烟梗废弃物固态发酵生产白僵菌的适宜条件筛选

为探索废弃烟梗资源化利用途径,以烟梗废料为培养基的主要原料,以杀虫微生物白僵菌(Beauveria bassiana)为目标产物,采用固态发酵法研究了烟梗粒度和含水率对白僵菌产孢量的影响,并通过Plackett-Burman(PB)试验对废弃烟梗发酵产白僵菌的条件进行了初步优化。结果表明:烟梗适宜作为白僵菌的主要发酵培养基质,粒度以原梗较好,且当烟梗与水质量比为1 3.5时,白僵菌生长和孢子萌发状况最好,孢子产量较高;通过PB试验与分析,在选择的9个相关因素中,培养时间、蛋白胨和酵母粉添加量是影响白僵菌孢子产量的3个关键因素;在PB试验条件下,白僵菌孢子最大产量可达8.59×109个/g。研究证实了以烟梗废料发酵生产杀虫微生物白僵菌的可行性,为烟梗废料的综合利用开辟了新途径。     

大豆蛋白胨对粗糙脉孢菌3.1607产番茄红素的影响及其发酵条件优化

该试验以番茄红素产量及干质量为评价指标,通过单因素试验考察大豆蛋白胨对粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）3.1607产番茄红素的影响,并对其添加量、添加时间、菌种接种量进行优化。以单因素试验结果为基础,结合响应面法,对添加了大豆蛋白胨的粗糙脉孢菌发酵产番茄红素发酵条件进行优化。结果表明,当添加大豆蛋白胨时,孢子干质量及番茄红素的产量都明显提高,最佳发酵条件为：大豆蛋白胨添加量11 g/L、发酵55 h时添加、菌种接种量6%,添加后继续发酵51 h后孢子干质量达0.25 g/L,番茄红素产量达9.64 mg/L。     

球孢白僵菌催化苯甲酸合成对羟基苯甲酸的培养条件优化研究

为了提高球孢白僵菌固态发酵产对羟基苯甲酸的能力，本研究确定了最适的苯甲酸添加量、球孢白僵菌接种量和发酵基质的种类，随后对培养基含水量、发酵pH和发酵温度进行单因素分析，在此基础上采用响应面法对上述发酵条件进行分析优化并验证。结果显示：苯甲酸初始添加量为10.11 g/kg、球孢白僵菌接种量为10%、培养基基质为麸皮30 g/kg、基质含水量为60%、发酵pH为7.75以及发酵温度为27℃时，对羟基苯甲酸产量可达（9.12±0.29） g/kg，较优化前产量5.16 g/kg提升76.74%，产率可达90.21%，较优化前51.04%提升39.17%。本研究为微生物合成对羟基苯甲酸，提供了技术参考。     

利用大米固态发酵生产球孢白僵菌的工艺优化

以孢子粉含孢量、含水量及活孢率为质量指标,以单位质量基质产孢数为产量指标,对大米固态发酵生产球孢白僵菌高孢粉的发酵条件进行优化。结果表明,发酵条件为:接种量15%(v/w),初始基质含水量40%,培养温度25℃,环境湿度前4d为100%,中间3d为80%,后3d为60%,培养10d。此条件下,孢子粉含孢量达到(1.93±0.08)×10~(11)g~(-1),含水量为(10.4±1.1)%,活孢率为(97.3±2.1)%,单位质量大米孢子粉产量达到(41.6±2.0)×10~(11)kg~(-1)。     

金属离子促进樟芝深层发酵无性产孢

樟芝(Antrodia cinnamomea)是一种珍稀药食两用蕈菌，其目前最主要的人工培养方式是基于无性孢子接种的深层发酵。为了提高樟芝深层发酵的产孢量及产孢速度，进而提高其种子制备效率及工业化生产效益，该文首先采用单因素法筛选出能显著促进樟芝无性产孢的金属离子，再采用响应面法优化金属离子组合的最佳添加浓度。结果表明，在培养基中单独添加1.0 mmol/L的Ca²⁺、0.1 mmol/L的Fe²⁺及0.1 mmol/L的Zn²⁺可使樟芝最大产孢量较对照组分别提高87.21%、72.39%及35.05%;同时添加0.149 mmol/L的Fe²⁺、2.01 mmol/L的Ca²⁺及0.135 mmol/L的Zn²⁺可使樟芝深层发酵最大产孢量达8.67×10⁷个/mL,较对照组提高133.62%,同时使樟芝无性孢子产量达到最大值的时间缩短24 h。该研究操作方便、成本低廉、效果显著，具有较好的开发价值及应用前景。     

