体外消化对壳寡糖糖基化修饰玉米谷蛋白生物活性的影响

以壳寡糖糖基化修饰玉米谷蛋白为原料,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶对其进行一步消化和二步消化,研究体外消化对糖基化修饰玉米谷蛋白的抗氧化活性和体外促酒精代谢等生物活性的影响。试验结果表明:糖基化修饰和体外消化均可以明显改善玉米谷蛋白的抗氧化活性(包括DPPH自由基清除活性和还原力)和体外促酒精代谢活性。经胃蛋白酶-胰蛋白酶二步消化后,糖基化修饰使玉米谷蛋白的体外消化率提高18.08%,提高了玉米谷蛋白的营养品质。     

糖基化与胰蛋白酶酶解对大豆蛋白构象和功能性质的影响

利用转谷氨酰胺酶催化壳寡糖与大豆蛋白分子发生交联反应制备糖基化大豆蛋白,随后用胰蛋白酶酶解制备水解度分别为1%、5%、10%和15%的大豆蛋白酶解产物,分析糖基化及酶解对大豆蛋白的三级结构和功能性质的影响。结果表明:糖基化大豆蛋白及其酶解产物具有更加疏松的三级结构;pH 4.0、7.0的酶解产物(DH15%)经过热处理(85℃)后,其热稳定性分别为50.74%和67.66%,热稳定性较好;糖基化提高了大豆蛋白的泡沫稳定性,水解度为10%的酶解产物具有最高的起泡性;糖基化也能够提高大豆蛋白的乳化稳定性,水解度为5%的酶解产物具有较好的乳化稳定性;大豆蛋白修饰产物的体外消化性不同,糖基化大豆蛋白对胃蛋白酶的敏感性差,而其酶解产物对胰蛋白酶的敏感性差。     

大米蛋白体外消化产物抗氧化活性的研究

为了研究大米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白体外消化产物的抗氧化活性,用Osborne法从大米粉中提取大米四种蛋白。采用胃-胰蛋白酶分步酶解,选择DPPH·,ABTS+·,·OH自由基清除能力和Fe2+金属离子螯合能力四个指标对消化产物的抗氧化活性进行综合评价。与市售的大豆肽比较,大米四种蛋白经模拟体外消化后具有良好的抗氧化活性。其中醇溶蛋白的消化产物抗氧化活性最好,DPPH·,ABTS+·,·OH自由基清除能力和Fe2+金属离子螯合能力的半抑制浓度分别为30.88 mg/m L、27.61 mg/m L、5.43mg/m L、0.18 mg/m L。大米四种蛋白酶解产物的Fe2+螯合能力半抑制浓度均小于1 mg/m L,具有良好的Fe2+螯合能力。研究结果表明大米四种蛋白的体外消化酶解物具有不同大小的抗氧化活性,分子量集中在181~1000 Da范围内,是一种易于被人体吸收的抗氧化肽。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

体外消化对三文鱼皮胶原低聚肽抗氧化活性的影响

本研究以三文鱼皮为原料通过酶解法制备三文鱼皮胶原低聚肽,并进行体外模拟消化实验,通过分子量分布分析、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、总抗氧化能力（ABTS法）以及活性氧ROS实验,探究三文鱼皮胶原低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。结果表明:经模拟消化实验后,三文鱼皮胶原低聚肽的重均分子量轻微减少,变化不超过4%;胃蛋白酶消化前后,DPPH自由基清除能力IC₅₀值分别为11.1、12.3 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为12.5、14.6 mg/mL;胃蛋白酶消化前后,羟自由基清除能力IC₅₀值分别为12.2、13.2 mg/mL,胰蛋白酶消化前后,IC₅₀值分别为10.7、11.5 mg/mL;胃蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过13%,胰蛋白酶消化后,总抗氧化能力下降不超过19%;胃蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过3%,胰蛋白酶消化后,ROS清除能力提高不超过5%。这表明三文鱼皮胶原低聚肽具有良好的消化稳定性和抗氧化活性,为其在抗氧化功能性食品的开发提供了理论基础。     

休闲鱼肉粒的体外消化模拟及其产物抗氧化效果评价

以休闲白鲢鱼肉粒为研究对象,采用胃蛋白酶—胰酶体外模拟酶解法研究其体外模拟消化特性,并对其消化产物的抗氧化特性进行初步评价。结果显示:经体外模拟胃肠消化后,鲢鱼鱼肉粒的蛋白消化率可达78.2%。消化产物具有较强抗氧化性,对羟自由基清除率、DPPH自由基除率、过氧化氢清除率、亚铁离子还原力等各抗氧化指标的半数效应浓度IC50分别为1.66,2.14,3.88,3.33 mg/m L;且在37℃保温1 h,各抗氧化指标均未发生显著变化,具有良好的抗氧化稳定性。     

