TGF-β1与自噬基因Beclin1、LC3在椎间盘退变组织中的表达

目的：观察兔椎间盘退变组织中TGF-β1与Beclin1、LC3的表达。方法：制作新西兰大白兔腰椎间盘退变模型，HE染色检测兔椎间盘退变程度。RT-PCR检测TGF-β1与自噬基因LC3、Beclin1的表达。结果：与空白组比较，模型组HE染色显示椎间盘组织形态学评分明显增加（P<0.05）；RT-PCR显示TGF-β1与Beclin1、LC3基因表达明显上调（P<0.01）。结论：兔腰椎间盘退变组织中TGF-β1与Beclin1、LC3基因表达量增加。     

基于脊髓型颈椎病发病机制研究黄芪总苷对大鼠模型椎间盘中相关因子表达的影响

目的探讨黄芪总苷对大鼠退变颈椎间盘内白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。方法将110只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、黄芪总苷高剂量组、黄芪总苷中剂量组、黄芪总苷低剂量组和甲钴胺对照组,每组18只(2只造模失败剔除)。造模成功后,按要求给予药物灌胃,分别于灌胃前后监测大鼠的运动功能,灌胃1,2,4周后分3次处死大鼠,取各组大鼠颈椎间盘,用放射免疫分析法分别检测标本中IL-1β,TNF-α的含量。结果与空白对照组比较,造模成功后即给药前,其他5组斜板试验角度均明显减小(P<0.05);在给药1,2,4周后,与模型组比较,黄芪总苷高、中、低剂量组,甲钴胺对照组斜板试验角度均明显增大,IL-1β,TNF-α含量均明显降低(P<0.05),且以黄芪总苷中剂量组作用最为显著(P<0.05)。结论退变椎间盘不但释放大量的细胞因子,还可加速椎间盘的退变,黄芪总苷能降低退变颈椎间盘中细胞因子的含量,具有减弱炎性反应和减缓椎间盘退变的作用,且存在量效关系。     

石榴健胃片对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠炎症因子的影响

目的研究石榴健胃片对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(SKD-UC)模型大鼠结肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-10的影响。方法采用15%大黄混悬液灌胃联合2,4,6-三硝基苯磺酸-乙醇溶液灌肠的病证结合法建立SKD-UC大鼠模型,将模型大鼠随机分为阳性组,模型组,石榴健胃片高、中、低剂量组,每组20只,另取20只作为空白组。造模成功后第2天开始进行药物干预,阳性组大鼠灌胃柳氮磺胺吡啶(SASP,0.36g/kg),石榴健胃片高、中、低剂量组分别灌胃石榴健胃片混悬液2.4,1.2,0.6g/kg,模型组和空白组灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续21d。末次给药后24h处死大鼠,取结肠组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织中IL-1β,IL-6,IL-10,TNF-α的基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-1β,IL-6,TNF-α的mRNA相对表达量明显增高,IL-10的mRNA相对表达量明显降低,组间比较差异均有高度统计意义(P<0.01);与模型组比较,石榴健胃片高、中、低剂量组大鼠结肠IL-1βmRNA和TNF-αmRNA相对表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),高、中剂量组IL-6mRNA相对表达量明显降低(P<0.01),而高、中、低剂量组IL-10mRNA相对表达量明显升高(P<0.05或P<0.01);与阳性组比较,石榴健胃片高剂量组大鼠结肠IL-1β,TNF-α和IL-6的mRNA相对表达量及中剂量组IL-1βmRNA相对表达量明显降低(P<0.05),高、中剂量组IL-10mRNA相对表达量明显升高(P<0.05);各剂量组之间IL-1β,IL-6,TNF-α和IL-10的mRNA相对表达量比较差异均无统计意义(P>0.05)。结论石榴健胃片对SKD-UC模型大鼠的结肠TNF-α,IL-1β,IL-6及IL-10的基因表达具有调节作用。     

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎模型大鼠炎症相关因子及核因子-κB、β-arrestin1、Bcl-2表达的影响

目的:观察雷公藤多苷对溃疡性结肠炎模型大鼠肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、β-arrestin1、Bcl-2表达的影响。方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤多苷组和硫唑嘌呤组。除对照组外,其他组分别采用TNBS/乙醇联合灌肠的方法制备溃疡性结肠炎模型。各组分别给予相应药物连续灌胃,对照组和模型组给予生理盐水灌胃14 d,第16天处死大鼠,取结肠标本,分别选择Elisa和Western blot法检测结肠组织中TNF-α、TGF-β1及NF-κB、β-arrestin1、Bcl-2蛋白的表达。结果:造模3 d后模型组大鼠体质量降低、精神倦怠、懒动,出现不同程度的腹泻及便血,疾病活动指数评分高于对照组(P<0.05),大鼠结肠肠管变粗、肠壁与周围组织粘连,黏膜多处片状充血、水肿。与对照组比较,模型组的大鼠结肠组织TGF-β1明显降低(P<0.05),TNF-α及NF-κB、β-arrestin1、Bcl-2表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,雷公藤多苷组与硫唑嘌呤组TGF-β1显著增高(P<0.05),TNF-α及NF-κB、β-arrestin1、Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:雷公藤多苷对溃疡性结肠炎模型大鼠有治疗作用,其机制可能与升高TGF-β1,降低炎症因子水平和NF-κB、β-arrestin1、Bcl-2蛋白表达有关。     

