藏羊源纤维素降解菌-沙福芽孢杆菌的分离鉴定及其生物学特性

为获得藏羊源纤维素降解益生菌,该试验采用纤维素刚果红培养基从藏羊瘤胃液中分离筛选出可降解纤维素的细菌,结合形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析对其进行种属鉴定,通过生长曲线的测定、抑菌试验和药敏试验研究该分离菌株的部分生物学特性。结果表明：筛选出一株纤维素刚果红培养基上呈粉红色、革兰氏染色呈阳性的菌株,命名为BS1-ql。分离菌株BS1-ql产芽孢,氧化酶试验、触酶试验呈阳性等生理生化特征符合芽孢杆菌属的特点,其16S rDNA序列与多株芽孢杆菌属菌株相似度达到96%以上,与沙福芽孢杆菌同源性达100%且处于同一最小分枝,明确该分离菌株是沙福芽孢杆菌。沙福芽孢杆菌BS1-ql生长迅速、接种2 h后进入对数生长期;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌的抑菌圈均达8.96 nm以上,均有一定的抑制能力;对大多数常用抗生素呈现不同程度的敏感,对头孢他啶抗生素表现为耐药。结论：成功分离鉴定出一株藏羊源沙福芽孢杆菌,该分离菌株生物学特性良好,为藏羊源益生菌提供了候选菌株。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的筛选与鉴定

通过对246株芽孢杆菌进行筛选,以期获得对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）具抑制作用的菌株,抑菌结果表明,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有抑制作用的菌株有5株,其中菌株1012-4的抑菌活性最强;为确定菌株种属,对优选菌株进行形态特征观察、生理生化特征鉴定以及API50 CHB鉴定,初步确定1012-4为枯草芽孢杆菌;为进一步确证菌株类型,实验采用了16S rDNA基因测序,序列结果表明,菌株1012-4为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌种;经反复确证,确定菌株1012-4为优势菌株,抗菌活性显著,为新型抗MRSA药物的研发提供了菌株来源。     

烟叶表面高效降解蛋白质芽孢杆菌的分离筛选及其鉴定

利用芽孢杆菌耐高温的特性,从烟叶表面分离筛选并得到1株可高效降解蛋白质的菌株F-Y-11,其蛋白质降解圈直径与菌落直径比值(HC值)为5.50,蛋白酶活力为25.67 U.通过形态学特征及生理生化特征鉴定菌株F-Y-11为芽孢杆菌属.将其制成菌剂对烟丝进行发酵,测得蛋白质降解率为29.32％.     

基于16S rRNA基因测序分析烟叶发酵过程中表面微生物的多样性

雪茄烟叶经过发酵处理才能制成风味独特的雪茄产品,研究烟叶发酵过程中微生物的多样性对提高国产雪茄烟叶品质有重要意义。作者采集了来自云南省8个地区初步晾晒的雪茄烟叶和7种来自多米尼加共和国各地的优质雪茄烟叶,基于16S rRNA基因测序技术鉴定各个样品表面微生物种类,通过OTU聚类分析、Alpha多样性分析、物种组成分析等方法进行微生物多样性分析,获得晾晒烟叶表面的优势菌。结果显示,云南省雪茄烟叶的优势菌属为葡萄球菌属,其他常见菌属有假单胞菌属、无色杆菌属、棒状杆菌属、泛菌属等;多米尼加共和国雪茄样品中微生物物种分布较中国雪茄样品更均匀,微生物的多样性整体高于中国雪茄样品,其优势菌属多为葡萄球菌属、棒状杆菌属、四联球菌属;云南省临沧市雪茄烟叶优势菌属与多米尼加雪茄相似,而且它的物种多样性和均匀度高于中国其他地区,具有较大的发展潜力。     

