推拿对兔腰椎间盘退变组织中TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF的影响

目的 观察推拿对兔腰椎间盘退变组织中TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF的影响。方法 30只白兔随机被分为空白组、模型组、推拿组，每组10只。采用经皮穿刺纤维环法将模型组和推拿组建立兔椎间盘退变模型，然后推拿组进行推拿手法干预。6周后取出椎间盘组织，采用HE染色检测椎间盘组织形态学变化；采用酶联免疫吸附法 ( ELISA 法) 检测 TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF的表达水平。结果 与空白组比较，模型组和推拿组的椎间盘组织形态学评分明显增加（P<0.05），TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF表达均明显增加（P<0.05）；与模型组比较，推拿组TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF 表达均明显降低（P<0.05）。结论 推拿可能通过减少TNF-α、IL-6、TGF-β1、CTGF 表达而改善椎间盘退变。     

ShRNA干扰NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的保护作用及机制研究

目的 探究shRNA(short hairpin RNA)干扰NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的保护作用及作用机制。方法 MCAO诱导新生大鼠模型，分4组：假手术组、模型组(MCAO组)、MCAO+Scramble组和MCAO+sh-NLRP3组，每组10只。采用RT-PCR和蛋白印迹法检测NLRP3表达；HE染色观察心肌组织病理学改变；免疫组化检测Ki67表达，蛋白印迹检测Ki67和PCNA表达；TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率，蛋白印迹检测心肌细胞Caspase-3、-9表达；Elisa检测Mb、CK-MB和cTnⅠ含量及心肌炎标记分子IL-1β、iNOS、IL-6和L-10表达；蛋白印迹实验检测TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α表达。结果 sh-NLRP3能抑制模型大鼠NLRP3在基因和蛋白水平的表达(P < 0.01)，改善心肌坏死，上调心肌组织中Ki67和PCNA表达(P < 0.01)，降低心肌细胞凋亡率(P < 0.01)和Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达(P < 0.01)，降低大鼠血清中Mb、cTnⅠ和CK-MB的含量(P < 0.01)，降低IL-1β、iNOS、IL-6和增加IL-10含量，同时下调TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α的蛋白表达。结论 sh-NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠的心肌损伤和免疫反应起到保护作用，其机制与抑制TGF-β1/ NF-κB p65/TNF-α炎症通路活化相关。     

黄连温胆汤对慢性肾衰模型大鼠肾脏组织中TGF-β1及VEGF表达的影响

目的:分析清热燥湿方剂黄连温胆汤对慢性肾功能衰竭模型大鼠的治疗作用及相关作用机制。方法:大鼠灌胃腺嘌呤建立慢性肾衰竭模型,将大鼠平均分为正常组,模型组,地塞米松组,黄连温胆汤低剂量组、中剂量组、高剂量组。比较各组大鼠血清及尿液中生化指标及肾脏组织HE染色,通过qPCR及免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏组织中转化生长因子beta 1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。结果:与正常组比较,模型组及黄连温胆汤各给药组大鼠体质量显著降低(P<0.05);与模型组比较,黄连温胆汤各给药组大鼠血清中肌酐、尿素氮水平及尿蛋白水平均有所降低(P<0.05)。HE染色表明:黄连温胆汤可缓解慢性肾功能大鼠肾脏组织中肾小球硬化及炎细胞浸润。黄连温胆汤可明显下调慢性肾功能衰竭模型大鼠肾脏组织中TGF-β1及VEGF基因及蛋白表达(P<0.05)。结论:黄连温胆汤可缓解大鼠慢性肾衰竭,其作用机制可能与降低肾脏组织中TGF-β1及VEGF水平有关。     

