新疆地区不同酸奶中优势乳酸菌的分离与鉴定

在乳制品工业中乳酸菌被认为是重要的益生菌之一。本文对来自新疆的酸驼奶、酸牛奶、酸马奶、酸羊奶以及俄罗斯酸奶中的优势乳酸菌进行分离,结合16S rRNA序列同源性分析和生理生化试验,鉴定出几种优势乳酸杆菌,即发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖乳杆菌。     

应用全自动核糖体RNA基因指纹技术快速鉴定细菌菌种

应用RiboPrinter全自动核糖体RNA基因指纹技术对4株未知菌种进行快速鉴定,并与生理生化试验结合16SrDNA序列测定方法相比较.结果表明,两种方法均成功地完成了4株未知菌种的鉴定,其结果分别为大肠杆菌、嗜热链球菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌.相比之下,生理生化试验结合16S rDNA序列测定的方法经济实用,而RiboPrinter系统更为简便、快速,在8h内快速地完成了4株未知菌种的鉴定,并且为菌株的基因分型以及溯源分析奠定了基础.     

乳酸菌分离培养基对粪便样品筛选能力的探究

目的探究在不同氧气条件下,不同的常用乳酸菌分离培养基分离婴儿粪便样品中微生物的能力,找出最合适的益生菌分离培养基及相关分离条件。方法以婴儿粪便为原料,在利用乳酸杆菌选择性琼脂培养基(Lactobacillus selective broth, LBS)、MRS以及MRS5.2 3种培养基对同一样品在有氧和厌氧条件下分别进行涂布培养。随后对样本内菌群进行16S rRNA扩增子测序,通过对测序数据的菌落组成、α多样性、β多样性及后续代谢的模拟分析,阐释了不同培养基对粪便样品的筛选特征,包括筛选后菌群的组内多样性、组间多样性、菌群功能预测以及培养基中乳酸菌所占比例等。结果对于婴儿粪便样品,所测5种分离条件均能对肠道中的乳酸杆菌进行有效分离。在厌氧条件下除LBS培养基外,各培养基中均有双歧杆菌出现,所占比率约在20%～30%之间,同时有氧环境下的MRS培养基中也存在少量双歧杆菌,所占比率约为5%。结论对于粪便样品中乳杆菌分离能力最适的条件是37℃下厌氧条件的LBS培养基,对双歧杆菌分离能力最适的条件是37℃下厌氧环境下的MRS培养基。     

水牛乳中可培养乳酸菌多样性分析

采用传统分离培养方法,从三品杂交生水牛奶混合样品中,分离出105株乳酸菌,通过形态、生理生化、API细菌鉴定系统及16S rDNA基因序列分析方法对各菌株属种进行鉴定。16S rRNA序列分析结果显示,105株菌共分为5个属8个种,呈现较为丰富的乳酸菌多样性,具体数量分布为乳酸乳球菌21株,植物乳杆菌19株,格氏乳球菌17株,乳明串珠菌13株,食窦魏斯氏菌11株,肠膜明串珠菌8株,类肠膜魏斯氏菌6株,嗜热链球菌5株,糊精乳杆菌5株。由此可知,水牛乳中可培养乳酸菌优势菌群的主次关系为：乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）＞植物乳杆菌（Lactobacillus plantaru）＞格氏乳球菌（Lactococcus garvieae）＞乳明串珠菌（Leuconostoc lactis）＞食窦魏斯氏菌（Weissella cibaria）,此为后续开发水牛乳中优势乳酸菌资源提供了良好的理论基础。     

高黏附力双歧杆菌的筛选与鉴定

利用体外细胞培养法,从实验室现有的10株双歧杆菌中筛选具有较强粘附能力的菌株。采用革兰氏染色法和平板计数法,评价了这10株双歧杆菌对HT-29细胞的粘附性能,通过测定这10株双歧杆菌的16S rRNA基因序列(16S rDNA)进行分类学鉴定。结果显示,WBBI01,WBBI02,WBIN03,WBBI06具有极强的黏附力,其黏附指数分别达1.97×103,2.17×103,3.57×103,1.88×103。经16S rDNA测序鉴定WBBI01,WBIN03,WBBI06均与两歧双歧杆菌S17有极高的同源性,而WBBI02属于长双歧杆菌。结果表明,双歧杆菌黏附性能具有明显的种属特异性,不同种属双歧杆菌的粘附能力相差极大,以两歧双歧杆菌的黏附性能最强,婴儿长双歧杆菌为最弱。     