烟草甲幼虫高毒力病原真菌的筛选

为筛选出对烟草甲2龄幼虫具有较好防治效果的病原真菌,在实验室条件下,采用浸渍法测定5株蜡蚧轮枝菌和5株球孢白僵菌对烟草甲2龄幼虫的毒力,筛选出2株对烟草甲2龄幼虫具有高毒力的白僵菌菌株Bb05和Bbr81,将2株菌株配置成不同浓度的孢子悬浮液,测定其毒力并对Bb05菌株的侵染过程进行观察。结果表明,接种孢子浓度1.0×10⁸mL^-1条件下,菌株Bb05处理烟草甲的累积死亡率最高,达77.78%,LT₅₀为8.18 d;菌株Bbr81处理烟草甲的累积死亡率为74.44%,LT₅₀为7.60 d。用不同浓度孢子悬浮液处理烟草甲2龄幼虫后,其累积死亡率随孢子浓度和接种时间的增加而增加,Bb05菌株的LC₅₀为8.3×10⁷ mL^-1,菌株Bbr81的LC₅₀为1.2×10⁷ mL^-1。筛选所得的2个菌株对烟草甲虫2龄幼虫的毒力较高,具有一定的开发应用潜力。     

中华白僵菌产胞内粗多糖提取及发酵条件优化

本文采用单因素试验、正交实验、Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验以及Box-Behnken实验对中华白僵菌（Beauveria sinensis）产孢内粗多糖浸提条件与发酵条件进行优化。结果显示，经正交实验优化后，中华白僵菌产胞内粗多糖提取含量提升37.0%，经Box-Behnken实验优化后确定最佳发酵条件为：可溶性淀粉添加量5%、酵母浸膏添加量2.5%、装液量100 mL/250 mL、初始pH值5.5、温度27℃、转速160 r/min，多糖最高产量为（31.5±1.0） mg/g，对比优化前提高了57.5%。     

尖孢镰刀菌LD105产抑菌多糖固态发酵条件优化

以云南昆明玛卡根际土壤中分离到的尖孢镰刀菌LD105作为发酵菌种,以多糖产量和抑菌率为评价指标,用响应面法优化尖孢镰刀菌产抑菌多糖固态发酵工艺。通过单因素试验,筛选出发酵时间、初始含水量、蔗糖和KH2PO4添加量4?个显著影响因素,研究其交互作用,优化得出最佳发酵工艺条件：发酵时间5?d、初始含水量54%、发酵温度28?℃、初始pH?6、蔗糖添加量3%、KH2PO4添加量0.3%、接种量10%、蛋白胨添加量1.5%、装料量10?g（250?mL锥形瓶为发酵容器）。在此优化条件下,尖孢镰刀菌固态发酵产多糖抑菌率和多糖产量分别为37.6%和30.2?mg/g,抑菌率和多糖产量比优化前分别提高了1.8?倍及1.5?倍。     

棘孢木霉液体发酵条件优化

为研究棘孢木霉液体发酵最优条件,以菌丝体干重和孢子数为指标,通过单因素正交实验对棘孢木霉液体发酵培养基进行优化,并测定棘孢木霉的基本成分。实验结果表明最佳发酵条件为:黄豆粉0.25%,KH₂PO₄ 0.3%,MgSO₄ 0.15%,接种量8×106个/mL,装瓶量100 mL/250 mL,蛋白胨1.35%,葡萄糖3.5%,转速160 r/min,温度25 ℃,自然光照,pH7。此发酵条件可使棘孢木霉干重量达到19.453 g/L,孢子数达到4.4812×109个/mL。本研究为棘孢木霉的工业化生产降低成本,缩短发酵周期打下理论基础。     

红曲霉固态发酵产洛伐他汀的响应面优化

采用Box-Benhnken试验设计和响应面分析,对红曲霉固态发酵产洛伐他汀的工艺条件进行优化,得到最佳的发酵工艺条件为培养时间、初始含水量和大米装量分别为17 d、25.4%、53.3 g/250 mL,在此条件下,洛伐他汀的产量可达15.35 mg/g,与预测值（14.73 mg/g）较为接近。结果表明响应面法优化红曲霉固态发酵产洛伐他汀的条件合理可行。     

副干酪乳杆菌ZG19发酵烟草废水产L-乳酸的响应面优化

烟草废水中含有大量的可溶性糖、含氮化合物和矿物质等营养成分。为资源化利用烟草废水,以本实验室分离并保藏的一株产L-乳酸的副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）ZG19为发酵菌株,以烟草废水为发酵底料,L-乳酸产量为响应值,采用响应面法（RSM）优化发酵工艺。 通过Plackett-Burman试验筛选出对L-乳酸产量影响最显著的因素,进一步设计爬坡试验逼近最优区域,然后设计Box-Behnken响应面优化,分析并确定最佳发酵工艺。 结果表明,在发酵温度39 ℃、发酵时间30 h、菌种接种量10%条件下,得到 L-乳酸实际产量为15.16 g/L,与预测值（15.35 g/L）拟合度达到98.76%,L-乳酸产量显著提高。 因此,采用此方法得到的优化工艺合理而有效,具有实际应用价值。     

