湖北恩施烟区烟草青枯菌致病力分析

为有效进行恩施烟区烟草青枯病的防控,本研究采用人工接种的方法鉴定了恩施烟区烟草青枯菌的致病性。根据红花大金元、K326和岩烟97三个烟草品种病害流行下曲线面积(AUDPC)数值进行聚类分析,将恩施地区烟草青枯菌划分为强、中、弱3种致病型,表明恩施烟草青枯菌是一个由弱到强连续变化的群体。3种致病型菌株在恩施南部和北部区域均有分布,其中恩施北部区域菌株致病力稍高于南部。     

烤烟种质资源黑胫病抗性再鉴定

为精准鉴定国家烟草种质资源中期库中种质资源的黑胫病抗性,采用田间人工接种烟草黑胫病0号生理小种的方法,对77份原标记为抗病的烤烟种质资源进行了抗病性再鉴定。结果表明,大青筋和尖叶柳2份材料表现为高抗黑胫病;黑柳子等23份材料表现为抗黑胫病,其中大黑柳、胎里肥2412、弯梗子、大白筋0522、大黄金0295和黄苗二苯烟2221的抗性强;落地黄等20份材料表现为中抗黑胫病;中感黑胫病和高感黑胫病材料各12份;8份材料表现为感黑胫病。对25份抗性材料进行农艺性状鉴定和遗传多样性分析表明,供试种质遗传多样性丰富,其中叶宽的遗传多样性指数最高。研究结果为烟草黑胫病抗性育种提供了材料基础。     

云南玉溪烟区烟草黑胫病菌的生理小种鉴定及其致病性分析

为明确云南玉溪烟区烟草黑胫病菌生理小种的类别及对主栽品种的致病性,以来源于玉溪市新平县和澄江市的172株烟草疫霉菌为材料,采用TTC法及活体植株接种法明确其生理小种的归属和组群分布,以不同生理小种的烟草疫霉菌株为接种体,研究生理小种鉴定接种技术并验证其可靠性。结果表明,TTC平板上呈现红色的供试烟草疫霉菌株均属于0号或1号生理小种;活体植株接种显示,0号和1号生理小种有149株和12株,分别占比86.63%和6.98%;无致病力及未鉴定出小种归属的菌株分别有2株和9株,分别占比1.16%和5.23%。表明新平县和澄江市烟草黑胫病菌以0号生理小种为主。致病性测定显示,170个菌株对主栽品种KRK26、云烟87和K326均有较强致病力。此外,寄主离体叶片与茎秆轻微致伤后,对烟草黑胫病菌生理小种的抗感反应与活体植株注射接种结果一致,具有同等的鉴别力。说明离体材料致伤接种的方法可用于区分不同烟草品种对黑胫病的抗感性。     

烟草黑胫病抗性鉴定研究现状与展望

从抗病鉴定方法、种质资源与新品种（系）抗病鉴定方面概述了烟草黑胫病抗性鉴定研究进展。重点评述了烟草苗期菌谷法、游动孢子浸根法和毒素法,烟草成株期人工病圃法,以及分子标记辅助法等抗性鉴定方法进展;回顾了我国烟草种质资源与新品种（系）的抗病鉴定工作历程;针对抗源利用、抗病鉴定技术、工作程序上存在的一些问题提出了相应的对策与思路。      

四川省烟草黑胫病菌生理小种的分离鉴定

为了准确掌握四川省烟草黑胫病菌生理小种组成及分布情况,从四川烟草主产区采集了108个烟草黑胫病标样,采用髓部碟片分离法获得74株黑胫病菌,同时通过TTZ颜色反应和鉴别寄主法对74个菌株进行了生理小种鉴定.结果表明,四川烟草黑胫病菌存在0号和1号生理小种,供试菌株中0号生理小种占28.38％,1号生理小种占71.62％,属优势小种.两个生理小种在各采样区均有分布.     

