E-cad基因启动子甲基化在子宫内膜异位症中的异常表达

目的:探讨E-cad基因启动子甲基化在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法:随机选取于本院2013年1月-2015年1月行手术治疗的异位内膜病灶49例,其中45例术后病理诊断为子宫内膜异位症(卵巢)作为内异症组,对照组患者20例为同期住院因诊断性刮宫、行全宫切除术获取的子宫内膜组织。通过甲基化特异性PCR检测两组的E-cad启动子甲基化,比较各分期间甲基化表达的差异。结果:内异症组异位内膜中E-cad启动子甲基化26例,甲基化率为57.8%,对照组中E-cad启动子甲基化例数为0,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。内异症组中Ⅰ~Ⅱ期E-cad启动子甲基化率为23.1%,Ⅲ期甲基化率为58.8%,Ⅳ期甲基化率为86.7%,内异症组不同分期甲基化率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在子宫内膜异位症中存在E-cad基因启动子甲基化表达,且随分期进展甲基化率升高,其可能在内异症的发生、发展中起一定作用。     

STGC3基因启动子生物信息学分析及载体构建

目的运用生物信息学预测并分析鼻咽癌抑癌基因STGC3启动子,构建双荧光素酶报告基因表达载体。方法采用生物信息学软件预测STGC3基因5'端上游调控区5 000 bp序列进行启动子预测与分析,克隆最有可能的启动子,构建萤火虫荧光素酶双报告基因重组质粒,重组质粒经MluⅠ和BglⅡ限制性内切酶酶切及测序鉴定。结果 STGC3基因5'端上游-3 046 bp至-46 bp区域内有启动子活性,在-2 992 bp至-69 bp间启动子分值达0.8以上,其中-845 bp至-795 bp间分值最高,达到1.0。在-1 140 bp和-774 bp处检测到GC盒信号;在-441 bp处检测到CAAT盒信号。在-1 805 bp至-1 705 bp和-900 bp至-684 bp间各有一个Cp G岛;在-2 348 bp和-948 bp处各有一个转录起始位点。经不同长度的片段缺失比对,取最有可能的283 bp(-1 360 bp至-1 077 bp)、281 bp(-934 bp至-653 bp)和571 bp(-500 bp至+72 bp)启动子片段构建p GL3-en283、p GL3-en281及p GL3-en571三种质粒,质粒经酶切测序,酶切片段大小一致,序列正确。结论根据生物物信息学分析结果,成功构建STGC3基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因表达载体,为双荧光素酶报告基因检测系统研究该基因启动子活性提供前期基础。     

甲状腺乳头状癌miR-34b基因表达及其启动子区甲基化的临床意义研究

目的:探讨miR-34b基因表达及其启动子区甲基化(MSP)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的临床意义。方法:收集2008年10月-2013年1月本院治疗的42例甲状腺乳头状癌患者癌组织标本(实验组)和42例甲状腺腺瘤患者瘤旁组织标本(对照组),检测两组miR-34bmRNA表达(实时定量PCR法)及miR-34b基因启动子区甲基化(甲基化特异性PCR法),并对结果进行分析。结果:实验组miR-34b mRNA相对平均表达量(0.84±0.04),miR-34b基因启动子甲基化阳性率71.4%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中不同性别、年龄、肿瘤直径、分期和包膜浸润之间,甲基化阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);而存在淋巴结转移甲基化率(88.5%)显著高于不存在淋巴结转移(43.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-34b基因表达及其启动子区甲基化与PTC发生发展具有密切关系,建议临床深入研究。     

LncRNA-PRNCR1多态性与肠癌易感性及预后的关系

目的:研究LncRNA-PRNCR1多态性与肠癌易感性及预后的关系。方法:分别比较对照组以及观察组LncRNA-PRNCR1多态性之间的差异,分析LncRNA-PRNCR1多态性与结直肠癌患者的易感性以及预后的相关性。结果:两组rs16901946中的基因型比较,差异有统计学意义(P<0.05),与rs16901946中的AG、GG、AG/GG基因型位点相比,AA位点的肠癌发病率较高(P<0.05)。在≥58岁患者中,rs16901946中的AA基因型与肠癌的易感性相关,其OR值为1.801,在<58岁患者中,其OR值为0.960。同时,在加性模型中显示,≥58岁患者中,每增加一个等位基因A,患者的结直肠癌风险增加33.3%;女性患者中,每增加一个等位基因A,患者直肠癌风险增加11.3%,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过对不同基因型结肠癌患者的总体生存情况比较,患者的生存时间之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:患者LncRNA-PRNCR1中的rs16901946基因突变与患者的结直肠癌的进展密切相关,未来可通过对患者的多基因量化分析,对肿瘤细胞的激活进行预测。     