海南雪茄烟叶霉变微生物鉴定及拮抗菌株筛选

为明确引起海南雪茄烟叶霉变的微生物种类并筛选其拮抗菌株防治烟叶霉变,分别从海南霉变雪茄烟叶表面分离、纯化得到霉变微生物和拮抗微生物,采用形态学和分子生物学相结合的方法鉴定微生物种类。鉴定和筛选结果表明,引起海南雪茄烟叶霉变的微生物主要为篮状菌属、帚霉属和曲霉属,得到3株霉变菌株分别为Talaromyces funiculosus、Scopulariopsis brevicaulis和Aspergillus occultus。筛选到2株拮抗效果良好的拮抗菌株,分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）。引起海南雪茄烟叶霉变的微生物主要为篮状菌属、帚霉属和曲霉属菌株,筛选到的2株芽孢杆菌对致霉菌有良好的拮抗作用,为雪茄烟叶霉变的防治提供了参考。     

烟草增香细菌的筛选及其作用效果

为研究烟草增香细菌对烟叶吸食品质的影响,以云南主要烟草种植区的根际土壤和新鲜烟叶为微生物分离源,对菌株产酶和降解功能进行筛选,并对烟丝发酵样感官质量和香味成分进行分析。结果表明,从供试云南微生物分离源样品中分离、筛选到一株可同时产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶,并可降解β-胡萝卜素的复合功能型菌株YN14;与对照相比,菌株YN14发酵样的烟气细腻度有改善,香气质和香气量均有增加,甜感有增加,刺激减小;GC/MS分析结果也表明,YN14发酵样烟气中香味物质含量明显增加。菌株YN14经鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）细菌。综上所述,芽孢杆菌YN14具产多种酶和降解功能,并可明显改善烟草吸食品质。     

腐败醋中微生物的分离鉴定及乳酸链球菌素对其抑制作用

从腐败醋中分离出84 株不同微生物菌株,通过对其形态学观察、革兰氏染色、16S rDNA测序,并与GenBank中已知序列进行比对,以及进一步测定16S～23S ITS,发现其由20 株解淀粉芽孢杆菌、12 株地衣芽孢杆菌、6 株芽孢杆菌属1NLA3E、12 株蜡样芽孢杆菌、4 株巨大芽孢杆菌、3 株短短芽孢杆菌、2 株短小芽孢杆菌、11 株凝结芽孢杆菌、12 株类芽孢杆菌、1 株耐酸乳酸菌、1 株产气荚膜梭菌组成。除耐酸乳酸菌外,均为革兰氏阳性芽孢杆菌。通过管碟法和比浊法测定了乳酸链球菌素（Nisin）对以上菌株的抑菌效价,显示Nisin对腐败醋中分离得到的微生物菌株均具有明显的抑菌或杀菌活性。     

宜春富硒温泉中产蛋白酶嗜热菌株的筛选与鉴定

目的:从宜春富硒温泉古井水中筛选分离产蛋白酶嗜热菌,并进行初步的分类鉴定。方法:通过脱脂牛奶平板,55℃高温培养的方法筛选产蛋白酶嗜热菌。通过形态观察、生理生化鉴定和生长特性的研究,以及菌株16S rRNA基因序列的分析,确定其种属和系统进化关系。结果:从水样中分离筛选到23株产蛋白酶嗜热菌,生长特性实验表明,这23株菌株生长pH范围为pH5.0~9.0,生长的温度范围25~65℃,除N27外,其余菌株最适生长温度为45~55℃。通过生理生化和16S rRNA基因序列分析,结果表明:这些菌株分别属于厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)、硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)和短芽孢杆菌属(Brevibacillus)4个属。其中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)2株,波斯坦芽孢杆菌为(Brevibacillus borstelensis)4株。7株厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)菌株中,N9、N13、N18、N19、N28初步鉴定为Anoxybacillus rupiensis,而N2、N12初步鉴定为Anoxybacillus sp,剩余的10株(除N8外)均嗜热气硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillus thermoaerophilus),占全部分离菌株总数的39.1%,为宜春富硒温泉水样中产蛋白酶嗜热菌的优势菌群。结论:获得4个属产蛋白酶嗜热菌株,丰富了产蛋白酶菌株的资源。     

