态学、AnnexinV/PI双标记检测细胞凋亡。结果表明,TOHa能抑制HeLa细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。HeLa细胞经TOHa作用后,Annexin V /PI-表达升高,Giemsa染色后出现凋亡细胞的特征性改变。     

紫甘薯汁抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究

目的:研究紫甘薯汁的抗肿瘤活性及其诱导肝癌细胞HepG2凋亡机制。方法:采用Alamar Blue、倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR和Western blotting法检测不同体积分数的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究。结果:与对照组相比,体积分数5%和10%的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞具有抑制作用,呈体积分数依赖性;作用HepG2细胞48h后,能观察到细胞皱缩和凋亡小体以及凋亡细胞典型的梯状DNA条带。RT-PCR和Western blotting法检测结果显示,紫甘薯汁可以诱导HepG2细胞中Fas、FADD、Caspase-3、Caspase-8和p53 mRNA表达水平上调和蛋白表达量增加,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性裂解片段明显增高且Caspase-3酶活性显著提高。结论:紫甘薯汁体外对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过细胞表面死亡受体途径诱导HepG2细胞凋亡,同时p53在此凋亡过程中也起着重要的作用。     

银杏中银杏酸诱导人白血病细胞U937凋亡的研究

目的:研究银杏酸体外对U937细胞生长的抑制作用,探讨其作用机理。方法:采用MTT法检测银杏酸对U937细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化,DNA琼脂糖电泳检测其生化特征的改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:U937细胞经银杏酸作用24～48h,细胞的生长明显被抑制;银杏酸作用28h出现了细胞皱缩、核浓缩、体积缩小等明显的凋亡的形态学特征;细胞DNA经琼脂糖电泳可见典型的梯形条带;10.0μg/ml的银杏酸作用40h后,细胞凋亡率为14%。结论:银杏酸对U937细胞具有明显的抗肿瘤活性,其作用机理与诱导细胞凋亡有关。     

姜黄素对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用研究

本文研究了姜黄素对结肠癌LoVo细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。不同浓度姜黄素作用体外培养的人结肠癌LoVo细胞后,倒置显微镜观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测姜黄素对LoVo细胞的增殖抑制能力;RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA表达水平;Annexin V-FITC/PI标记检测细胞凋亡率;Western blotting和免疫荧光细胞化学染色检测姜黄素作用前后c-myc蛋白表达的差异。结果表明,姜黄素可显著抑制人结肠癌LoVo细胞的増殖,具有明显的量效和时间依赖性,24、48和72 h姜黄素抑制LoVo细胞的IC50分别为(26.45±0.41)、(19.13±0.09)和(10.12±0.04)μmol/L;姜黄素可激活细胞中Bax和Caspase-3的mRNA表达,抑制Bcl-2的mRNA和c-myc蛋白的表达,姜黄素可诱导LoVo细胞发生凋亡。姜黄素通过上调Bax和Caspase-3表达,下调Bcl-2和c-myc的表达来抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖并促使其凋亡。     

NF-κB和Caspase-3在金雀异黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用研究

采用MTT法、形态学观察和琼脂糖凝胶电泳法检测了金雀异黄素(genistein,Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长和凋亡诱导作用,并采用免疫组化法和WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞NF-κB、Caspase-3蛋白的表达情况。结果显示:Gen可抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制NF-κB蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结果提示:Gen抑制NF-κB蛋白表达、增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一。     

牡蛎活性肽体外诱导HeLa细胞凋亡及其作用机制

采用复合酶法水解制备牡蛎活性肽,并运用Sephadex G-25柱层析法对酶解液中的肽类进行分离纯化与鉴定;以磺基罗丹明B(SRB)比色法,台盼蓝计数法,Hochest/PI双荧光染色法和DNA Ladder等检测牡蛎活性肽诱导HeLa细胞凋亡的方式,并采用流式细胞术和实时定量PCR分析牡蛎抗活性肽诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。经分离纯化得到牡蛎活性肽(bioactive peptide of oyster,BPO),并测得其分子质量为751D;BPO能有效抑制HeLa细胞增殖,并阻止HeLa细胞G1期向S期的转换,促使凋亡基因表达上调。BPO的作用机制与诱导凋亡基因表达上调和细胞周期阻滞有关。     

蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的影响

为探讨蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2 增殖和凋亡的影响,采用MTT 法检测蜂胶醇提物对Hep G2 细胞增殖的抑制作用,用荧光倒置显微镜和流式细胞仪分析蜂胶醇提物对Hep G2 细胞凋亡的影响。结果表明：12.5～200μg/mL 质量浓度的蜂胶醇提物作用24、48h 后,均能不同程度地抑制Hep G2 细胞的增殖,呈明显的时间、剂量依赖关系,半数抑制质量浓度(IC50)分别是115、78μg/mL。作用8h 后,Hep G2 细胞出现不同程度的凋亡,凋亡率由6.36% 上升到21.9%,呈现出剂量依赖关系。故蜂胶醇提物可显著抑制人肝癌细胞Hep G2 的生长,诱导其凋亡。     

Lycium barbarum polysaccharide inhibits the proliferation of HeLa cells by inducing apoptosis

