冻干水痘减毒活疫苗的稳定性

目的 观察冻干水痘减毒活疫苗的稳定性。方法 将样品分别放37℃、22℃、8℃、-15℃及-70℃,不同时间取出,采用蚀斑形成单位（PFU）分别测定样品毒力滴度。结果-15℃以下保存5年或8℃保存92周,疫苗滴度仍很稳定,8℃保存100～124周滴度缓慢下降,但仍保持在规程规定的标准以上。22℃保存30周滴度不变。37℃（模拟长期老化试验）保存1周,滴度下降不超过一个对数指数。37℃保存4周,病毒滴度下降缓慢。结论 水痘 减毒活疫苗稳定性良好。     

国产水痘减毒活疫苗的稳定性观察

目的观察国产水痘减毒活疫苗的稳定性。方法取40批上海生物制品研究所有限责任公司(以下简称上海公司)2007~2013年生产的水痘减毒活疫苗,按照国家食品药品监督管理局批准的水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的要求进行各项检定:在0月进行热稳定性试验;在0和18月进行鉴别试验、物理检查、水分检测、无菌检查、异常毒性检查、牛血清白蛋白残留量检测、抗生素残留量检测(2010年10月以后生产的疫苗);在0、6、12、18月进行病毒滴定。结果上海公司2007~2013年生产的水痘减毒活疫苗在有效期内各项指标检定结果均符合水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的相关要求。结论上海公司生产的水痘减毒活疫苗质量稳定,安全有效。     

水痘-带状疱疹病毒Oka株在人二倍体细胞株SV-1上的遗传稳定性及基因序列差异位点分析

目的研究水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株在人二倍体细胞株SV-1上的遗传稳定性,并对不同代次毒株进行全基因测序及差异位点分析。方法将VZV Oka株在SV-1细胞株上连续传至48代,检测病毒滴度。对VZV Oka株33、35、38、39及48代病毒进行全基因测序,应用DNASTAR.Lasergene.v 7.1软件进行数据的拼接及序列分析。结果 VZV Oka株在SV-1细胞上连续传代获得的33~48代病毒滴度在4.000~4.625 lg CCID50/ml之间,病毒滴度的算数平均值为4.292 lg CCID50/ml;VZV Oka株基因组全长125 114 bp,GC含量46%;33、35、38、39、48代病毒的核苷酸序列同源性为99.99%,这5代病毒与标准疫苗株V-Oka的核苷酸序列同源性为99.96%;VZV Oka株在MRC-5、SV-1细胞上制备的38代病毒全基因序列有1个差异位点;本研究中的各代次病毒基因序列高度同源,与Varivax和Varilrix疫苗株、野毒株Dumas及亲本株p-Oka相比,与疫苗株V-Oka的同源性最高。结论 VZV Oka株在SV-1细胞上的适应性及遗传稳定性均良好。     

国产冻干水痘减毒活疫苗质量达世界先进水平

<正>水痘是由水痘-带状疱疹病毒引起的急性传染病,主要发生于儿童,也是严重危害儿童键康的传染病之一。我国是水痘流行较为严重的国家,易感者接触后90％的儿童可发病。水痘的危害性不仅在于发生水痘疱疹,还在于感染后的并发症甚至病毒长期潜伏于脊神经后跟神经节内,多年后发生带状疱疹。 最近,在京召开的国产水痘疫苗应用研讨会上获悉,长春生物制品研究所率先研制成功了冻干水痘减毒活疫苗。在此之前,我国尚无预防水痘的疫苗,仅能少量依靠进口,而且价格昂贵,广大易感儿童得不到预防接种,水痘的流行得不到扼制。 长春生物制品研究所从1994年开始着手研制冻干水痘     

水痘-带状疱疹减毒活疫苗毒种(Oka株)制备方法的改进

目的改进水痘-带状疱疹减毒活疫苗毒种(Oka株)的制备方法,提高毒种的病毒滴度及稳定性,延长保存时限。方法分别采用原法(病毒吸附感染法)和改进的方法(病毒混合感染法)制备水痘-带状疱疹病毒Oka株工作种子批,采用蚀斑法检测病毒滴度及-70℃保存0、1、6、12个月的稳定性,并各制备出3批疫苗进行全面检定。结果采用病毒混合感染法和病毒吸附感染法制备的毒种病毒滴度分别为6.6和6.5 lgPFU/ml,病毒混合感染法制备的毒种在-70℃以下保存12个月,病毒滴度无明显下降;病毒吸附感染法制备的毒种-70℃以下保存6个月,病毒滴度下降明显。两中方法制备的水痘减毒活疫苗成品的各项检定结果均符合要求,病毒滴度及37℃稳定性无明显差异。结论采用病毒混合感染法制备的毒种提高了病毒滴度和-70℃保存的稳定性。     

