从白蚁中分离筛选纤维素分解菌及其产酶性质

以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为惟一碳源对白蚁悬液进行富集培养,并从中分离菌株32株,通过纤维素刚果红初筛平板获得透明圈较大的8株菌,在此基础上进行摇瓶复筛,得到1株酶活较高的菌株(B3).同时对其酶促反应温度、稳定性及其酶作用底物进行了测定.结果表明:CMCase的最适酶促反应温度为50 ℃,且在该温度下有较强的稳定性,保温30 min酶活基本保持不变,60 min酶活损失约14%,菌株B3所产纤维素酶对玉米秸秆纤维素粉有较强的水解能力,同时对滤纸和脱脂棉也有一定的降解能力.     

高效降解纤维素真菌的筛选与鉴定

采集校园内腐质土壤,利用刚果红羧甲基纤维素钠初筛培养基、干稻草粉产酶培养基,通过水解圈与菌落直径的比值、滤纸酶活筛选及微生物鉴定得到高效降解植物纤维素的霉菌。结果表明,在刚果红初筛培养基上筛选出一株高产纤维素酶霉菌,其产滤纸酶活达到247.48U/mL。通过菌落形态、镜下形态及转化感受态细胞DH5α,鉴定出此霉菌为枝状枝孢霉(Cladosporium cladosporioides),具有较高的降解天然纤维素的能力,是一株有研究开发潜力的纤维素酶生产菌株。     

大围山森林土壤中高产纤维素酶菌株的筛选及鉴定

通过初筛（刚果红纤维素水解试验和滤纸条分解试验）和复筛（利用3,5-二硝基水杨酸法测定内切纤维素酶活,滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活）,从大围山原始森林土壤中筛选高产纤维素酶菌株,获得4株具有高产纤维素酶活性的菌株。其中一株真菌16-7分解纤维素能力最强且酶活稳定,其内切羧甲基纤维素酶活为265.76U/mL,滤纸酶活为86.44 U/mL,β-葡萄糖苷酶活为39.16 U/mL;对真菌16-7分别进行形态学观察、分子生物学鉴定,初步确认为小刺青霉（Penicilliumspinulosum）。     

原始森林高产纤维素酶刺器腐霉的筛选鉴定

采用羧甲基纤维素钠(carboxyl methyl cellulose, CMC-Na)为唯一碳源,从广西罗城县原始森林腐木下的土壤中初步筛选分离出具有降解纤维素能力的菌株,结合刚果红染色,确定透明圆的直径大小,进一步判断纤维素的分解能力;并对其进行形态描述和显微观察。最后筛选分离得到4株产酶菌株,将其接种于液体发酵培养基,通过测定葡聚糖内切酶(endo-glucanase, CMCase)酶活力,经刚果红染色法证明H-2菌株在CMC-Na 筛选平板上形成的透明圈和菌落直径最大,产羧甲基纤维素酶的能力强。液体发酵粗酶活测定发现,H-2菌株羧甲基纤维素酶活力达130 U/mL 。H-2菌株形态特征和ITS序列建系统进化树鉴定为刺器腐霉(Pythium acanthophoron)。     

香蕉及茶叶中纤维素酶产生菌的筛选

本实验从香蕉茎叶、茶叶及香蕉土壤、茶土壤环境中经初筛和复筛分离纯化出16株产纤维素酶的菌株,对其菌株的外在特性和产酶活力进行了研究和测定。结果从培养基来看,产酶菌株以从牛肉膏蛋白胨中性培养基里分离出来的为最多（5株）;体原料来源,以从土壤环境中分离出的菌株居多（10株）。菌株多为乳黄色（8株）和蓝绿色霉菌（3株）。水解圈以半透明的居多（12株）,且16株菌株的水解圈与菌落直径比在1.0-2．0之间居多（10株）。产酶菌株的酶活和水解圈的透明状态基,树目符,即水解圈为透明状态的菌株酶活值较大,而水解圈为半透明状态的菌株酶活值相对较小;其中以查中香土10^-2-2-1的酶活值最大,为4．5。     

