古细菌-硫细菌蛋白AF1514的纯化及晶体生长研究

本研究将AF1514蛋白的重组基因转化到大肠杆菌（E．coliBL21）并通过在12℃条件下的诱导表达产生了大量的目的蛋白。用镍柱亲和层析和分子筛Superdex．75凝胶过滤层析的两步蛋白纯化方法进一步纯化蛋白AFl514后,获得纯度较高的蛋白（纯度〉95％）。纯化的母体蛋白和甲基化处理后的蛋白衍生物分别用悬滴汽相扩散法在16℃结晶。初步筛选所用的400多种结晶条件中,适合晶体生长的条件只有3种,其中最佳晶体生长条件溶液的成分包含0．1mol／L醋酸钠,pH5．0,0．1mol／L氯化钠和8％～14％（W／V）2．甲基2,4．戊二醇。蛋白晶体属于四方晶系,初步x．射线衍射分辨率为2．09A°。     

黄粉虫粗多糖的初步纯化及体外抗氧化活性研究

以黄粉虫粗多糖为原料,通过单因素脱蛋白试验,利用响应面法优化脱蛋白工艺,经DEAE-纤维素阴离子层析柱纯化,对多糖进行体外抗氧化活性分析。结果表明：各因素对黄粉虫粗多糖蛋白去除率的影响程度为：脱蛋白次数>振摇时间>静置时间。当Sevage试剂加入量与粗多糖溶液体积比为1:1时,优化条件为：振摇时间17 min、静置时间19 min、脱蛋白次数2次,蛋白去除率达61.25%。与未除蛋白的粗多糖相比,除蛋白后黄粉虫多糖对DPPH自由基、羟自由基清除能力的IC₅₀减小,分别为3.052、7.276 mg/mL,说明多糖抗氧化活性增强。黄粉虫多糖经不同浓度NaCl溶液梯度洗脱纯化获得4个主要组分,其中0.5 mol/L NaCl洗脱的多糖体外抗氧化性综合能力最强。     

高压热水浸提法提取金针菇黄酮的纯化及活性测定

为了获知高压热水浸提法所提取金针菇黄酮的抑菌和抗氧化活性以及聚酰胺树脂纯化金针菇黄酮的最优条件,利用聚酰胺树脂对高压热水浸提法所提取的金针菇黄酮进行纯化,并对纯化条件进行了优化研究,而后对纯化后黄酮抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的能力进行了检测;又以抗坏血酸(Vc)为对照,对黄酮清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O_2~—·)、羟基自由基(OH·)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS·)的能力进行了测定。结果表明,聚酰胺树脂纯化金针菇黄酮的最适条件为:采用浓度为1.0 mg/mL、pH值为4的上样液,在上样流速为0.5 mL/min的条件下进行吸附;吸附饱和后用80%的乙醇70 mL以1 mL/min洗脱。在此条件下得到的黄酮纯度是纯化前的5.95倍。高压热水浸提法所提取金针菇黄酮对4种菌均有不同程度的抑制作用,其抑菌程度大小顺序为:金黄色葡萄球菌大肠杆菌沙门氏菌枯草芽孢杆菌。金针菇黄酮对DPPH·、O_2~—·、OH·和ABTS·均具有一定的清除能力,但弱于Vc。研究表明,高压热水浸提法所提取的金针菇黄酮具有抑菌及抗氧化活性,聚酰胺树脂纯化金针菇黄酮效果较好。     

基因工程菌漆酶用于提取黄芪总皂甙的研究

利用基因工程菌甲醇毕赤酵母（PMAD16／pMETαA—Lcc1）培养产生的重组漆酶,采用正交试验,对水浸提取条件、漆酶酶解条件进行了研究。结果表明：黄芪总皂甙最佳提取工艺为：先用重组漆酶酶解,1g黄芪加入3．0mL纯化的重组漆酶（453U／mL）,在40℃、pH4．0的条件下酶解1．5h,然后再水浸提取黄芪总皂甙。经过重组漆酶酶解处理后黄芪总皂甙提取率比未经酶处理的提取率提高了65．6％。     