麻腮风水痘联合减毒活疫苗的稳定性观察

目的观察中试阶段制备的麻腮风水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的稳定性。方法将检定合格的3批中试阶段制备的MMRV联合减毒活疫苗分别置-20℃、2~8℃、室温(25℃)和37℃,定期对其病毒滴度进行检测;在0和18月进行鉴别试验、物理检查、水分检测、无菌检查、异常毒性检查、牛血清白蛋白残留量检测、抗生素残留量检测。结果 -20℃放置18个月,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于4.55 lg CCID_(50)/ml、5.05 lg CCID_(50)/ml、3.80 lg CCID_(50)/ml和4.65 lg PFU/ml;2~8℃放置18个月,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于4.05 lg CCID_(50)/ml、4.93 lg CCID_(50)/ml、3.80 lg CCID_(50)/ml和4.32 lg PFU/ml;25℃放置6周,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于3.80 lg CCID_(50)/ml、4.43 lg CCID_(50)/ml、3.93 lg CCID_(50)/ml和3.87 lg PFU/ml;37℃放置4周,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于3.80 lg CCID_(50)/ml、4.43 lg CCID_(50)/ml、3.93 lg CCID_(50)/ml和3.84 lg PFU/ml。其他各项指标检测结果均符合制造及检定规程要求。结论冻干MMRV联合减毒活疫苗稳定性良好。     

水痘-带状疱疹病毒Oka株gC基因的克隆及序列分析

目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株gC基因进行克隆及序列分析。方法取第40代Oka VZV疫苗株,反复冻融3次后,收集上清,提取病毒DNA,根据NCBI登录的Dumas株VZV序列,设计引物,扩增gC基因,与pMD19-T Vector连接后,热转化至E.coli Competent Cells JM109中,挑选阳性菌落进行测序;将得到的序列与Gen Bank中登录的其他12株VZV毒株的gC基因序列,进行核苷酸序列和氨基酸水平分析。结果 13株VZV-gC基因开放阅读框(ORF)的核苷酸长度为1 557~1 776 bp,编码的蛋白由519~592个氨基酸组成。核苷酸序列同源性在94.8%~100%之间,氨基酸序列同源性在93.9%~100%之间。R2重复拷贝数为7,Dumas、SVETA和Ellen重复拷贝数为6,LAX1为4。结论 VZV Oka株gC蛋白具有高度的保守性,与其功能的发挥密切相关。     

国产冻干水痘减毒活疫苗免疫持久性达国际领先水平

长春生物制品研究所早在十几年前,就在国内率先研制成功了冻干水痘减毒活疫苗(胜豆士)。这种疫苗采用WHO推荐的免疫原性好、接种反应轻的日本Oka株人二倍体2BS细胞和自行研制的冻干保护剂制备,免疫效果和稳定性均达国际领先水平。该疫苗自1999年在国内婴幼儿中大面积推广接种以     

冻干水痘减毒活疫苗的生产工艺

目的以MRC-5人二倍体细胞为基质,建立制备Oka株水痘减毒活疫苗的生产工艺。方法Oka株水痘病毒在MRC-5细胞上培养,收获细胞,经冻融,超声波,纯化,澄清,冻干等工序,生产8批疫苗,按规程要求进行检定。结果 各项指标全部合格,制品质量稳定,37℃ 7d热稳定性良好,儿童免疫后抗体阳转率为92.7％。结论 工艺流程合理,制品质量符合WHO规程要求,免疫后副反应甚微,免疫原性良好。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗Oka株感染小鼠的生物学特性比较

目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。     

甲型肝炎减毒活疫苗稳定性的研究

本文对甲型肝炎病毒L－A－1疫苗珠制备的多批减毒活疫苗放置不同温度、不同时间及反复冻融后的疫苗病毒的稳定性进行研究。结果表明,疫苗置－20℃16个月、4～8℃3个月,室温1周,35℃1天,疫苗清度仍达到≥6.5LogTCID50／ml的合格滴度。疫苗置室温3、5天后冻存一周,再放置室温3天,冻存一个月,其病毒滴度无明显改变,表明此疫苗稳定性良好,可耐受一定范围高温。     