罗非鱼鱼肉及组分蛋白酶解产物的抗氧化特性

采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究比较不同蛋白酶在1、2、4、6、8h对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:3种酶的酶解产物都具有一定的抗氧化活性,中性蛋白酶酶解产物的水解度和蛋白回收率最高,胃蛋白酶酶解产物对DPPH自由基和羟自由基的清除效果最好;综合各项指标选择中性蛋白酶对罗非鱼肉的组分蛋白(肌原纤维蛋白、肌浆蛋白、基质蛋白)进行4h酶解,研究比较不同组分蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:组分蛋白中基质蛋白酶解产物的蛋白回收率最高,为89.8%,肌原纤维蛋白酶解产物的水解度最高,为10.1%,肌浆蛋白酶解产物的抗氧化活性最好,羟自由基和DPPH自由基的IC50值分别为12.352mg/m L和3.554mg/m L。     

南极磷虾蛋白水解产物超滤组分的抗氧化活性评价

目的 对南极磷虾(Euphausia superba)蛋白水解产物超滤组分进行系统的抗氧化活性评价。方法 利用胃蛋白酶和胰蛋白酶制备南极磷虾蛋白水解物(antioxidant hydrolysate of Euphausia superba protein, EPAH), 利用超滤技术制备抗氧化组分。以自由基清除实验、脂质过氧化抑制实验、体外DNA氧化损伤保护实验以及氧化损伤张氏肝细胞(Chang liver)模型进行抗氧化组分的活性研究。结果 利用超滤技术将EPAH按照分子量(molecular weight, MW)分为三个肽组分EPAH-I(MW<3.5 KDa)、EPAH-II(3.5 KDa5 KDa)。其中, EPAH-I显示出强的DPPH自由基和羟基自由基清除活性、脂质过氧化抑制作用和质粒DNA的氧化损伤保护作用以及对H2O2氧化损伤的张氏肝细胞显示出较强的保护作用。在5.0 mg/mL浓度下, EPAH-I可将氧化损伤张氏肝细胞(Chang liver)的活力由模型组的(49.51±4.18 )%显著提升至(70.58±4.52)% (P<0.05); 超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力分别提高至(176.34±10.92) U/mg prot和(35.83±2.55) U/mg prot, 活性氧自由基含量降至2.76±0.18%, 膜脂质氧化产物丙二醛的含量降至(5.75±0.16) nmol/mg prot。结论 本实验制备的南极磷虾抗氧化组分(EPAH-I)具有显著的生物活性, 可用于抗氧化相关功能产品的研发。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

螺旋藻水解肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以螺旋藻为原料,在反复冻融、均质和超声联用的基础上,比较了盐提和水提两种不同方式的蛋白提取率,并以水提螺旋藻蛋白为原料,利用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分别进行单酶解、双酶解以及体外模拟胃肠道消化的三酶解,得到6种酶解肽。水解度及脱色前后的抗肿瘤活性鉴定结果表明,水解度与抗肿瘤活性无直接相关性,而脱色会降低酶解组分的抗肿瘤活性。对5种活性显著的酶解肽进行超滤,得到9个对乳腺癌和肝癌细胞株的体外生长均有显著抑制作用的组分,并对其中的碱性蛋白酶0~3 K组分进行Sephadex G-15分离纯化,得到对MCF-7和Hep G-2均有较强抑制作用的组分A3,其IC50值分别为64.59μg/m L和61.65μg/m L;得到对Hep G-2具有较强选择性抑制作用的组分A1,A4和A5,其IC50值分别为47.67μg/m L、79.44μg/m L和69.54μg/m L。本研究成果对以螺旋藻为原料的药品和保健食品的开发提供了理论基础。     

青刺果抗菌肽组分的分离及其稳定性分析

旨在高值化利用青刺果榨油后副产物青刺果粕中的蛋白质，以青刺果粕为原料，提取青刺果蛋白并制备蛋白酶解物，采用活菌吸附法联合反相高效液相色谱（RP-HPLC）从蛋白酶解物中筛选出抗菌肽组分，评价其抑菌活性，并对抑菌活性最好的组分进行稳定性分析。结果表明：筛选出的3个抗菌肽组分（F1、F2和F3）中，F2组分抑菌活性最好，当其质量浓度为10 mg/mL时对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性分别达到45.5%和39.1%；抗菌肽组分F2抑菌活性随温度升高和盐溶液浓度增加均降低，最适pH为6.0，在酸性环境中极不稳定，对酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性均较差，对中性蛋白酶耐受性较好。综上，青刺果粕中的蛋白酶解物具有抑菌活性，具有开发青刺果抗菌肽的潜力。     

黄鲫(Setipinna taty)蛋白酶解液的抑菌活性及稳定性研究

以黄鲫为原料测定其氨基酸组成,比较风味蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解黄鲫蛋白所得酶解液对大肠杆菌的抑菌作用,并对抑菌效果最强的蛋白酶酶解液进行抑菌稳定性研究。结果表明：黄鲫蛋白必需氨基酸含量丰富,其中胃蛋白酶的水解液对大肠杆菌抑菌作用强,相对分子质量主要分布在3000～1000;黄鲫胃蛋白酶酶解液对热稳定,酸性低pH值可增强其抑菌效果,可耐受胰蛋白酶和β-内酰胺酶处理,该酶解液有作为天然抗菌剂应用的前景。     