纤维素酶高产菌的筛选和鉴定

从兰州榆中县兴隆山国家自然保护区采集土样,先用羧甲基纤维素钠刚果红培养基筛选出79株Hc值较大的产纤维素酶菌株,再经液体发酵复筛测CMC酶活和滤纸酶活.结果表明,经复筛后菌株No-15A的纤维素酶活力最高,羧甲基纤维素酶活1 376.20 U/mL,滤纸酶活497.78 U/mL,其粗酶液分解滤纸快速明显,且该菌株生长速度最快,每日菌落直径增长量为4～5 cm.经形态学初步鉴定菌株No-15A属青霉.     

降解南瓜纤维素菌株的分离筛选及酶活测定

目的:筛选出能高效降解南瓜纤维素的菌株,以制备南瓜可溶性膳食纤维。方法:从土壤、腐烂的树叶和水果上分离出具有降解南瓜纤维素的菌株,用刚果红染色透明水解圈进行初筛,然后用CMC-Na、滤纸和南瓜渣为碳源测所有菌株及混合菌株的羧甲基纤维素酶活力,最终选出1株酶活力较高菌株进行下一步实验。结果:共分离到能够有效降解纤维素的共有5株细菌和7株真菌,通过测单菌株和混合菌株的酶活力,表明混合菌株的酶活力最大值比单菌株的酶活力最大值要高3倍之多。结论:混合菌株的酶活力比单株菌酶活力值高,发酵培养72h南瓜渣可溶性多糖降解力最强。     

一株人体肠道产纤维素酶菌的筛选、鉴定及酶活分析

以滤纸作为唯一碳源,成功从人体肠道微生物中筛选分离出1株产纤维素酶的菌株H1。分离富集后的菌株用纤维素刚果红培养基进行筛选鉴定、革兰色染色、对菌株进行分类并对该菌种进行CMC酶活测定与分析、分子鉴定。H1在纤维素刚果红平板上能呈现阳性反应;镜检发现,H1菌株为短杆状,革兰色阴性菌;该菌株在13h酶活最大,为0.8U左右;分子鉴定结果为假单孢菌属。     

甘薯渣发酵制备低聚糖的自然菌株筛选初鉴

将从自然界土壤中获得10株降解菌以纤维素水解圈与淀粉水解圈为指标进行初筛,并以发酵液中低聚糖产量为指标进行复筛,确定了X1菌种发酵低聚糖的产量最高。参照《链霉菌鉴定手册》,结合电镜形态特征、培养特征和生理生化试验结果,初步判定菌株X1为链霉菌属白孢类群。研究结果表明利用自然界微生物法降解甘薯渣制备低聚糖的方法具有可行性。     

山西老陈醋发酵阶段一株产酶芽孢杆菌的分离与鉴定

从山西老陈醋酒化阶段和醋化阶段分离筛选产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的芽孢杆菌。初筛以水解圈与菌落直径的比值为衡量标准;复筛采用DNS法和福林酚法对分离菌株的粗酶提取液进行淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶酶活力的测定。结果表明:获得1株芽孢杆菌JX4-13。该株菌的淀粉酶、酸性蛋白酶和纤维素酶酶活力均相对较高。经形态观察、生理生化反应及16SrDNA鉴定,菌株JX4-13为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

产纤维素酶细菌菌株的分离鉴定及产酶条件优化

该实验分离鉴定了高产纤维素酶细菌菌株并探究其产酶条件。 采用3种培养基进行分离筛选。 经菌落形态观察、16S rRNA基 因序列分析菌株在系统分类地位。通过单因素试验确定最适产酶条件。结果表明,从西岭山原始森林保护区土壤中筛选到1株高产纤 维素酶细菌菌株,鉴定为伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）。 其最适产酶条件：碳源为麦麸,最佳氮源为酵母粉,接种量为2% （V/V）,初始pH值为7,产酶时间为48 h。在此条件下,酶活最高可达2.76 U/mL。酶学特性研究显示,在pH5.0、温度60 ℃条件下CMCase 酶活力最高。     