加味苓桂术甘汤对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:观察加味苓桂术甘汤对大鼠肾纤维化模型的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、模型对照组、低剂量加味苓桂术甘汤组与高剂量加味苓桂术甘汤组。按200mg/(kg·d)腺嘌呤灌胃建立大鼠肾纤维化模型。28d后采集血液标本,检测大鼠血清BUN、Cr水平的变化;留取肾组织,用于HE染色观察肾组织病理改变及免疫组化方法检测肾组织TGF-β1的表达。结果:模型对照组血清BUN、Cr、肾组织TGF-β1较正常对照组明显升高,加味苓桂术甘汤各组上述指标较模型对照组明显下降。结论:加味苓桂术甘汤可保护肾功能,通过下调TGF-β1表达延缓肾纤维化进展。     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。     

白藜芦醇对慢性肾衰竭大鼠肾脏组织BMP-7、TGF-β_1、Smads信号通路表达的影响

目的:观察白藜芦醇对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾脏组织BMP-7、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、Smads信号通路表达的影响,分析其延缓CRF进展及抗肾间质纤维化的机制。方法:采用腺嘌呤制作CRF大鼠模型,随机分为模型组、氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组,另取8只正常大鼠作为空白对照组。观察大鼠治疗后血清肌酐、尿素氮水平;采用RT-PCR法检测肾脏组织内TGF-β_1mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测BMP-7、TGF-β_1、Smad6的蛋白表达,采用Western blot检测BMP-7、Smad6蛋白的表达,比较大鼠肾脏组织BMP-7、GF-β_1、Smads信号通路表达。结果:氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组肌酐、尿素氮均明显低于模型组(P<0.05);氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组TGF-β_1mRNA表达水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇低剂量组TGF-β_1mRNA表达水平低于氯沙坦组(P<0.05);与模型组比较,氯沙坦组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇高剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达均有提高,差异有统计学意义(P<0.05);与氯沙坦组比较,白藜芦醇低剂量组BMP-7、Smad6蛋白表达提高更为明显(P<0.05);白藜芦醇低剂量组和高剂量组BMP-7、Smad6蛋白比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇通过增强BMP-7和Smad6蛋白的表达,减弱TGF-β_1的表达,对TGF-β_1信号向核内转导的通路进行抑制,起到减轻肾间质纤维化、保护肾脏功能的目的。     

基于脊髓型颈椎病发病机制研究黄芪总苷对大鼠模型椎间盘中相关因子表达的影响

目的探讨黄芪总苷对大鼠退变颈椎间盘内白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。方法将110只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、黄芪总苷高剂量组、黄芪总苷中剂量组、黄芪总苷低剂量组和甲钴胺对照组,每组18只(2只造模失败剔除)。造模成功后,按要求给予药物灌胃,分别于灌胃前后监测大鼠的运动功能,灌胃1,2,4周后分3次处死大鼠,取各组大鼠颈椎间盘,用放射免疫分析法分别检测标本中IL-1β,TNF-α的含量。结果与空白对照组比较,造模成功后即给药前,其他5组斜板试验角度均明显减小(P<0.05);在给药1,2,4周后,与模型组比较,黄芪总苷高、中、低剂量组,甲钴胺对照组斜板试验角度均明显增大,IL-1β,TNF-α含量均明显降低(P<0.05),且以黄芪总苷中剂量组作用最为显著(P<0.05)。结论退变椎间盘不但释放大量的细胞因子,还可加速椎间盘的退变,黄芪总苷能降低退变颈椎间盘中细胞因子的含量,具有减弱炎性反应和减缓椎间盘退变的作用,且存在量效关系。     

亚低温对MCAO大鼠模型TGF-β1表达的影响

目的:观察亚低温(32～35℃)对局灶性脑缺血后大鼠脑组织TGF-β1表达的影响。方法:将100只SD大鼠随机分成假手术组20只,常温组40只和亚低温组40只,各组根据观察的时间点不同分为术后6 h、1 d、2 d、3 d、7 d组。建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,应用冰袋降温的方法使亚低温组大鼠肛温10 min内降至(33±1)℃,维持低温6 h后复温。假手术组和常温组大鼠保持肛温(37±0.5)℃。在各时间点对各大鼠进行断头取脑,行苏木素伊红染色观察脑缺血病理学改变,免疫组织化学染色观察不同时间点TGF-β1表达情况。结果:各时间点亚低温组大鼠脑组织病理学损伤较常温组轻,在各时间点假手术组大鼠脑组织中TGF-β1可见少许表达,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。亚低温组和常温组大鼠缺血侧脑组织在缺血后6 h TGF-β1阳性细胞数均开始增加,在第3天时达到高峰,在第7天时阳性细胞数有所减少,但仍存在较高的水平。亚低温组各亚组缺血侧脑组织TGF-β1表达较常温组各亚组明显增多,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:脑缺血时,缺血侧脑组织TGF-β1有表达,亚低温可使TGF-β1表达增多;亚低温可能通过上调TGF-β1的表达抑制炎症反应,促损伤修复,起脑保护作用。     