干酪乳杆菌XJL发酵废弃烟梗产L-乳酸的Plackett-Burman优化

目的寻求L-乳酸发酵的廉价基质和资源化利用废弃烟梗。方法以废弃烟梗为材料制备水提取液(tobacco stem extraction,TSE),以菌株XJL发酵废弃烟梗提取液制备L-乳酸,通过Plackett-Burman优化设计实验对影响菌株XJL发酵废弃烟梗提取液制备L-乳酸的相关变量因素进行分析评估。结果所选10个相关变量因素中,当发酵时间为24 h时,酵母粉和碳酸钙是影响菌株XJL发酵制备L-乳酸的重要正效应因子,当发酵时间为42 h时,酵母粉、果糖、磷酸氢二钠和碳酸钙是影响菌株XJL发酵制备L-乳酸的重要正效应因子。在Plackett-Burman优化实验设计中,发酵时间为24 h和42 h时,L-乳酸的最高产率分别为307.5 g/kg和315.0g/kg。结论在Plackett-Burman实验中,发酵时间的延长对L-乳酸产率的提高影响不大,营养添加物能够提高L-乳酸的产量。     

烟草根黑腐病根际拮抗菌的筛选、鉴定及其促生防病效果

为挖掘对烟草根黑腐病菌有较高拮抗效果的根际促生菌资源,从四川广元和陕西汉中等地采集30份烟草根际土壤,以烟草根黑腐病菌为靶标,采用温度筛选法和平板对峙法分离筛选出有高效拮抗活性的菌株,并对该菌株进行系统发育分析,采用抗生素标记法和温室盆栽法测定菌株LY79的定殖规律、对烟草的促生效果以及对烟草根黑腐病的防治效果。结果表明：（1）从烟草根际土壤分离到一株烟草根黑腐病高效拮抗菌株LY79,经形态学、生理生化鉴定结合16S rRNA和持家基因ropB分析将菌株LY79鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。（2）抗生素标记菌株LY79^A在烟草根际土定殖规律为先下降后上升再下降最终趋于稳定,且施药40 d后仍能在烟草根际土、根系、茎、叶分离到1.34×10⁶、2.91×10⁴、1.81×10⁴、1.01×10⁴ CFU/g的菌株LY79^A,说明其定殖能力较强。（3）菌株LY79对烟草促生效果较好,处理60 d后,烟草的株高、茎粗、整株干质量、根干质量分别增加了34.68%、37.85%、103.79%、72.55%。（4）1×10⁹ CFU/mL浓度的菌株LY79发酵液对烟草根黑腐病的盆栽防效达71.54%,仅略低于对照药剂70%甲基托布津500倍液。解淀粉芽孢杆菌LY79在烟草根黑腐病防治中具有较大的应用潜力。     

植物乳杆菌胞外多糖发酵条件的优化

目的：对植物乳杆菌胞外多糖的发酵条件进行优化。方法：采用Plackett-Burman法从影响植物乳杆菌胞外多糖(EPS)产量的14个因素中筛选出3个主要影响因素,然后通过响应面法探讨最优工艺参数。结果：影响植物乳杆菌胞外多糖产量的主要因素是蔗糖质量浓度、接种量以及发酵温度,其最佳条件为蔗糖质量浓度34g/L、接种量5%、发酵温度31℃,在此条件下发酵的植物乳杆菌胞外多糖产量达425.16mg/L。结论：应用Plackett-Burman设计和响应面法进行植物乳杆菌胞外多糖发酵条件的优化是可行的。     

废弃烟梗发酵生产真菌吸附剂及其脱色作用

为资源化利用废弃烟梗,从其固态发酵物中分离筛选出1株对染料有高效吸附脱色作用的真菌,根据培养和显微特征初步鉴定为青霉菌(Penicilliumsp.),命名为LY7。LY7能够在废弃烟梗水提取液中快速生长形成菌丝球。以刚果红为目标染料,研究了青霉菌LY7灭活菌丝球和由菌丝球制备的粉状菌体生物吸附剂的脱色效果,结果表明:在振荡脱色条件下,8 g/L的灭活菌丝球3 h对100 mg/L的刚果红溶液的脱色率为96.4%;1.5 g/L的粉状菌体对100 mg/L刚果红溶液9 h的脱色率为95.4%。因此,利用废弃烟梗水提取物发酵生产青霉LY7菌体制备生物吸附剂,既能应用于染料废水脱色,又能为废弃烟梗的资源化利用提供一种新思路。     