一株产纤维素酶真菌的筛选及其对秸秆的降解效果研究

为了筛选新的降解玉米秸秆的高产纤维素酶真菌,本研究从全国不同区域采集了大量的半腐秸秆、半腐木材和富含腐殖质的土壤。通过常规分离方法共分离得到120株真菌分离物。利用纤维素刚果红培养基培养、测定滤纸酶活和羧甲基纤维素(CMC)酶活、玉米秸秆粉降解实验对分离到的120株真菌进行了三重筛选,获得了一株高产纤维素酶的真菌MC-1,并对比了MC-1、产纤维素酶木霉菌对照菌株及二者混合发酵液HJ-1对玉米秸秆室内降解效果。结果表明,MC-1在纤维素刚果红培养基上培养72h后水解圈直径达到8.52 cm;培养48h MC-1的CMC酶活为96.31 U/g,滤纸酶活为8.68 U/g,室内秸秆腐解试验表明,秸秆失重率和纤维素分解率均在15 d内迅速升高,之后升高速度放缓。MC-1在处理45 d后秸秆失重率达到了46.84%,HJ-1处理的秸秆失重率和纤维素分解率高于单一菌剂处理。     

赊店老酒酒醅中高产纤维素酶菌种的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒酒醅中采用透明圈法筛选产纤维素酶的菌株,经过酶活力测定筛选出产纤维素酶能力最强的菌株,对其进行了形态学观察、生理生化试验和分子生物学鉴定,并通过单因素和响应面试验考察了不同条件对该菌株产纤维素酶能力的影响。结果表明,筛选得到产纤维素酶能力最强的菌株4-2,并被鉴定为特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）。在液体发酵培养基中,该菌株最优产纤维素酶的条件为淀粉添加量3.5%,酵母粉添加量0.6%,初始pH 5.8,培养时间5 d,培养温度34 ℃。此优化条件下,该菌株产纤维素酶活力达3 101.83 U/mL,是优化前的20.69倍。     

蔗渣纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶活的测定

为充分利用蔗渣,筛选高效降解蔗渣的菌株,本文从堆肥中分离得到有显著透明圈、可产纤维素酶的真菌8株,选其中3株测定了羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活性。结果表明,菌株SC8的透明圈直径、CMCase和FPA活性均最大。经菌落形态特征分析,初步鉴定菌株SC8属于曲霉属(Aspergillus)。相关性分析表明,所筛选菌株在纤维素透明圈直径的大小与CMCase、FPA酶活性成极显著正相关(p0.01)。     

中温大曲产淀粉酶菌株的筛选鉴定及培养条件优化

为获得高产淀粉酶菌株,丰富淀粉酶生产菌株资源,该研究以中温大曲为样品,利用淀粉水解圈法初筛、摇瓶发酵复筛得到高产淀粉酶菌株,结合菌落形态观察、革兰氏染色和16S r RNA同源序列分析对其进行菌种鉴定,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验确定其产淀粉酶的最佳培养条件。结果表明,共分离筛选得到6株产淀粉酶菌株,其中一株产淀粉酶活最高的菌株（编号为DQ47）被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其最佳培养条件为：可溶性淀粉60 g/L,酵母粉37 g/L,发酵温度39℃,装液量85 m L/250 m L,转速175 r/min,初始p H值6,接种量3%。在此优化条件下,淀粉酶活力为8 158.23 U/m L,是优化前的14.75倍。     

抑制阪崎肠杆菌的乳酸菌筛选及其抗菌物质特性研究

目的 从酸菜和大弹涂鱼肠道中分离可产抑制阪崎肠杆菌活性的乳酸菌,并对抑菌物质的特性和抑菌机制进行研究,为其在食品保鲜中的应用奠定基础。方法 利用抑菌圈实验从分离所得的多株乳酸菌中筛选具有抑制阪崎肠杆菌活性的菌株并鉴定,排除酸及过氧化氢的影响后,分析其抑菌产物的特性。分离纯化抑菌物质,并初步探讨抑菌机制。结果 筛选得到一株抑菌效果最好的乳酸菌SA3,经鉴定为发酵黏液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum),其上清液对阪崎肠杆菌抑菌圈直径达到16.94 mm。上清液具有蛋白特性和热稳定性,以乙酸乙酯粗提出的抑菌物质对鼠伤寒沙门氏菌、白色念珠菌、大肠埃希氏菌等致病菌表现出较强抑菌活性。其抑菌机制为乳酸菌所产抑菌物质可破坏阪崎肠杆菌的细胞壁及内容物。结论 本研究分离到的发酵黏液乳杆菌SA3有望应用于乳制品中阪崎肠杆菌的生物防腐。     