不同香料烟品种和品系对烟草黑胫病菌的抗病性研究

以浙江绍兴地区15个香料烟品种和品系对烟草黑胫病菌进行抗病性鉴定,采用游动孢子液灌根接种、茎注射接种和茎伤口菌丝块接种。结果表明,供试的5个亲本和10个杂交后代中,亲本品种沙姆逊、Toy、Argjiro和巴斯马高度感病,杂交后代中Toy×沙姆逊和泰国沙姆逊×巴斯马也较易感病,而沙姆逊×Toy、ms沙姆逊×沙姆逊和巴斯马×沙姆逊3个品系却高度抗病。采用的3种接种方法中,茎伤口接种的病情指数显著高于游动孢子液灌根接种和茎注射接种。      

豫南烟区烟草青枯病菌的致病力及遗传多样性分析

为有效防控豫南烟区烟草青枯病,对来自信阳市罗山县、驻马店市确山县和遂平县的烟草青枯病菌的致病力和遗传多样性进行了测定分析。人工接种试验表明,豫南烟区烟草青枯病菌的致病力分为强、中和弱3种,不同寄主来源的烟草青枯病菌具有显著的致病力差异。从100个随机引物中筛选出8个扩增条带清晰且具有丰富多态性的引物用于不同地区烟草青枯病菌菌株DNA的RAPD分析,共扩增出720条带,其中多态性带占88.9%。聚类结果和遗传相似系数分析显示,供试菌株可分为A、B两大类,遗传相似系数范围为0.49~1.00,且供试菌株间的遗传相似性与其地理来源有一定的相关性。综上所述,豫南烟区烟草青枯病菌的致病力存在明显差异且其DNA具有丰富的遗传多样性。     

毒素胁迫烟草抗黑胫病鉴定及抗性指标分析

为建立一种高效准确的烟草黑胫病抗性鉴定方法,以4种具有不同抗性特性的烟草品种为材料,研究培养基附加不同浓度黑胫病病菌毒素及不同胁迫时间对烟草种子萌发和根系生长的影响。结果表明,烟草黑胫病病菌毒素胁迫对烟草种子的发芽率和根系生长均有抑制作用,抑制效果随胁迫浓度的增加而增强,且不同品种对毒素胁迫的耐受力不同,利用体积浓度为50%的毒素胁迫15 d时,抗病品种G28、中抗品种YN116、中感品种净叶黄、感病品种红花大金元的根系长进培养基中的株数比率分别为79.38%、70.74%、33.55%和13.36%。初步确定鉴别烟草种子抗性特性的最佳粗毒素胁迫浓度为50%（即含蛋白质13.53μg/mL,含糖19.64 mg/mL）、最佳鉴定时间为胁迫15 d,利用该方法可在短期内高效准确地鉴定出不同品种（种质）对烟草黑胫病的抗感水平,加快烟草抗黑胫病育种进程。     

湖北省烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在湖北省襄樊、恩施等主要烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离纯化出30个烟草黑胫病菌株。采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTZ(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N.nesophila无致病力,应为1号生理小种,占供试菌系的80%,为湖北省优势生理小种;其他6个菌株中有4个菌株对NC1071有较强致病力,但对L8致病力较弱,有1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,但对L8有较强致病力;6个菌株对N.nesophila无致病力,是否为2号生理小种还是其他致病型,尚待进一步研究确定。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅲ)

综述了烟草黑胫病菌抗甲霜灵菌株群体动态及抗性水平 ,抗药性产生的原因 ,抗甲霜灵菌株的生物学性状遗传与变异 ,甲霜灵对烟草黑胫病菌的毒性作用方式 ,烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的遗传稳定性 ,对甲霜灵的抗药性治理策略和核酸分子杂交技术、PCR、RAPD、RFLP、ELISA技术在烟草黑胫病菌研究中的应用以及烟草黑胫病菌毒性遗传等方面的最新研究进展。     

利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究

为寻求一种快速高通量筛选鉴定烟草抗赤星病种质或材料的方法,本研究以烟草（Nicotiana tobacum L.）种质净叶黄、Beinhart1000-1、NC89 和G140 作为供试材料,利用烟草赤星病菌毒素就烟草种质对赤星病的抗病性鉴定方法进行研究,试验设计3 种鉴定方法：毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法.为验证毒素培养基法鉴定结果的可靠性,对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28 和中烟100 的室内鉴定结果,与其对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果进行了相关性分析.结果表明,室内鉴定结果与田间鉴定结果之间极显著相关（r=-0.9588）,室内鉴定结果可准确反映烟草种质对赤星病的抗病性.     