无明胶冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性

目的观察无明胶冻干水痘减毒活疫苗接种后的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照的方法,将1 398名1～12岁儿童分为试验组和对照组,分别接种无明胶和含明胶冻干水痘减毒活疫苗,观察接种后的安全性;并对其中733名接种者采用膜抗原荧光抗体(Fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)法检测水痘抗体水平,观察疫苗的免疫原性。结果试验组与对照组接种后全身反应的总发生率分别为11.49%和14.96%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。全身反应以发热为主,试验组中度发热反应(37.6～39.0℃)的发生率(0.57%)显著低于对照组(1.71%)(P<0.05);试验组(3.02%)与对照组(2.99%)局部反应的发生率差异无统计学意义(P>0.05),主要表现为疼痛、红肿和瘙痒。试验组和对照组接种前的抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶5.83和1∶6.04;接种后的GMT分别为1∶89.15和1∶94.44,抗体阳转率分别为98.91%和98.37%,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论无明胶冻干水痘减毒活疫苗的免疫原性等同于含明胶冻干水痘减毒活疫苗,且能明显降低中度发热反应的发生率。     

麻疹减毒活疫苗S191生产用毒株的遗传稳定性

目的分析麻疹减毒活疫苗S191生产用毒株病毒结构基因的遗传稳定性。方法将北京天坛生物制品股份有限公司(天坛生物)用于麻疹疫苗生产的S191株25代病毒(S191-BJ25)传至29代(S191-BJ29),上海生物制品研究所保存的S191株24代病毒(S191-SH24)传至33代(S191-SH33)。从S191株传代病毒中提取RNA,对病毒结构基因片段N、M、F、H进行扩增及测序。将测序结果与GenBank中1994年收录的S191株麻疹病毒的相应序列进行比较分析。结果S191-BJ25传代病毒N、M、F、H4个基因的总突变率为0.02%,S191-SH24传代病毒为0.15%;与1994年的S191疫苗株相比,S191-BJ25传代病毒N、M、F、H4个基因的总突变率为0.3%,S191-SH24传代病毒为0.4%。结论目前天坛生物使用的麻疹疫苗S191株生产用三级种子库具有可靠的遗传稳定性,从主代种子到疫苗的传代过程中,N、M、F、H结构基因表现出稳定的分子遗传特征。目前使用的S191毒株的4个结构基因较1994年以前的疫苗株发生了变化,但目前没有证据表明这些变化对免疫原性产生不利影响。     

冻干水痘减毒活疫苗免疫持久性观察

目的观察国产冻干水痘减毒活疫苗的免疫原性和免疫持久性。方法选免疫前抗体阴性的健康易感儿童,随机分为3组,分别接种原倍疫苗、稀释疫苗及对照疫苗,并于接种后每年采集静脉血,用FAMA法测定抗体。结果原倍疫苗组和稀释疫苗组免疫后1~5年,平均抗体阳性率分别为91·05%、89·39%、95·56%、97·27%和98·76%。免疫后1年与5年抗体阳性率及抗体GMT比较,差异均无显著意义。原倍疫苗组和稀释疫苗组抗体阳性率及抗体GMT比较,差异亦无显著意义。接种原倍和稀释疫苗的两组与对照组比较,差异无显著意义。结论国产冻干水痘减毒活疫苗具有良好的免疫原性及免疫持久性。     

麻疹减毒活疫苗冻干工艺的优化

目的优化麻疹减毒活疫苗的冻干工艺。方法以预冻过程(温度、时间)、升华干燥过程(温度、时间、真空控制值)、解析干燥过程(温度、时间、真空控制值)冻干参数为影响因素,应用L(827)正交试验设计冻干曲线,对8批麻疹减毒活疫苗半成品进行冻干,采用直观分析法的综合平均值R()iⅠ和极差R(i)j分析不同批次冻干制品的干损率、病毒滴度、热稳定性和残余水分,筛选最优因素水平组合,并对其进行适用性验证。结果优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺参数为:预冻:温度5～-25℃、时间0.5h,温度-25～-40℃采用大于1℃/min的冻结速率,温度-40℃、保持时间3h;升华干燥:温度-40～-20℃、时间1.5h、真空控制值0.16mbar,温度-20℃、保持时间8h、真空控制值0.16mbar,温度-20～30℃、时间5h、真空控制值0.16mbar;解析干燥:温度保持30℃、时间6h、真空控制值0.005mbar,以优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺冻干的制品成型良好,干损率平均为1.36%,稳定性好,残余水分在1.62%～1.67%之间。结论优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺适合麻疹疫苗大规模生产。     