基于GC/MS对1株芽孢杆菌FJAT-13831的鉴定

目的通过芽孢杆菌物质组学分析,快速地区分亲缘关系极近的芽胞杆菌种类。方法本文利用GC/MS检测了芽孢杆菌9个模式菌株和1个分离菌株FJAT-13831的胞外物质成分,并进行主成分和聚类分析。结果不同的芽孢杆菌种间胞外物质具有显著性差异,FJAT-13831的胞外物质成分与其相近种类差异很大,应是芽胞杆菌属的一个新种。结论该方法可从代谢水平上对芽孢杆菌亲缘关系相似的不同种进行区分,为芽孢杆菌的鉴定及新种判断提供一种新的技术手段。     

感官异常番茄酱和杏酱中腐败细菌的快速鉴定

目的采用微生物快速质谱鉴定法快速鉴定新疆感官异常番茄酱和杏酱中的细菌。方法对感官异常番茄酱和杏酱中的细菌进行分离培养获得9株细菌菌株,运用Vitek MS微生物快速质谱鉴定仪对分离的细菌菌株进行鉴定,同时采用VITEK2微生物鉴定仪鉴定菌株。结果番茄酱中获得的5株菌分别为:解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沃氏葡萄球菌、粪肠球菌;杏酱中获得的4株菌分别为巴氏葡萄球菌、粪肠球菌、沃氏葡萄球菌、浸麻类芽孢杆菌。结论本研究快速鉴定结果与化学鉴定结果基本一致。     

云南不同产地醇化雪茄烟叶微生物群落差异研究

为探讨云南不同产地醇化雪茄烟叶的微生物群落结构与国外优质雪茄烟叶的差异,以6个不同产地的7组雪茄烟叶为试验材料,采用高通量DNA测序技术,对烟叶样品中的细菌、真菌群落进行了微生物组学分析。结果显示,样本中细菌群落丰富度高于真菌。根据主要菌群丰度的相似性特征,能够对不同产地的样本进行聚类。在细菌方面,云南德宏、玉溪的烟叶与巴西烟叶群落结构最接近,其共有且相对丰度较高的主要菌属为Staphylococcus、Atopostipes、Corynebacterium、Pseudomonas及Brevibacterium。在真菌方面,同样是玉溪、德宏与巴西、多米尼加的样本最接近,它们之间共有且丰度较高的类群是Aspergillaceae科的1个属、Alternaria属、Aspergillus属、Wallemia属以及Cladosporium属等。这些微生物可能对降解烟草中的大分子有机物起到积极作用。     

基于高通量测序的雪茄烟叶细菌多样性与功能预测

  背景和目的  环境条件与烟叶理化性质的改变直接影响烟叶的细菌群落结构和功能。为探究海南不同产区茄衣、茄套和茄芯细菌群落组成,研究雪茄烟叶细菌群落结构及代谢功能。  方法  以海南光村、昌江、白沙和五指山4个产区茄衣、茄套和茄芯为试验材料,基于16S rRNA测序技术分析细菌群落结构,PICRUSt预测分析细菌群落的代谢功能。  结果  12个样本中共聚类2317个OTU,属于10个科。五指山产区茄套的细菌群落丰富度及多样性最高,其Chao1指数、ACE指数和Shannon指数分别为344.00、344.00和6.54。光村和五指山产区细菌群落丰富度及多样性均表现为茄衣 < 茄套、茄芯。昌江产区则表现为茄衣 > 茄芯、茄套。茄衣的主要优势菌科为葡萄球菌科,相对丰度明显高于茄套、茄芯,不同产区之间无明显差异。茄套和茄芯的主要优势菌科为肠杆菌科,明显高于茄衣,且昌江、五指山 > 光村、白沙。KEGG代谢通路分析结果表明,不同产区茄衣、茄套和茄芯细菌预测功能种类差异较小,丰度差异较大。  结论  在科分类水平上,不同产区不同用途雪茄烟叶细菌群落多样性丰富,细菌群落结构组成相似,相对丰度有所差异,葡萄球菌科、肠杆菌科是造成烟叶细菌群落结构差异的关键菌科。细菌群落代谢途径丰富,主要富集在碳水化合物代谢、氨基酸代谢和能量代谢通路中,除此之外,也较多的富集在辅助因子以及维生素代谢等通路。      