四川凉山地区烟草黑胫病菌的ITS序列分析

本研究利用真菌核糖体基因转录间隔区(ITS)通用引物,PCR扩增四川省凉山州不同地区的20株烟草黑胫病菌的ITS序列,并对PCR产物进行了克隆测序。结果表明,20个供试菌株的ITS1-5.8S-ITS2总长均为803 bp;各菌株之间的ITS序列同源性达到99.3%以上;与GenBank报道的寄生疫霉台湾烟草分离株Phytophthora parasitica(GU111675.1)的同源性在99.6%~100%之间;但各菌株ITS序列的个别位点存在突变,这些突变主要集中在ITS2区上,其中第468处的突变具有一定地域性,主要为德昌和西昌的菌株。利用MEGA6软件对20个供试菌株及GenBank中登陆的15个疫霉属菌株序列进行聚类分析,供试菌株与GenBank上登录的GU111675.1、KF010303.1、AJ854295.1、KC768775.1、L41383聚在同一聚类组上,均为Phytophthora parasitica(或Phytophthora nicotianae),其它疫霉种聚在不同的聚类组上,遗传关系较远,这表明来自四川凉山不同地区的20株烟草黑胫病分离菌株均为寄生疫霉(Phytophthora parasitica)。     

烟草黑胫病拮抗真菌的筛选及活性评价

为获得更多防治烟草黑胫病的拮抗真菌,从烟草黑胫病发病烟株根际土壤分离20株真菌,通过平板对峙法筛选,发现菌株ZP2-1、ZP2-3、ZP2-4、GZ3、GZ7对烟草黑胫病菌具有较好的抑制效果。形态学和分子生物学分析表明,ZP2-1为里氏木霉（Trichoderma reesei）、ZP2-3为拟康宁木霉（Trichoderma koningiopsis）、ZP2-4为黑曲霉（Aspergillus niger）、GZ3为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）、GZ7为红棕肉座菌（Hypocre rufa）。ZP2-4具有较强分泌纤维素酶和蛋白酶的能力且固体发酵产孢能力显著（p<0.01）高于其余4株菌。ZP2-1、GZ3、ZP2-4固态发酵产物纤维素酶活性相当且显著（p<0.01）高于ZP2-3和GZ7。田间试验结果显示,ZP2-1、GZ3、ZP2-4对烟草黑胫病田间防治效果分别为59.50%、61.82%、85.00%。     

烟草黑胫病菌分子生物学研究进展

烟草黑胫病是烟草主要病害之一,每年给烟草生产造成巨大损失。烟草黑胫病菌隶属于卵菌纲疫霉属。近十几年来随着分子生物学技术的迅猛发展,烟草黑胫病菌的分子生物学研究有了较大进步。本文总结了烟草黑胫病菌在病原菌起源和分类命名、全基因组序列、线粒体基因组序列和功能基因等方面的研究进展,并分析了烟草黑胫病菌在分子生物学研究方面的未来发展方向,以期为烟草黑胫病菌致病机理研究和烟草分子抗黑胫病育种提供一定的参考。     