金针菇水溶性多糖提取工艺的研究

探讨了以金针菇为原料提取水溶性多糖的最佳工艺条件。结果表明,温度90℃、浸提时问4h、料液比1：30、提取2次、pH7为提取金针菇多糖的最佳工艺条件。向糖液中加入氯仿-正丁醇溶液（5：1）去除蛋白以纯化多糖,产率达1．63％。     

西洋参多糖脱色脱蛋白方法研究

目的:优化西洋参多糖的纯化工艺。方法:采用热水浸提乙醇沉淀法提取西洋参粗多糖,用活性炭法、过氧化氢法和大孔树脂法对粗提液进行脱色;比较Sevag法、三氯乙酸法、酶法和酶-Sevag联用法对粗提液的脱蛋白效果。结果:酶结合Sevag法除蛋白效果最好,蛋白脱除率为90.8%,多糖损失率为9.8%;大孔树脂S-8脱色效果最佳,色素脱除率为95.8%,多糖损失率为17.6%。结论:本法用于西洋参粗多糖中色素及蛋白质的去除切实可行,可作为西洋参粗多糖的纯化手段之一。     

车前草多糖的提取及纯化工艺研究

采用热水浸提法提取车前草水溶性多糖并对其进行纯化.通过单因素和正交试验得出,车前草多糖提取的最佳工艺条件为浸提时间2 h,浸提温度80 ℃,料水比1:25;脱色的最佳工艺条件为温度60 ℃,脱色时间40 min,活性炭用量1%;采用木瓜蛋白酶法、三氯乙酸法及Sevag法脱除车前草多糖浓缩液中的蛋白质,实验结果表明,木瓜蛋白酶法脱蛋白率最高为61.16%、多糖损失率最低为     

变性对转谷氨酰胺酶在乳蛋白间交联影响初探

利用SDS-PAGE电泳结合凝胶成像分析技术，比较了在非变性、加入还原剂变性和加热后再加入还原剂变性三种条件下转谷氨酰胺酶对酪蛋白和乳清蛋白之间的交联情况。结果表明：在非变性条件下，酪蛋白质量分数下降96％，乳清蛋白下降15％，酪蛋白和乳清蛋白几乎不能交联。超分子量聚合物是酪蛋白单一聚合物，α-乳白蛋白形成部分低聚体；在加入还原剂时，酪蛋白质量分数下降86％，乳清蛋白下降30％，反应4h后有少量乳清蛋白和酪蛋白中某一组分交联；预热更有助于酪蛋白和乳清蛋白聚合，在第三种条件下，反应24h后乳清蛋白下降60％。     

榛子蛋白提取及纯化的工艺优化

摘要：以榛子粕为原料,采用碱性蛋白酶酶解辅助碱溶酸沉法提取榛子蛋白,然后加入碱液复溶、碱性蛋白酶酶解、酸沉纯化。在单因素试验的基础上采用响应面法对提取过程中酶解工艺条件进行优化,采用正交试验优化榛子蛋白纯化工艺。结果表明：最优酶解工艺条件为酶解温度46 ℃、pH 8、酶解时间3.7 h,在此条件下榛子蛋白提取率达到53.16%;最佳纯化条件为反应温度50 ℃、液料比5∶ 1、复溶pH 11,在此条件下榛子蛋白纯度为95.23%。     

苜蓿多糖提取优选工艺条件的研究

选择热水浸提，以浸提时间，温度，浸提固液比以及提取次数作为单因素进行梯度实验，通过方差分析，并进行LSD多重比较作显著性分析，确定其条件范围，再通过进一步的正交实验L9(3^4)得到苜蓿水溶性多糖浸提工艺的优选因素组合：浸提时间1h，温度100℃，固液比1：40，浸提三次。粗多糖提取率达6．80％，经醇沉，5％三氯乙酸正丁醇溶液及氯仿正丁醇溶液（5：1）分离纯化，得脱蛋白粗多糖。