国产水痘减毒活疫苗在免疫损害病人中的应用

目的观察国产Oka株水痘减毒活疫苗在急性白血病、实体肿瘤和接受免疫抑制剂治疗的免疫损害病人中的反应原性和抗体应答。方法国产Oka株水痘减毒活疫苗接种于3种免疫损害病人,用ELISA法检测免疫前和免疫后抗体水平,并观察副反应情况。结果接种疫苗的3种病人均无异常反应发生,仅有少数病人在观察期内有中强程度发热,其中以实体肿瘤病人略多。3种病人接种前多数抗体阳性,经疫苗免疫后,抗体滴度均有不同程度上升,正在使用免疫抑制剂者抗体滴度上升不明显。结论免疫损害病人接种国产水痘减毒活疫苗是安全有效的。     

冻干水痘减毒活疫苗的接种反应及免疫原性观察

目的观察国产冻干水痘减毒活疫苗的接种反应及免疫原性。方法选择460名观察对象,于接种后30min、6h、24 h、48 h、72 h、4～10 d进行随访,观察一般反应和异常反应,通过电话和自动报告收集30 d内的异常反应。采用膜免疫荧光抗体法(FAMA)检测观察对象免疫前后的抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗体水平,并计算抗体阳性率、抗体几何平均滴度(GMT)及增长倍数。结果460名观察对象接种疫苗后,在观察期未观察到严重的局部反应和全身反应,也未观察到异常反应,抗体总阳性率为98.31%,免疫后抗体GMT水平平均为147.38,比免疫前提高38.18倍。6～12岁组免疫后抗体GMT水平高于1～5岁组,且差异有统计学意义。结论国产冻干水痘减毒活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃保存的稳定性

目的评价口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃保存的稳定性。方法将-20℃保存1～7年的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型单价疫苗半成品各随机抽取5～11个批次,采用微量细胞病变滴定法进行病毒滴度测定,分析样品的病毒滴度变化。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价疫苗半成品保存5年,滴度仍达到《中国药典》三部(2005版)的要求;保存6和7年,Ⅰ型半成品滴度仍符合上述要求,Ⅱ型半成品滴度合格率均为80%,Ⅲ型半成品合格率分别为60%和20%。结论口服脊髓灰质炎减毒活疫苗单价半成品在-20℃下保存具有良好的稳定性,与Ⅰ型、Ⅱ型相比,Ⅲ型稳定性相对较差。     

我国自行研制的冻干水痘减毒活疫苗的临床效果评价

目的考核和评价我国自行分离毒株研制的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照的原则进行设计,在2～6岁健康人群中进行开放式临床观察。结果试验疫苗共接种易感儿童738人,接种后的总体中强发热反应率为5.96%(44738),皮疹水痘样皮疹发生率为0.68%(5738);易感者接种39810PFU、2000PFU以及500PFU病毒量的疫苗后,抗体GMT分别为36.4、34.3和18.6;抗体阳转率分别为100%、98.77%和85.42%。结论我国自行研制的水痘疫苗具有较好的安全性和免疫原性。     

不同代次毒种冻干风疹减毒活疫苗的临床反应及免疫原性观察

目的　观察风疹BRDⅡ 3 0、3 1和 3 2代次毒种的免疫原性和反应原性。方法　选择风疹血清HI抗体阴性儿童 2 77名和女青年 141名 ,各随机分 3组 ,分别接种由 3 0、3 1和 3 2代毒种制备的风疹疫苗 ,观察接种反应及血清学效果。结果　儿童组的血清中HI抗体阳转率分别为 97.8%、98.9%和 98.9% ;GMT分别为 2 78.7、2 3 7.1和 2 92 .9,女青年组HI抗体阳转率分别为 94.8%、97.5 %和 10 0 .0 % ;GMT分别为 10 1.5、13 2 .9和 96.6。 3批疫苗间免后HI抗体阳转率和GMT差异无显著意义。结论　风疹毒种从 3 0～ 3 2代间的生物学特性是稳定的 ,均可用于疫苗的生产。