布地奈德对慢性鼻-鼻窦炎术后鼻黏膜组织重塑及转化生长因子β1表达的影响

目的：观察布地奈德对不伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎（CRSsNP）术后黏膜组织重塑及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法30例行鼻内镜手术的 CRSsNP 患者术后按随机数字表法分为2组,20例术后应用布地奈德喷鼻（激素组）,10例术后未使用糖皮质激素（对照组）。术后第3个月复查时取筛区黏膜标本。所有标本分别进行 HE 染色、Masson 三色（Masson trichrome,MT）胶原染色及苦味酸-天狼星红染色,观察黏膜上皮损伤、基底膜增厚、细胞外基质（ECM）胶原沉积及成分等情况;免疫组织化学检测黏膜中 TGF-β1的表达情况。结果激素组上皮细胞损伤比对照组明显减轻（P ＜0．05）,基底膜厚度减少[（7．62±2．83）μm 比（12．17±4．34）μm,P ＜0．01];激素组黏膜固有层内蓝色胶原所占面积百分比为（7．41±1．93）％,明显少于对照组的（18．54±6．37）％,（P ＜0．01）,沉积的胶原以Ⅰ型胶原为主,Ⅲ型、Ⅳ型胶原较少;激素组鼻黏膜 TGF-β1表达较对照组明显减少（138．78±5．24比165．58±7．62,P ＜0．01）。结论及时应用布地奈德能在一定程度上抑制 CRSsNP 术后鼻黏膜组织重塑,降低 TGF-β1的表达可能是其中机制之一。     

归经组方对肾纤维化大鼠肾组织中Wnt信号表达的影响

目的:观察归肾经药物组方对肾纤维化大鼠疗效及肾组织Wnt信号表达的影响。方法:用5/6肾切除方法建立大鼠肾纤维化模型。经验方肾衰Ⅰ号为肾衰Ⅰ号组,以治则相同不归肾经药物组方为不归经组,以治则相同且归肾经的组方为归经组,同时设模型组,假手术组。连续治疗2月后,采血检测肾功能及血色素、取肾组织Masson染色、Western blot法检测肾组织Wnt2、GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、β-actin蛋白表达,免疫组化法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾组织表达。结果:成功造模并治疗2个月后,与假手术组比较,模型组体质量、血浆总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(Albumin,Alb)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量显著降低(P<0.01),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(creatinine,Cr)含量显著增高(P<0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及TGF-β1蛋白表达显著增高(P=0.000),GSK-3β活性显著降低(P=0.000),胶原含量显著增高(Masson染色)(P<0.05);与模型组比较,各治疗组体质量显著增高(P<0.01),BUN、Cr显著降低(P<0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、TGF-β1表达及胶原含量显著降低(P<0.05)。3个治疗组间相比较,归经组Hb、Tp含量及GSK-3β表达较肾衰Ⅰ号组及不归经组显著升高P<0.01),P-GSK-3β表达显著降低(P<0.01);不归经组α-SMA、β-catenin表达明显高于其他两组(P<0.05)。3个治疗组间体质量、ALB、BUN、Cr含量及Wnt2表达之间没有明显差异,归经组与肾衰Ⅰ号之间α-SMA、β-catenin表达亦没有明显差异。结论:三组方均能通过Wnt信号通路减轻模型动物肾纤维化程度,且经验方与归肾经处方优于不归肾经方。