BACKGROUND: Lycium barbarum polysaccharide (LBP), isolated with boiling water from the famous Chinese medicinal herb Lycium barbarum fruits, is one of the most important functional constituents in Lycium barbarum. In this study the effects of LBP on cell proliferation, cell cycle and apoptosis in human cervical carcinoma cells (HeLa cells) were investigated. RESULTS: LBP could inhibit the proliferation of HeLa cells by changing cell cycle distribution and inducing apoptosis. In addition, the loss of mitochondrial transmembrane potential (Δψ_m) was observed by flow cytometry and the increase of intracellular Ca²⁺ concentration was detected by laser scanning confocal microscope in apoptotic cells. At the same time, the nitric oxide content, nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase activities were also increased. CONCLUSION: The inhibitory effect of LBP on the proliferation of HeLa cells was caused by inducing apoptosis through the mitochondrial pathway. The results showed that LBP can be developed as a potential chemotherapeutic agent candidate against human cervical cancer. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

川皮苷体外抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用

目的：研究川皮苷的抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用。方法：在体外测定川皮苷对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）和超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力;通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法筛选对川皮苷作用敏感的肿瘤细胞株,并用倒置显微镜和透射电镜观察敏感细胞株在川皮苷作用之后细胞结构的变化。结果：川皮苷在体外对DPPH自由基、•OH和O2－•都具有清除能力,其中对•OH的清除能力突出。同时,人胰腺癌细胞株PANC-1对川皮苷作用敏感,即川皮苷可抑制PANC-1细胞的生长;透射电镜观察发现川皮苷可使PANC-1细胞的细胞核膜破裂,胞质溶出,形成凋亡小体。结论：川皮苷具有显著的体外抗氧化活性,并且可以抑制PANC-1细胞的增殖,在功能食品等领域具有良好的应用前景。     

皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。     

红枣色素对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

探讨红枣色素对H_2O_2诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。体外培养HUVECs,随机分为6组:空白对照组、H_2O_2损伤组、红枣色素低、中、高剂量组(50、150、250 mg/L红枣色素)和阳性对照组(50μmol/L VE),采用显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮盐法检测细胞增殖活力,试剂盒法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,透射电子显微镜观察细胞超微结构。结果表明,红枣色素可保护H_2O_2对HUVECs的损伤作用,能明显改善受损细胞形态、超微结构,显著降低细胞增殖抑制率、LDH活性、细胞凋亡率,明显提高线粒体膜电位水平(P0.05),且存在明显的剂量依赖关系。由此推断,红枣色素对氧化应激诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制细胞凋亡和维持线粒体膜电位有关。     

青蛤多肽的酶法制备及对前列腺癌DU-145细胞的抑制活性

探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性。以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺。经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT）活性筛选得到含有5 个氨基酸的多肽（Ile-Leu-Tyr-Met-Pro）。对所得多肽采用MTT法测定DU-145细胞增殖抑制率;采用倒置显微镜、Hoechst 33258染色及透射电子显微镜技术观察细胞形态学变化;采用荧光法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用线粒体膜电位检测DU-145细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测非转移性克隆23型（nm23H1）蛋白的表达。结果表明：制备青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1 500 U/g、温度45.0 ℃、酶解时间4 h;所得多肽对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间与剂量依赖性;处理后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;其质量浓度和细胞内ROS的表达量呈正相关关系;线粒体膜电位降低率从4.22%提高到25.07%;免疫组织化学法结果显示nm23H1蛋白的表达量增加。青蛤多肽能明显抑制DU-145细胞的增殖,并通过诱导其发生凋亡而发挥作用。     

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI) 荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明：苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100 μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%, 而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为 3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。     

麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡效应研究

目的 本文主要研究麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞的抑制效应。方法 小麦麸皮粉碎后,采用丙酮-碱消化法,获得麦麸结合态多酚物质,命名为：WBBP,用福林酚比色法测定该多酚的含量及提取得率;通过MTT法检测WBBP处理对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制效应,倒置显微镜观察WBBP处理对HepG-2肝癌细胞形态学的影响;采用流式细胞仪检测WBBP处理对HepG-2肝癌细胞周期、凋亡情况以及线粒体膜电位的影响;利用caspases试剂盒检测WBBP作用下肝癌HepG-2细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶活性变化。结果显示,不同浓度的WBBP通过诱导HepG-2肝癌细胞周期在S期阻滞,显著抑制了细胞增殖,且具有浓度依赖性;同时WBBP通过caspase依赖的线粒体凋亡路径诱导HepG-2肝癌细胞凋亡率以浓度依赖的方式增加。结论 麦麸结合态多酚WBBP能够通过显著抑制HepG-2肝癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡来发挥抗肝癌效应。     

纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用

目的:研究纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用。方法:通过酸沉、有机溶剂提取以及活性炭吸附等方法从纳豆发酵液中提取纳豆脂肽。MTT法测定纳豆脂肽对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测纳豆脂肽对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。结果:纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖有显著抑制作用且抑制率随纳豆脂肽浓度的增加而上升,其IC50为3.68μg/mL。纳豆脂肽可以影响MCF-7细胞的凋亡率,并将细胞周期阻滞在S期。结论:纳豆脂肽能显著抑制体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,引起人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。