黄鲫胃蛋白酶酶解液体外抗氧化、抑菌作用研究

采用胃蛋白酶水解黄鲫,测定酶解液的蛋白提取率、可溶性肽含量、水解度及氨基酸组成,并对酶解液体外抗氧化和抑菌作用进行研究。结果表明：黄鲫胃蛋白酶酶解液的蛋白提取率、可溶性肽提取率、水解度分别为 (110.28 ± 4.81)%、(81.78 ± 0.04)% 和 (18.12 ± 0.39)%,黄鲫胃蛋白酶酶解液的人体必需氨基酸相对含量可达37.91%。黄鲫胃蛋白酶酶解液具有很强的抗氧化能力,清除羟自由基和DPPH 自由基的ED50 分别为4.55μg/mL 和4.46μg/mL,还原力随着黄鲫胃蛋白酶酶解液质量浓度的增加而增大,在3.4 μg/mL 和13.6μg/mL 低、中质量浓度时螯合金属离子能力与EDTA 接近。体外抑菌实验显示：黄鲫胃蛋白酶酶解液具有广谱抑菌性,对大肠杆菌的抑菌效力分别与 13.21～15.44mcg/mL 的氨苄青霉素和 325.00～340.00U/mL 的硫酸链霉素相当 (P ＞ 0.05)。     

波纹巴非蛤蛋白酶解产物的抗氧活性及分子量分布研究

以波纹巴非蛤为原料,分离得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,分别研究其氨基酸组成及其胰蛋白酶酶解产物的体外抗氧化活性及分子量分布。结果表明该三种蛋白质中必需氨基酸、碱性氨基酸、疏水性氨基酸和支链氨基酸含量较高。抗氧化实验结果显示,三种蛋白对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与酶解液浓度存在一定的量效关系。与其它两种蛋白酶解产物相比,肌浆蛋白酶解液中小分子肽含量最高,分子量小于1500 u占42.55±0.27%,其对自由基清除效果也明显高于其它两种蛋白酶解液,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由清除活性的IC50值分别为4.82、4.70和3.75 mg/mL。肌浆蛋白和肌原纤维蛋白酶解产物的还原能力相当,浓度为10 mg/mL时,其OD700分别为0.58和0.57,基质蛋白酶解产物的还原能力较弱。     

Preparation and antioxidant activity of enzymatic hydrolysates from purple sea urchin (Strongylocentrotus nudus) gonad

Purple sea urchin (Strongylocentrotus nudus) gonad was treated separately with neutral protease, papain, pepsin and trypsin. The resultant hydrolysates were fractionated using a series of ultrafiltration membranes (molecular weight cut-offs of 10, 5, 3 and 1 kDa). Five fractions were prepared from each hydrolysate and the corresponding molecular weight ranges were below 10 kDa, 5-10 kDa, 3-5 kDa, 1-3 kDa and below 1 kDa. The peptide fractions were evaluated for antioxidant activity by using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) assay and reducing power assay. Results indicated that all peptide fractions possessed DPPH radical scavenging capacity and reducing power in a dose-dependent manner. For all four hydrolysates, the below 1 kDa fractions exhibited the highest DPPH radical scavenging capacity. The below 1 kDa fractions prepared with neutral protease, papain and pepsin, and the 1-3 kDa fraction prepared with trypsin showed the highest reducing capacity among corresponding hydrolysates.     

河套小麦胚芽源多肽的抗氧化活性研究

利用中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶解河套小麦胚芽蛋白获得多肽,测定其体外抗氧化能力,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其多肽分布。结果表明,胚芽蛋白及多肽浓度与抗氧化能力呈正相关。不同浓度的中性蛋白酶酶解获得的多肽的抗氧化能力显著高于胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解获得的多肽（P<0.05）,其还原能力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS+）和1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除率最高达（1.17±0.004）1.0 mg/mL、（84.82%±0.87%）1.5 mg/mL和（55.01%±0.01%）1.0 mg/mL,且其ABTS+和DPPH自由基清除率均显著高于胚芽蛋白（P<0.05）。另外,不同蛋白酶水解能力不同,其中胃蛋白酶的水解能力最大,中性蛋白酶水解能力最小;胚芽蛋白多肽的抗氧化能力与其分子量大小相关,但不一定蛋白多肽的分子量越小,其抗氧化效果越好。上述结果为进一步研究河套小麦胚芽抗氧化肽提供了一定的参考依据。     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分(肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白)进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析.结果表明:罗非鱼肌浆蛋白酶解物(tilapia sarcoplasmi...     

人工抗氧化肽的设计、表达纯化及功能表征

为获得具有抗氧化功能的寡肽,人工设计了3条由不同寡肽串联组成的含胰蛋白酶切割位点的多肽序列,分别命名为ATO、ATW和WIT,并在E. coli BL21（DE3）宿主中实现可溶性表达。纯化的多肽经过胰蛋白酶处理得到3种多肽水解物,体外抗氧化性功能评价实验表明,3种多肽水解物均对不同自由基具有清除作用,其中ATW多肽水解物抗氧化性最强,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.53、0.45、0.34 mg/mL。本研究为制备抗氧化肽提供一种新思路。