烤烟品种K326突变株抗烟草普通花叶病(TMV)的研究初报

通过2006~2008年的田间试验,进行了烤烟品种K326突变株CQY材料对烟草普通花叶病(TMV)抗性研究。结果表明:接种TMV后第7 d K326、CQY和Coker176心叶表现系统斑驳的发病率分别为99.10%、42.54%和1.18%;接种TMV后第14 d和第21d,CQY和Coker176发病率与第7 d相比略有增加,K326发病率为100%,方差分析表明3个处理间差异极显著(P0.01)。CQY没有表现系统斑驳的烟株在接种叶片部位表现过敏性坏死斑,症状与Coker176的过敏性坏死斑相似。CQY病情指数从第7 d的10.64快速发展到第14 d的35.11,最后到第21 d的39.63,方差分析结果显示,接种TMV后第7 d、第14 d和第21 d K326、CQY和Coker1763个处理间的病情指数差异均为极显著(P0.01)。农艺性状测量结果表明,CQY材料与K326在株高、叶片数、茎围、节距等差异不显著,CQY材料较K326叶片变短变宽;产量产值与K326差异不显著(P0.05)。     

不同抗性烟草种质对CMV侵染的细胞响应差异分析

为解析烟草对CMV的抗病细胞学机制,以抗病品种台烟8号和感病品种NC82为材料,利用透射电子显微镜对比两品种在接种CMV后发病过程中的细胞超微结构变化。结果表明：（1）接种CMV后,台烟8号发病症状多为花叶,NC82发病症状多泡斑和深绿、褪绿区域相间;（2）对比NC82轻微花叶和泡斑的超微结构发现,二者叶绿体类囊体片层都减少,但泡斑症状细胞内线粒体嵴和CMV颗粒密度都高于轻微花叶症状细胞,说明泡斑的细胞病变程度重于花叶症状;对比NC82和台烟8号的深绿和褪绿区域细胞超微结构发现,深绿区域的叶绿体形态较完整,而褪绿区域的叶绿体严重变形、类囊体片层紊乱、淀粉粒畸形或消失,说明褪绿区域叶肉细胞病变程度重于深绿区域;（3）对比所有病变叶片中过氧化物酶、自噬小体及内膜系统结构发现,台烟8号在CMV侵染后,其三者形态结构都比NC82的更规则有序。研究结果为进一步探究抗CMV烟草品种的抗性分子机制提供理论依据。     

烘烤环境对烟叶淀粉酶和淀粉磷酸化酶活性的影响

以烤烟品种红花大金元和K326的中部叶为材料,研究了烘烤过程中烟叶淀粉酶和淀粉磷酸化酶活性变化及烘烤环境对这两种酶活性的影响.结果表明,烘烤过程中烟叶淀粉酶活性出现两次高峰,分别在烘烤的36h和72h时;在鲜烟叶中淀粉磷酸化酶活性较高,随着烘烤进程,至24 h时达第1次高峰,之后降低,48 h时出现低谷,随后又于72 h时达第二次高峰.在整个烘烤过程中,采用低温低湿变黄,慢速升温定色的烘烤环境,使烟叶内淀粉酶和淀粉磷酸化酶活性较高,有利于烟叶淀粉的降解.     

南方根结线虫侵染不同抗性烟草品种的组织病理学观察

分别利用烟草抗病品种K326和感病品种红花大金元研究了南方根结线虫侵染过程中的组织病理学变化。结果显示,接种后3d,2品种都能形成巨型细胞,且巨型细胞的数量和形态没有显著差异。接种后15d,感病品种中巨型细胞正常发育,而抗病品种中巨型细胞出现空泡。接种25d,抗病品种巨型细胞发生崩解。表明不同抗性品种巨型细胞的形态变化与品种的抗性有关。     

NaCl 胁迫对烤烟叶肉细胞超微结构的影响

为了探明NaCl 胁迫条件下烤烟叶片细胞超微结构的变化规律,利用透射电子显微镜对NaCl 胁迫下烤烟叶肉细胞超微结构进行了观察,并分析了烤烟应对NaCl 胁迫时细胞结构的变化。结果发现,未胁迫处理的叶绿体结构完整,形态未随处理时间的增加而发生明显改变,线粒体内外膜完整,核液浓度较高,大液泡结构清晰,细胞质与细胞壁结合紧密;盐胁迫处理后,叶绿体基粒片层松散、变形,失去清晰结构,整体结构紊乱,与自然衰老的叶肉细胞相比,未见明显的被膜破裂,线粒体膜内陷、破裂,外膜部分受损,细胞核液浓度降低,出现明显的异染色质化,核膜部分破损、界限模糊,液泡所占细胞比例变小,发生质壁分离。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