大豆油酸脱氢酶基因启动子的克隆及其表达活性分析

大豆油酸脱氢酶(FAD2-1B)基因是种子特异表达基因,利用PCR方法从大豆基因组DNA中分离FAD2-1B基因的启动子片段,命名为FP。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子特异性表达元件,如Skn-1 motif、AACACA、SEF4 motif、E-box、ACGT等。将克隆得到的FP片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-FP。通过农杆菌介导法在大豆各组织中进行瞬时表达,GUS组织化学染色显示FP驱动GUS基因在大豆根、茎、叶中基本不表达,在种子中有较高的表达活性,推测FP启动子具有种子特异表达活性。     

E-钙黏附素基因甲基化及蛋白的表达在食管癌中的研究进展

食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一.其形成是多因素的作用、多基因的变化和多阶段发展的结果,而肿瘤的发生主要是基因表达异常造成的[1].基因表达异常包括基因突变、基因缺失、基因过度表达和基因表型改变等,其中基因表型改变包括DNA甲基化与组蛋白乙酰化等[2].近年来DNA甲基化已成为肿瘤研究的热点.上皮钙黏附素(E-钙黏附素,E-cadherin,E-cad)是一种肿瘤浸润抑制基因,与肿瘤分化状态有关,肿瘤细胞E-cad表达常降低及缺失,均破坏复合体结构,可影响细胞之间的黏附连接,影响肿瘤分化,导致浸润和转移[3],且E-cad基因启动子区域CpG岛甲基化参与了肿瘤的形成[4].本文就E-cad基因甲基化及蛋白表达水平与食管癌的关系综述如下.     

人WDR79基因启动子表达载体的构建及鉴定

人WDR79是一种重要的支架蛋白,在端粒酶组装、卡哈尔体(Cahar body)形成和DNA损伤修复等过程中发挥着重要作用。采用PCR扩增技术获得人WDR79基因启动子上游DNA序列,构建人WDR79基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-WDR79-promoter;通过双酶切、琼脂糖凝胶电泳、DNA测序和荧光素酶活性测定等实验手段,验证质粒pGL3-WDR79-promoter构建的正确性及其表达活性。本研究结果为进一步探讨人WDR79基因表达的调控机制奠定实验基础。     

垂体瘤转化基因和结肠癌转移相关因子1在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的分析垂体瘤转化基因(PTTG)和结肠癌转移相关因子1(MACC1)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达与RB临床病理特征的关系。方法采用免疫组化方法检测PTTG和MACC1在42例RB肿瘤组织和正常视网膜组织中的表达,分析二者在不同临床特征和高危病理特征RB中的表达特征与关系。结果 PTTG在RB组织中表达丰富,但在正常视网膜中几乎不表达,二者差异有统计意义(χ~2=27.68,P<0.05);MACC1在RB组织和正常视网膜中都有表达,二者在表达程度上差异有统计意义(χ~2=9.62,P<0.05);PTTG在未分化型和分化型、脉络膜受侵和未受侵、视神经受侵和未受侵RB组织中的表达差异均有统计意义(χ~2=6.17,χ~2=6.99,χ~2=9.70,P<0.05);MACC1在未分化型和分化型、脉络膜受侵和未受侵RB组织中的表达差异无统计意义(χ~2=0.48,χ~2=2.10,P>0.05),但在视神经受侵和未受侵RB组织中的表达差异有统计意义(χ~2=8.52,P<0.05);PTTG和MACC1在不同性别、年龄之间的表达差异无统计意义(P>0.05);PTTG和MACC1在RB组织内的表达无显著相关性。结论 PTTG和MACC1在RB组织中高表达,而且表达水平与RB分化程度、扩散转移等高危病理特征密切相关,提示PTTG和MACC1在RB的发生、发展中具有一定作用,对于预测RB浸润和转移有重要价值。     

Survivin 基因与胃癌关系的研究进展

胃癌是常见的消化道肿瘤，由于缺乏对晚期胃癌及复发型胃癌的有效的治疗方案，目前胃癌的病死率居全世界恶性肿瘤的第2位［1］。胃癌的发生是多种因素共同作用的结果，其中细胞的过度增殖与细胞凋亡的抑制在肿瘤进展中发挥重要的作用。大量研究［2-4］表明，凋亡抑制蛋白（IAP）家族可以通过抑制细胞凋亡、调节细胞分裂在肿瘤的发生发展中起关键的作用，同时还能通过影响化疗药物的敏感性而影响患者预后。在人类 IAP 家族中共有8个成员，近年来研究较多的与胃癌相关的 IAP 是生存素（Survivin），本文就 Survivin 基因与胃癌关系的研究进展作一综述。