国内外不同产区和类型雪茄烟烟草特有亚硝胺及生物碱含量分析

为明确国内外不同产区雪茄烟叶生物碱组成和含量、烟草特有亚硝胺（TSNAs）含量水平及相关关系,本试验收集了国内外55个茄芯、茄衣和茄套烟叶样品,并分产区和类型进行分析。结果表明,不同产区雪茄烟样品生物碱含量样本间变异性均较大,烟碱含量为0.66%~10.02%,降烟碱含量为0.04%~0.79%,烟碱转化率为2.07%~28.01%。除国内产区雪茄烟叶生物碱含量相对较高外,其他产区间生物碱含量无显著差异,茄芯烟叶总生物碱含量高于茄衣和茄套。各产区和各类型雪茄烟叶烟碱向降烟碱转化问题均较为突出。不同产区雪茄烟样品总TSNAs含量范围为1.46 μg/g~25.75 μg/g,以NNN含量最高,在0.63 μg/g~20.91 μg/g之间,变异性较大。相关分析表明烟叶烟碱转化率较高是造成目前雪茄茄芯、茄衣、茄套烟叶总TSNAs和NNN含量较高的主要原因,针对烟碱转化性状进行品种改良,对生物碱组成进行优化是实现优质低害中式雪茄烟叶生产的重要途径。      

雪茄烟外包叶的研究进展

介绍了雪茄烟的发展历程和目前发展状况,阐述了国内外对雪茄烟外包叶的研究进展,分析了我国发展雪茄烟外包叶的前景和开展相关研究的必要性和可行性,展望了雪茄烟外包叶的研究方向。     

促烟草种子萌发的细菌菌株筛选及促生特性研究

以芽孢杆菌属、贪铜菌属、假单胞菌属及土壤杆菌属的7株细菌菌株对烟草K326种子进行浸种处理,通过测定发芽率、发芽势、发芽指数及活力指数筛选到能够促进种子萌发的2株菌株;以钼蓝比色法测定培养液可溶磷含量,Salkowski法测定产IAA能力,CAS法测定分泌铁载体能力,对筛选出的2株菌的促生特性进行分析。结果表明,从贵州烟区土壤分离的2株高效氨化芽孢杆菌菌株可显著提高烟草种子的发芽指标,幼苗苗长显著高于未浸种处理。促生特性分析显示Bacillus toyonensis AMM-2和Bacillus mobilis AMM-5菌株的溶磷量分别为26.26和26.80 mg/L,产IAA的能力分别为21.57和7.40 μg/mL,铁载体分泌活性分别为35.08%和8.64%。研究显示,2株高效氨化细菌菌株具有优良的促生特性及显著的促种子萌发效应,可应用于烟草漂浮育苗,为促生有机肥的研制提供依据。     

不同规格育苗盘对雪茄烟苗生长和膜上移栽烟叶产质量的影响

为了筛选能培育适合膜上移栽方式的高素质雪茄烟苗的湿润育苗盘,试验研究了50孔、54孔、70孔、72孔和100孔5个规格育苗盘对烟苗生长和膜上移栽烟株大田生长及烟叶产量、经济效益的影响。结果表明,50孔和54孔育苗盘所育烟苗农艺性状、根系形态指标、鲜干质量、壮苗指数较高,大田烟叶生长较快,但烟叶产量、茄衣烟叶产量较低,育苗投入成本明显增加,烟叶经济效益降低。72孔育苗盘所育烟苗素质整体较高,烟株大田长势好,烟叶产量、茄衣产量、茄衣产出率均较高,其中茄衣产出率较烟苗素质高的50孔处理提高9.92%,烟叶经济效益较育苗投入最高的50孔处理提高8.28%。70孔育苗盘所育烟苗的根冠比、壮苗指数与72孔处理差异不显著,但其大田烟叶产量、茄衣烟叶产量却显著低于72孔处理。而100孔育苗盘所育烟苗素质尽管低于其他处理,但其大田烟叶产量、茄衣产量最高,分别较最低的54孔处理提高15.42%、28.43%,育苗投入成本最低,烟叶经济效益较50孔处理提高12.06%。因此,72孔和100孔苗盘可用于海南雪茄烟叶秋季湿润育苗,其所育烟苗适合雪茄烟叶膜上移栽使用。     