接种TMV的烟草高温胁迫后防御酶活性的变化

采用温度转换和人工接种试验研究了接种TMV的烟草经高温胁迫后防御酶活性的变化。结果表明:烟草接种TMV后经过高温处理(48℃,24h),防御酶中的超氧化物歧化酶(SOD)活性变化较小;过氧化氢酶(CAT)活性在处理后2d内没有明显变化,2d时高于对照;过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均高于对照;多酚氧化酶(PPO)活性在大部分阶段高于对照。因此,CAT、POD、PPO、PAL活性的变化可能与高温诱发烟草对TMV的抗性有关。     

烟草细胞质雄性不育系SK01的胞质效应及特异性分子标记

为了鉴定项目组发现的K326雄性不育自然突变株SK01与生产应用的不育胞质sua-CMS的异同,分析其在烟草育种和生产中的应用潜力,本研究以tab1-CMS不育系SK01和其同核异质系K326为母本,分别与4个烤烟品种杂交构建2组F1代杂交种,在两个地点和人工气候室中比较8个F1代以及SK01和K326之间的主要农艺性状和抗病性差异,开展了tab1-CMS特异的DNA标记筛选。结果表明,SK01细胞质增强烟草杂交种F1代对CMV、黑胫病的抗性,对株高、茎围等农艺性状以及PVY、TMV抗性无显著的细胞质效应;叶绿体基因组trnC-trnD基因区间,扩增到可有效区分烟草不育胞质类型的1个588 bp的特异性片段。本研究发现的不育胞质tab1-CMS与生产应用的sua-CMS类型不育系有明显差异,对农艺性状和抗病性无明显的不利影响,是一种有一定应用潜力的不育细胞质新突变类型。     

烘烤过程中不同成熟度烟叶淀粉的降解动态

以烤烟品种红花大金元和K326的中部叶为材料,研究了不同成熟度烟叶烘烤过程中淀粉酶和淀粉磷酸化酶活性动态及对烤烟淀粉降解的影响。结果表明:淀粉的降解是淀粉酶和淀粉磷酸化酶综合作用的结果。烘烤过程中烟叶淀粉酶活性出现两次高峰,分别在烘烤的36h和72h;在鲜烟叶中淀粉磷酸化酶活性较高,随着烘烤过程的推进,至24h时达第1次高峰,之后降低,48h时出现低谷,随后又于72h达第2次高峰。不同成熟度的烟叶中淀粉酶和淀粉磷酸化酶活性相比较,均以适熟叶中两种酶的活性较高,淀粉降解较快,烤后烟叶淀粉含量较低,水溶性糖和还原糖含量较高,总体化学成分较协调。     

低温胁迫对烤烟幼苗光合荧光特性及叶片结构的影响

为探明苗期烟草响应低温胁迫的光合生理机制,对烤烟品种红花大金元和K326进行了低温胁迫0 h（CK）、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h处理,研究了低温胁迫对光合作用参数、叶绿素荧光参数、叶片组织结构和叶绿体超微结构的影响。结果表明:低温胁迫下,叶片净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、胞间CO₂浓度（Ci）和蒸腾速率（Tr）显著降低,水分利用效率（WUE）和气孔限制值（Ls）显著升高;非光化学猝灭系数（NPQ）显著升高,PS Ⅱ最大光化学效率（Fv/Fm）、PS Ⅱ潜在活性（Fv/Fo）、PS Ⅱ有效光化学量子效率（Fv'/Fm'）、PS Ⅱ实际光化学量子效率（Φ_{PS Ⅱ}）、光合电子传递效率（ETR）和光化学猝灭系数（q_P）显著降低;冷敏感品种K326叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度和栅栏组织/海绵组织比显著降低,叶片细胞发生质壁分离,叶绿体发生形变,基粒片层排列松散,淀粉粒增大,嗜锇颗粒增多。低温胁迫下,红花大金元较K326具有较强的耐受性,苗期烟草叶片厚度减小和叶绿体超微结构受损是导致光能转化效率和净光合速率降低的主要原因。      

水体中烟草花叶病毒的浓缩与检测方法

为了检验水体中TMV的浓缩和检测方法的效果,在含和不含土壤颗粒的水中加入感染烟草花叶病毒(TobaccoMosaicVirus,TMV)病叶汁液,然后用低速离心法和带正电荷微孔滤膜吸附法浓缩,再用接种心叶烟、普通烟K326和间接酶联法检测浓缩物中TMV存在与否。含土壤颗粒的样品的离心法浓缩物用接种心叶烟检测,同一个稀释度离心浓缩比不处理对照的枯斑数明显要多。说明离心法有一定的浓缩效果。接种K326检测法、离心浓缩法、上清液和不处理(对照)的最低检出稀释度接近,说明离心浓缩方法的回收效果较差。用酶标板间接ELISA检测,离心处理的最低检出稀释度低于离心上清液和不处理对照。推测可能原因是土壤滤出液降低酶标板吸附TMV的效率。含和不含土壤颗粒的样品吸附法浓缩物用接种心叶烟检测,同一个稀释度吸附浓缩比不处理对照的枯斑数明显要多,吸附浓缩的最低检出稀释度比不处理对照高3个稀释度,说明吸附法有一定的浓缩效果。用接种K326检测,吸附浓缩的最低检出稀释度为1:2500倍(土壤滤出液+病叶汁液)和1:5000倍(自来水+病叶汁液)。吸附滤出液检不出TMV。用酶标板间接ELISA检测,吸附处理比吸附滤出液的最低检出稀释度高5~6个梯度、比不处理对照高4个稀释度,同样说明吸附法有较好的浓缩效果和回收效果。吸附法可用于水体病毒浓缩。      