葡萄酒乳酸菌种内遗传多样性鉴定

为了研究葡萄酒乳酸菌从自然启动苹乳发酵的葡萄酒中分离乳酸菌,并对其进行生化鉴定和16S rRNA序列测定,结果显示分离菌种有酒类酒球菌、马里乳杆菌、植物乳杆菌和短乳杆菌4种乳酸菌。同时利用单酶切扩增片段长度多态性(SE-AFLP)对其进行种内基因多样性鉴定,并绘制种内进化树,结果表明SE-AFLP在乳酸菌分类研究中能够达到菌株水平的区分。     

混合制剂中快速计数双歧杆菌鉴别培养基的研究

研制了一种混合制剂中快速计数双歧杆菌鉴别培养基。用添加X-Gal的改良MRS培养基和厌氧胶法对4种标准双歧杆菌(长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌)和2种标准乳酸菌(保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌)分别单独培养、混合培养,结果在X-Gal培养基上,双歧杆菌单独培养及与乳酸菌混合培养双歧杆菌均为白色菌落或浅蓝色菌落,而乳酸菌为蓝色菌落。结果表明,在X-Gal培养基上双歧杆菌和乳酸菌有明显的鉴别性,可用于双歧杆菌和乳酸菌混合制剂的菌落鉴别计数。     

利用Real-time PCR技术分离鉴定酸乳中的乳双歧杆菌(Bifidobacterium Animalis Subsp.Lactis)

目的:利用Real-time PCR建立酸乳中乳双歧杆菌的快速精准鉴定方法。方法:选取乳双歧杆菌atpD基因,利用Primer Express 3.0.1设计引物探针,进而验证引物探针的特异性、灵敏度和抗干扰能力,最后应用到17种酸乳样品的检测。结果:所设计的引物探针可以有效地扩增出乳双歧杆菌,而对于20种乳酸菌和18种常见的致病菌都不能扩增,具有良好的特异性;其灵敏度在DNA水平可以达到1 pg/μL,在菌浓度水平可以达到10³ cfu/mL;并且不受酸乳中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的干扰,具有很好的抗干扰能力。利用RT-PCR技术能很好地鉴定17种酸乳中乳双歧杆菌。结论:该研究建立了酸乳中快速精准鉴定乳双歧杆菌的方法,对食品中双歧杆菌鉴定起到积极推动作用。     

新疆酸奶中高产蛋白酶与产脂肪酶乳酸菌的筛选

从新疆传统酸奶中,利用透明圈法筛选出一株高产蛋白酶的乳酸菌RA3,其蛋白酶活力为38.87 U/mL;利用铜皂法筛选出产脂肪酶的乳酸菌菌株RC4,其酶活力为8.54 U/mL。经API 50CHL生理生化实验和16S rRNA序列比对鉴定RA3为发酵乳杆菌,RC4为植物乳杆菌,为我国发酵食品提供了新的乳酸菌资源。     

发酵乳中乳酸菌的选择性计数及分离鉴定

发酵乳产品的菌种组成与活菌数的含量是产品质量的关键。该文通过选择性培养基、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)快速鉴定技术及多相鉴定技术探究3种发酵乳中乳酸菌的活菌数及种类。研究结果表明,3种发酵乳产品中,GB 4789.35对乳酸菌总数的计数结果均高于选择性培养基,M17培养基对嗜热链球菌的计数结果均高MC培养基。MALDI-TOF MS快速鉴定表明M17、MRS(含50μg/mL的万古霉素)、双歧杆菌培养基可以选择性的分离发酵乳中的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus casei)和双歧杆菌(Bifidobacterium spp.),酸化MRS培养基对德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)的选择性较差,不能在含有双歧杆菌的发酵乳中选择性分离德氏乳杆菌。进一步通过多相鉴定确定3种发酵乳产品中乳酸菌在...     