依达拉奉联合乌司他丁对急性百草枯中毒大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨依达拉奉联合乌司他丁对百草枯中毒大鼠所致肺损伤的影响及机制。方法成年雄性SD大鼠100只随机分为5组,分别为对照组(NC组)、模型组(PQ组)、依达拉奉组(ED组)、乌司他丁组(ULI组)、依达拉奉联合乌司他丁组(ED+ULI组),除NS组外均通过腹腔注射百草枯建立急性百草枯中毒模型,ED组、ULI组、ED+ULI组3个药物治疗组建立模型后立即给予腹腔注射相应药物,并每隔24h重复给药。建模后72h后处死大鼠,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与NS组比较,PQ组和药物治疗组血清中SOD活性明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、TGF-β1、MDA水平明显升高(P<0.05);与PQ组比较,使用药物治疗组SOD活性明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、TGF-β1、MDA水平下降,其中以ED+ULI组下降更为显著(P<0.05)。结论依达拉奉、乌司他丁可通过调控细胞因子,抑制脂质过氧化反应、增强自由基的清除能力,减缓肺纤维化程度,从而达到肺损伤的保护作用,且联合用药效果优于单一用药。     

ShRNA干扰NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的保护作用及机制研究

目的 探究shRNA(short hairpin RNA)干扰NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的保护作用及作用机制。方法 MCAO诱导新生大鼠模型，分4组：假手术组、模型组(MCAO组)、MCAO+Scramble组和MCAO+sh-NLRP3组，每组10只。采用RT-PCR和蛋白印迹法检测NLRP3表达；HE染色观察心肌组织病理学改变；免疫组化检测Ki67表达，蛋白印迹检测Ki67和PCNA表达；TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率，蛋白印迹检测心肌细胞Caspase-3、-9表达；Elisa检测Mb、CK-MB和cTnⅠ含量及心肌炎标记分子IL-1β、iNOS、IL-6和L-10表达；蛋白印迹实验检测TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α表达。结果 sh-NLRP3能抑制模型大鼠NLRP3在基因和蛋白水平的表达(P < 0.01)，改善心肌坏死，上调心肌组织中Ki67和PCNA表达(P < 0.01)，降低心肌细胞凋亡率(P < 0.01)和Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达(P < 0.01)，降低大鼠血清中Mb、cTnⅠ和CK-MB的含量(P < 0.01)，降低IL-1β、iNOS、IL-6和增加IL-10含量，同时下调TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α的蛋白表达。结论 sh-NLRP3对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠的心肌损伤和免疫反应起到保护作用，其机制与抑制TGF-β1/ NF-κB p65/TNF-α炎症通路活化相关。     

线粒体 DNA 诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的实验研究简

目的：观察线粒体 DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）刺激肺泡巨噬细胞后炎症因子的动态变化,探讨mtDNA 对肺泡巨噬细胞的致炎效应。方法取 SD大鼠肝脏组织用改良的碱变性法进行 mtDNA 的提取、纯化。将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）分为mtDNA组（5μg·mL-1,A组）,mtDNA组（10μg·mL-1,B组）,空白对照组（C组）,分别在 A、B组中加入mtDNA 5μg·mL-1、10μg·mL-1,在0、3、6、12和24 h时相点收集各组细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和 IL-6的表达水平。结果 A组和B组在3、6、12和24 h TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量显著高于C组（P＜0．01）,且在3、6、12和24 h 时B组的表达量高于 A组（P＜0．05）。结论 mtDNA 能够诱导肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β和 IL-6等炎症因子的表达,且呈剂量依赖性,推测mtDNA 具有促炎作用。     

蛇床子素预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用

目的:探讨蛇床子素(osthole,Ost)预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法:建立大鼠心脏缺血再灌注损伤模型。30只雄性SD大鼠随机平均分为Ost组、模型组和假手术组。假手术组和模型组手术前1 h给予生理盐水(50 mg·kg~(-1),腹腔注射),Ost组缺血前1 h给予Ost(50 mg·kg~(-1),腹腔注射),模型组和Ost组血管夹夹闭左冠状动脉前降支,置于32℃温箱30 min后松开血管夹,4 h后收集各组大鼠心脏和血清。HE染色后观察心脏病理学形态学变化,Western blotting检测P38,p-P38和p-NF-κB;RT-PCR检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的心脏表达和分泌;ELISA检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、心肌型肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。结果:与假手术组比较,模型组病理改变,p-P38、p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达均明显增加(P<0.05),但P38和NF-κB表达无明显差异。与模型组比较,Ost组病理改变,p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达明显减少(P<0.05),但p-P38表达进一步增加,而P38和NF-κB表达仍无明显变化。结论:Ost预处理可通过抑制炎症反应发挥对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用,其作用机制与促进P38信号通路激活相关。     

雷帕霉素预处理对大鼠肾缺血再灌注诱发肺损伤的影响

目的探讨雷帕霉素（RPM）预处理对大鼠肾缺血再灌注诱发肺损伤的影响及相关机制。方法采用随机数字表法将60只大鼠分为：假手术组（S组）、肾缺血再灌注组（I/R组）、RPM预处理组（R组）,每组20只。采用右肾切除和左肾缺血45 min行再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤模型。R组缺血前给予RPM（10 mg·kg^-1·d^-1）×3 d,最后1次术前2 h灌胃。再灌注6 h后经心脏采集血样,检测血清SOD活性、MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;取肺组织,光镜下观察肺组织病理学结果,并测定肺组织湿干比重（W/D）。结果与S组比较：其他2组肺W/D、血清MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平明显升高（P〈0.05）,SOD活性明显降低（P〈0.05）;与I/R组比较：R组肺W/D、血清MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平明显降低,SOD活性明显升高,肺组织病理学损伤明显减轻（均P〈0.05）。结论 RPM预处理可减轻大鼠肾缺血再灌注诱发肺损伤,其机制可能与抗氧化应激和抗炎反应有关。