云南省烟草疫霉生理小种的初步鉴定

病菌生理小种在不同地区的分布有各自特点, 研究各地的生理小种特点可有的放矢安排品种, 达到防病、抗病的目的。就云南省烟草黑胫病病原进行了分离纯化, 采用根部创伤接种法对部分病原进行了致病性测定与生理小种鉴定。结果表明, 2004年分离的39株烟草黑胫病菌株致病率为22.22%~100.00%, 平均发病率为93.73%, 病情指数2.8~86.1。2005年分离的45株烟草黑胫病菌株致病率为66.67%~100.00%, 平均发病率为96.05%, 病情指数16.7~97.2。2006-2008年对55个地方代表菌株进行生理小种鉴别, 发现55个菌株在不同烟草品种上存在致病力分化, 对同一品种致病力存在差异;确定有50个菌株为0号生理小种, 占供试菌系的90.91%, 说明云南省烟草黑胫病菌优势菌为0号生理小种, 在本次鉴定的供试菌株中未发现1、2、3号生理小种。     

抑制烟草黑胫病的混合菌株优化

通过正交试验筛选混合菌株有效抑制烟草黑胫病病原菌（Phytophthora parasitica）菌丝的生长,其中1107、1205、1601、5801和7403五株芽孢杆菌（Bacillus）在室内NYBD培养基上培养,参照5因素3水平正交试验设计进行混菌比例优化。结果表明,1107菌株在生物量和抑菌活性方面都表现出了显著性。5株芽孢杆菌（1×108 CFU/mL）的最优组合为芽孢菌株1107、7403、1601、5801的添加量均为1.2 mL,芽孢菌株1205添加量为0.6 mL。在此优化条件下,生物量（OD600 nm值）为3.18±0.02,抑菌圈直径为（24.22±0.68） mm,分别比单独培养的菌株或其他混合菌株都显著提高。     

烟草疫霉生防细菌的筛选及鉴定

为获得防治烟草黑胫病的生防菌株,通过对峙平板法,从烟田土壤中分离出1株对烟草疫霉具有很好抑菌作用的细菌B40-3.培养3 d后,该菌株对烟草疫霉抑菌带宽度为0.9 cm,抑菌圈半径为2.3 cm,并对其余12种植物病原真菌有很好抑制作用.该菌株在LB液体培养基中,37 ℃,210 rpm条件下培养40 h,OD值达到最大值.依传统生理生化反应鉴定,B40-3属于枯草芽孢杆菌.     

大理州烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性测定

采用含药平板法建立烟草黑胫病菌对杀菌剂烯酰吗啉的敏感基线,并测定了2013年从云南省大理州各烟区分离纯化的烟草黑胫病菌菌株对烯酰吗啉的敏感性。结果显示,烟草黑胫病菌的敏感基线为1.4656 μg/mL;68个田间菌株对烯酰吗啉的EC₅₀值在0.5857~2.5254 μg/mL之间,平均为1.1118 μg/mL。表明烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的活性较高,大理州烟草黑胫病菌的抗药性风险较低。烯酰吗啉可用于大理州烟草黑胫病的有效防控,但应与其他杀菌剂进行合理的轮换使用。     

拮抗烟草疫霉菌的木霉菌株筛选鉴定及防病促生作用研究

为了获得对烟草黑胫病菌具有较好拮抗效果的木霉菌株,从河南省各烟区烟草根茎类病害发生较重烟田健康烟株的根际土壤中共分离获得疑似木霉菌28株,通过平板对峙培养,筛选出菌株XYPQ-1、ZMD-1和XYLS-5对烟草疫霉菌具有较强抑制作用,5 d后抑菌率达90%以上。利用分子生物学方法分别将其鉴定为绿木霉菌（Trichoderma virens）、拟康宁木霉菌（Trichoderma koningiopsis）和近渐绿木霉菌（Trichoderma paraviridescens）。对其代谢物抑菌活性及防病促生效果进行了初步研究,结果表明,3种木霉菌产生的挥发性和非挥发性代谢物均对疫霉菌具有明显的抑制作用,其中XYLS-5的抑制效果最好,处理后5 d,其挥发性和非挥发性代谢产物的抑菌率分别达61.71%和100.00%。3种木霉菌对烟草黑胫病均具有较好的室内防效,其中XYLS-5的防效最高,达80%以上,且具有促进烟草种子萌发和根系生长的作用,可作为烟草黑胫病生物防治的拮抗菌加以开发应用。