新疆伊犁牧区传统手工奶酪中微生物多样性及其功能分析

为探究新疆伊犁牧区传统手工奶酪中的可培养乳酸菌和细菌多样性,首先采用Illumina MiSeq高通量测序技术对细菌16S rRNA基因的V1～V3可变区进行测序分析,结果显示：14 份奶酪中共存在493 种细菌属和780 种细菌种,其中奶酪中的优势细菌属和优势乳酸菌属为雷尔氏菌属和乳杆菌属,优势乳酸菌种为瑞士乳杆菌,且奶酪中还存在致病菌。在此基础上,利用传统培养法从MRS培养基中筛选出68 株可培养疑似乳酸菌,经生理生化实验及16S rDNA序列同源性分析技术对其进行属种鉴定。结果表明：68 株疑似乳酸菌分别为短乳杆菌、融合魏斯氏菌、屎肠球菌、粪肠球菌、耐久肠球菌、鸟肠球菌、棉籽糖肠球菌、植物乳杆菌、瑞士乳杆菌,其中融合魏斯氏菌为奶酪中的优势乳酸菌种。在乳酸菌的属种鉴定上,传统培养法能够更准确地将乳酸菌鉴定到种水平。奶酪微生物基因COG功能预测结果显示：奶酪中的微生物富含与氨基酸转运和代谢有关的基因。将各个样品的微生物群落组成与功能组成进行比较,发现各个样品的细菌群落组成虽存在明显差异,但其功能组成却具有高度相似性。     

Rapid differentiation of lactic acid bacteria from autochthonous fermentation of Iberian dry-fermented sausages

The populations of lactic acid bacteria (LAB) in different types of Iberian dry-fermented sausages from central-west Spain were identified. A simple and rapid electrophoretic method of whole-cell protein profiles was evaluated, correlating it with 16S rRNA gene sequence analysis and biochemical identification by API 50 CHL. A total of 96 isolates were identified by SDS-PAGE showing stable profiles corresponding to 30-45 polypeptides in the range 95-8kDa that were clearly different for the different species and were grouped with those of the 9 reference strains used in this study. The SDS-PAGE method showed that the predominant species were Pediococcus acidilactici (48%) followed by Lactobacillus plantarum (23%) and Lactobacillus brevis (18%). The identifications obtained by this approach were confirmed by sequencing the V2-V3 region of the 16S rRNA gene and by a BLAST search of the GenBank database. However, biochemical identifications by API 50 CHL showed different errors at the genus and species level. In sum, the SDS-PAGE analysis showed itself to be a rapid and accurate differentiation method for the most commonly encountered LAB isolates in dry-fermented sausages.     

自然发酵酸笋中乳酸菌的筛选鉴定及益生特性研究

为筛选自然发酵酸笋中的益生乳酸菌,采用MRS培养基分离,经生理生化实验及16S rDNA序列分析鉴定,通过溶血实验评价安全性以及耐酸耐胆盐实验评价耐受性,并测定乳酸菌体外抗氧化性。结果表明,共分离到69株乳酸菌,隶属于2个科3个属,分别为乳杆菌属（Lactobacillus）、片球菌属（Pediococcus）、链球菌属（Streptococcus）,均为γ-溶血的安全菌株,且均对0.3%胆盐具有良好耐受性,其中41株乳酸菌耐pH 2.0酸性条件,从中优选出的17株乳酸菌对人工胃肠液均有良好耐受性。4株短乳杆菌（Z1-02、ZR2-14、ZR2-12、ZR2-22）和2株消化乳杆菌（ZR1-02、ZR1-05）的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率、2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除率、还原能力均分别＞62%、79%、0.393,其中乳杆菌Z1-02的综合抗氧化能力最强,这6株乳酸菌具备优良的益生性能和体外抗氧化活性。     