五种生防芽孢杆菌碳源代谢表型分析

为了解芽孢杆菌类生防细菌的碳源代谢表型特征,以5种7株生防芽孢杆菌[短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、饲料类芽孢杆菌（Paenibacillus pabuli）及枯草芽孢杆菌（Bacillus subtillis）]为对象,采用Biolog代谢表型技术测定了它们的190种碳源代谢表型。结果表明,碳源代谢数量最多的是短小芽孢杆菌,为107种,其他依次为：地衣芽孢杆菌（96种）、解淀粉芽孢杆菌（89种）、饲料类芽孢杆菌菌株4（75种）,菌株5（78种）、枯草芽孢杆菌菌株1（74种）、菌株2（70种）。芽孢杆菌菌株在种间和种内的代谢表型间均存在差异,共同代谢的碳源有54种,其中高效代谢的碳源有24种,包括17种多糖类碳源（L-阿拉伯糖、D-海藻糖、D-甘露醇、甘油、D-木糖、D-核糖、D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖等）和7种有机酸类碳源（D,L-苹果酸、L-天冬酰胺酸、柠檬酸、延胡索酸、L-苹果酸、丙酮酸和5-酮基-D-葡萄糖酸）。研究结果为芽孢杆菌类生防菌剂的开发和利用提供了理论基础。     

Colour formation in fermented sausages by meat-associated staphylococci with different nitrite- and nitrate-reductase activities

Three Staphylococcus strains, S. carnosus, S. simulans and S. saprophyticus, selected due to their varying nitrite and/or nitrate-reductase activities, were used to initiate colour formation during sausage fermentation. During fermentation of sausages with either nitrite or nitrate added, colour was followed by L^*a^*b measurements and the content of nitrosylmyoglobin (MbFe^IINO) quantified by electron spin resonance (ESR). MbFe^IINO was rapidly formed in sausages with added nitrite independent of the presence of nitrite reducing bacteria, whereas the rate of MbFe^IINO formation in sausages with added nitrate depended on the specific Staphylococcus strain. Strains with high nitrate-reductase activity showed a significantly faster rate of pigment formation, but other factors were of influence as well. Product stability for the sliced, packaged sausage was evaluated as surface colour and oxidation by autofluorescence and hexanal content, respectively. No significant direct effect of the Staphylococcus addition was observed, however, there was a clear correspondence between high initial amount of MbFe^IINO in the different sausages and the colour stability during storage. Autofluorescence data correlated well with hexanal content, and may be used as predictive tools. Overall, nitrite- and nitrate-reductase activities of Staphylococcus strains in nitrite-cured sausages were of limited importance regarding colour development, while in nitrate-cured sausages strains with higher nitrate reductase activity were crucial for ensuring optimal colour formation during initial fermentation stages.     

生物有机肥对烟草青枯病的防效及对土壤细菌群落的影响

烟草青枯病是一种危害严重的土传性病害,为了防治烟草青枯病,筛选了3株拮抗青枯雷尔氏菌的芽孢杆菌（甲基营养型芽孢杆菌JK3、枯草芽孢杆菌JK4和解淀粉芽孢杆菌JK10）,将其发酵液添加到有机肥中,经二次发酵后获得生物有机肥（SF2、SF4）,施入烟田。结果表明,生物有机肥能较好地防治烟草青枯病,同时促进烟株的生长,SF2、SF4处理的防效分别为82.18%、68.82%。同时,采用高通量测序技术分析了土壤细菌的群落结构,发现生物有机肥显著影响了土壤细菌的群落结构,促进了土壤中有益菌（如鞘氨醇单胞菌属、类芽孢杆菌属、耐热芽孢杆菌、梭菌属等）的增殖。芽孢杆菌和链霉菌的数量也明显增加,推测链霉菌和芽孢杆菌可抑制青枯雷尔氏菌的繁殖,进而控制烟草青枯病的发生。施用添加拮抗芽孢杆菌的生物有机肥是防治烟草青枯病的一项有效措施。