健康成人粪便中双歧杆菌的分离鉴定及其发酵乳体内特性研究

为筛选具有潜在益生功能的双歧杆菌,采用MRS培养基,结合菌落形态观察和16S rDNA基因序列同源性分析,从上海地区健康的成人粪便中分离鉴定双歧杆菌,通过7 L发酵罐发酵试验筛选优良菌株,并利用其制备发酵乳,对发酵乳的体内特性进行研究。结果表明,分离并鉴定到3株长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）（编号为P-1、P-2和P-3）,其中菌株P-2制备的发酵乳在稳定期活菌数最高,遗传稳定性好,被确定为优良菌株,并被命名为DD98。菌株DD98制备的发酵乳能显著增加小鼠胃肠道内有益菌、减少有害菌的表达（P＜0.05）,具有调节肠道菌群的作用。此外,能维持小鼠正常的体质量、血常规指数,有利于小鼠脏器的生长。     

驼乳制品中抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性乳酸菌的筛选及益生特性研究

目的:本研究以新疆阿勒泰地区的驼乳制品为研究对象,筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的优良乳酸菌。方法:采用稀释涂布法分离纯化菌株,DNS和pNPG法筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的菌株,通过耐酸性、耐胆盐、模拟胃肠道环境耐受性、抑菌性、抗氧化活性实验评价菌株的益生特性。结果:从驼乳制品中共计获得34株菌株,其中6株对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性,经过形态学和16S rRNA分子鉴定,确定有4株为植物乳杆菌Lactiplantibacillus plantarum,2株为副干酪乳杆菌Lactiplantibacillus paracasei。6株乳酸菌对α-淀粉酶的抑制活性都达到50%以上,其中X34对α-淀粉酶的抑制率最高达到88.59%。本实验中筛选的乳酸菌对α-葡萄糖苷酶的抑制率在11%~16%之间,X31抑制率最高为15.43%。6株乳酸菌在不同pH（1.0、2.0、3.0）和不同浓度胆盐（1、2、3 g/L）的培养基中均可存活。6株乳酸菌在模拟胃液和肠液中的存活率分别达到83%和90%以上。对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率超过90%以上,其中X29对羟自由基的清除率最高为92.43%,对超氧阴离子自由基清除率最强的是X33清除率达到94.04%。6株乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,其中X31对大肠杆菌的最大抑菌圈直径为19.63 mm,X23对沙门氏菌抑菌圈最大达到19.85 mm,菌株X33对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为19.17 mm。结论:从驼乳制品中筛选到6株具有潜在降糖活性的乳酸菌,对强酸、胆盐和胃肠液有一定的耐受性,抗氧化能力较强,具有抑制致病菌的效果,为后期研发功能性降糖饮品提供益生菌株。     

高产淀粉酶细菌的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒大曲中分离筛选产淀粉酶的细菌,通过碘熏蒸产生透明圈法进行初筛,淀粉酶活力测定进行复筛,结合菌落形态观察和16SrDNA同源序列分析以及生理生化对筛选获得的高产淀粉酶细菌进行鉴定,研究影响细菌产淀粉酶能力的单因素:碳源、发酵时间、初始pH、接种量,采用响应面优化确定最佳产酶条件。结果表明,6-10菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),通过响应面优化确定产酶工艺条件最佳为:发酵时间4d,初始pH 5,接种量10%。优化后产酶能力达到(164.37±3.25)U/mL,是优化前产酶能力的4.43倍,具有较强的产淀粉酶能力。