江西酸芋荷中乳酸菌的分离鉴定及在泡菜发酵中的应用

以江西省赣州客家常见传统发酵食品酸芋荷为样品,采用MRS-碳酸钙培养基筛选出具有明显溶钙圈、产酸量较大的15株细菌。通过生理生化特征分析及16S rRNA基因序列比对、构建系统发育树,鉴定为8株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,5株短乳杆菌（Lactobacillus brevis）,2株干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）。对15株乳酸菌进行耐酸、耐胆盐、耐盐能力测定,筛选得到性能优良的乳酸菌菌株A03c4、A03d1。人工接种乳酸菌A03c4、A03d1发酵泡菜,缩短了发酵时间,改善了传统发酵泡菜的品质。本研究为乳酸菌泡菜发酵剂开发的菌种选育提供了依据。     

塔城地区酸马奶中耐乙醇乳酸菌的筛选与鉴定

以新疆塔城地区酸马奶为研究对象,采用传统方法初步筛选出乳酸菌共53株,通过生理生化试验,确定有乳酸杆菌24株,乳酸球菌29株,以不同体积分数乙醇溶液进行胁迫12 h。结果表明,乙醇对菌株的生长有抑制作用,筛选出对乙醇耐受性较强的菌株,其中菌株S7-1、S7-2、SMN3-3、SMN10-1、SNT16可耐受体积分数13%的乙醇胁迫。通过总DNA序列分析,确定菌株SMN3-3为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）,菌株SMN10-1为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）,菌株S7-1与S7-2为面包乳杆菌（Lactobacillus crustorum）,菌株SNT16为乳酸片球菌（Lactobacillus fermentum）。     

新疆乳品中乳酸菌的多样性及耐药性分析

从新疆北部地区采集的样品中分离出103株乳酸菌并进行生理生化表型鉴定,对这些乳酸菌进行16S rRNA基因序列测序,构建系统发育树发现分离的乳酸菌主要为5个属分别为乳杆菌属、肠球菌属、乳球菌属、魏斯式菌属、明串珠菌属。采用纸片扩散法（K-B）研究不同属中不同乳酸菌对8种常见抗生素的耐药性分析。耐药性研究表明,分别有6株对链霉素、新霉素有耐药性,5株对红霉素有耐药性,7株对卡那霉素有耐药性,8株全部对萘啶酸具有耐药性,4株对万古霉素、四环素具有耐药性,2株对头孢唑肟存在耐药性。     

水牛乳中高产胞外多糖乳酸菌的筛选与鉴定

从生水牛乳中筛选出两株高产胞外多糖（EPS）的乳酸菌株LB2、LB7,经MRS肉汤培养基发酵后,菌液中的胞外多糖（EPS）产量分别达135 mg/L、148 mg/L,通过形态学、生理生化特征、API细菌鉴定系统、16S rRNA序列分析,鉴定出菌株LB2为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,LB7为类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）。将其应用到水牛乳酸奶的发酵中,结果表明,植物乳杆菌LB2和类肠膜魏斯氏菌LB7均可用来发酵水牛乳酸奶,且能有效增加酸奶的黏度和胞外多糖产量,其黏度和EPS产量分别为4 050 mPa·s和149 mg/L。     

扬州稀甜酱中乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性初探

以扬州稀甜酱为研究对象,采用经典乳酸菌筛选法从样品中分离、纯化乳酸菌,采用形态学观察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对乳酸菌进行鉴定,并采用牛津杯法对发酵滤液的抑菌活性进行研究。结果表明,从扬州稀甜酱中共分离、纯化出33株乳酸菌,其中15株菌株被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,12株菌株被鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）,4株菌株被鉴定为类肠膜魏斯氏菌（Weissella paramesenteroides）,2株菌株被鉴定为酸鱼乳杆菌（Lactobacillus acidipiscis）,屎肠球菌和乳酸片球菌为扬州稀甜酱中的优势乳酸菌。乳酸片球菌TJ17和TJ31发酵滤液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）均有明显的抑制作用,且乳酸片球菌TJ31抑菌效果较好。