卷烟携带烟草普通花叶病毒(TMV)的测定研究

对国内15个省市34个卷烟厂家64个品牌的卷烟样品生物检测结果表明,TMV检出率为67.69%;不论是混合型还是烤烟型以及不同等级的卷烟样品都可以检出。卷烟烟丝研磨液和不同浓度的TMV汁液一样,接种后足以导致烟苗发病。      

烤烟新品种粤烟1号的选育及特征特性

烤烟新品种粤烟1号（HY1）是以优质、适产、耐低温、抗早花为育种目标,采用优质烤烟品种G28为母本,拗尾烟（K326变异系）为父本,经自交、回交,系谱选育而成。该品种遗传性状稳定,生长势强,株型筒型,叶形长椭圆,上部叶开片较好;综合经济性状显著高于K326,略高于云烟87;原烟外观质量与K326相当,感官质量略低于K326;抗逆性强,耐低温、抗早花,中抗黑胫病和根结线虫病,中感青枯病、赤星病和PVY,感TMV和CMV,抗病性略低于K326,适宜在东南烟区种植。     

施氏假单胞菌F4对黄曲霉毒素B_1的酶解作用及其降解产物的初步分析

施氏假单胞菌F4能高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。研究了F4的AFB1降解活性、降解动力学以及蛋白酶K和SDS对其降解性能的影响。F4细胞悬液与毒素共培养72 h后降解率达80.03%;蛋白酶K处理对降解率没有影响,SDS处理的细胞悬液基本丧失了降解活性。不同时间点的降解液上清液仍能有效降解残留AFB1,其中以60 h的降解液上清液活性较好,与残留AFB1继续作用48 h后降解率达84.30%;而经蛋白酶K处理后降解率仅为45.42%。低浓度AFB1诱导对菌体的降解活性没有影响。上述结果提示,F4通过胞内酶作用降解AFB1。高效液相色谱对产物分析表明,F4可将AFB1酶解为至少2种产物。     

五个烤烟品种叶片栅栏组织和海绵组织化学成分研究

采用酶解方法分离K326、红花大金元、云烟87、云烟202、K346中部适熟叶栅栏组织和海绵组织,然后用气相色谱分析鉴定非挥发性有机酸,用分光光度计法分析质体色素、糖类及烟碱。结果表明多元有机酸、烟碱在海绵组织中含量较高,高级脂肪酸、质体色素、糖在栅栏组织中含量较高。栅栏组织化学成分差异:总非挥发性有机酸含量排序是红大>K326>K346>云87>云202;总叶绿素和总类胡萝卜素都是红大最高;总糖是红大>K346>云87>云202>K326;烟碱是K326>云87>K346>红大>云202。海绵组织化学成分:总非挥发性有机酸是红大>K326>K346>云87>云202;总叶绿素和总类胡萝卜素也是红大最高;总糖是红大>K326>云202>云87>K346;烟碱是K326>K346>云202>云87>红大。     

烤烟新品种贵烟2号的选育及特征特性

烤烟新品种贵烟2号是从K326中获得的优良变异单株,经系统选育而成,2017年通过全国烟草品种审定委员会审定。该品种遗传性状稳定,田间长势较强,易烘烤;中抗黑胫病、TMV,赤星病抗性优于对照K326;主要经济性状、外观质量、感官质量优于对照K326,是一个工业利用价值和农业生产效益兼顾的优良新品种。      

防治烟草花叶病的药剂试验

室内分别以TMV和CMV的枯斑寄主心叶烟和苋色黎为测试寄主，采用全叶法接种，对接种叶片分接种前和接种后半叶法涂几种病毒抑制剂，结果表明，病毒敌无论在接种前后涂施，对TMV和CMV都有较好的抑制效果，接种前在心叶烟和苋色黎上抑制率分别为69.20%和68.06%，接种后抑制率分别为67.20%和42.86%；植病灵和病毒A在接种前涂施对TMV和CMV均有较好抑制效果。达到62%（在46.74%-62.11%之间）；接种后涂施抑制效果较差，小区和大田试验选用4种病毒抑制剂，对烟草蚜传病毒进行大田防治试验，结果表明，20%病毒敌可湿性粉剂500倍液防治效果最好，能有效地抑制病毒的侵染，推迟病毒的发生时期，减慢病情的发展速度，平均防治效果为58.4%，其次为金叶宝防效为51.4%，2种药剂的防治效果差异达到极显著，介于匀极显著地高于其它几种供试药剂。