响应面法优化粪肠球菌包被发酵培养基

本研究旨在优化粪肠球菌包被发酵培养基,以获得高密度包被粪肠球菌。以包被培养活菌含量为检测指标,采用Plackett-Burman(PB)试验分析培养基中对粪肠球菌发酵影响最重要的主要因素,结合响应面法(RSM)对主要因素进行了优化,并研究了最优条件下包被培养的粪肠球菌冻干粉的稳定性。结果表明,最优包被发酵培养基配方为:葡萄糖4.93%、蛋白胨 1%、牛肉膏 0.8%、酵母粉 0.6%、柠檬酸铵 0.3%、K₂HPO₄·7H₂O 0.2%、MgSO₄·7H₂O 0.06%、MnSO₄·H₂O 0.045%、NaAc·3H₂O 0.6%、吐温80 0.1%、海藻酸钠 1.87%、纳米碳酸钙 3.65%。在此条件下,粪肠球菌包被活菌数达6.83×109 CFU/mL,与预测值误差仅4.12%。贮存稳定性试验表明,制备成的冻干粉在37 ℃条件下贮存90 d后仍保留80%以上的存活率,说明包被培养粪肠球菌冻干粉具有较高的稳定性。     

屎肠球菌BC-3 产类细菌素发酵培养基的优化

通过Plackett-Burman 设计法对影响屎肠球菌(Enterococcus faecium)BC-3 产类细菌素发酵培养基的10 个因素进行评价,筛选出具有显著效应的3 个因素：蛋白胨、牛肉膏、柠檬酸二铵。用最陡爬坡路径逼近类细菌素最大产量响应区域,并通过响应面分析法确定主要影响因素的最佳水平组合为蛋白胨33.1g/L、牛肉膏55.6g/L、柠檬酸二铵4.9g/L。优化后培养基发酵液抑菌圈直径达到17.13mm,比优化前提高了50.79%。     

抗烟草疫霉活性木霉与芽孢杆菌共培养体系的构建与优化

为减轻化学药剂防治烟草疫霉带来的弊端,提高生防菌剂效果,通过琼脂糖扩散法筛选抗性木霉并构建木霉和枯草芽孢杆菌Tpb55共培养体系,采用菌丝生长速率法评价了种间互作防治烟草疫霉的效果,利用单因素法优化共培养体系的培养基成分和发酵条件,并通过盆栽试验验证其对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,棘孢木霉HG1具有良好的抗烟草疫霉活性,与枯草芽孢杆菌Tpb55的共培养体系如下:HG1(10⁶CFU/mL)接种量为2%,与Tpb55(10⁶CFU/mL)接种比例为10:1,采用序列共培养方式,即先接种HG1,24h后接种Tpb55。优化后的最适培养基成分为木糖10 g/L,蛋白胨和酵母粉(质量比为2:1)5g/L;最佳发酵为温度25℃,初始pH7.5,转速140r/min。共培养发酵液盆栽防病效果显著优于单培养,防治效果达到74.72%。该体系发酵后能够明显提升两株生防菌抑制烟草疫霉的活性,并对烟草黑胫病具有显著防病效果,为后续多菌株共发酵生防菌剂的开发提供基础。     

MICROBIOLOGICAL PROFILE OF MURCHA STARTERS AND PHYSICO-CHEMICAL CHARACTERISTICS OF POKO, A RICE BASED TRADITIONAL FERMENTED FOOD PRODUCT OF NEPAL

Poko is a traditional rice based fermented food of Nepal prepared using murcha as the starter. The microbiological evaluation of eleven murcha starters showed that the lactic acid bacteria and yeast were dominant at 5×10⁵ to 1.0×10⁹ cfu g^-1 range while fungi were present at 2×10⁵ to 1.0×10⁷ cfu g^-1. Coliforms (1×10² to 1.4×10⁵ cfu g^-1), E. coli (1×10³ cfu g^-1), and. S. aureus (1×10² g^-1) were present in some of the murcha starters. Bacillus cereus was absent in all the starters. The microbial succession during poko fermentation suggested that it was primarily a mixed fermentation of yeasts, molds and lactic acid bacteria. The quality poko product obtained after two days and three days of fermentation at 30°C had a pH, acidity, reducing sugar, total sugar, and alcohol in the range of 3.2-3.0, 1.1-1.3 (% LA), 14.4-15.6 (%), 14.6-18.2 (%) and 1-1.6 (%) respectively. These critical ranges of biochemicals in the poko, due to the fermentation process imparted desirable organoleptic characteristics to the product. Saccharomyces cerevisiae, Candida versatilis, Lactobacillus spp, Pediococcus spp and Rhizopus spp were the dominant microorganisms identified from the poko fermentation. The results suggest that the quality of poko depends upon the microbial flora of the traditional murcha starters.