利用16s rDNA测序对一株高产己酸菌株的鉴定

从优质老窖泥中分离得到的一株高产己酸的梭状芽孢杆菌。经16s rDNA序列测定鉴定为酪酸梭菌（Clostridium butyricum）。     

浓缩乳清蛋白粉及其制品中梭状芽胞杆菌的分离及鉴定

目的采用多种方法对新西兰进口浓缩乳清蛋白粉及其制品、市售婴幼儿配方粉样品中分离的梭状芽胞杆菌进行鉴定。方法根据分离菌株的生长特性、革兰氏染色、生化反应、普通显微镜和电子显微镜下形态特征等表型特征,结合16S rRNA基因克隆测序及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等结果,对分离菌株进行综合鉴定。结果 78份样品中有16份(20.5%)被梭状芽胞杆菌污染,其中2份为浓缩乳清蛋白粉及其制品,14份为婴幼儿配方粉样品。共分离到梭状芽胞杆菌17株,包括生胞梭菌12株、拜氏梭菌2株,丁酸梭菌2株和第三梭菌1株。结论新西兰进口浓缩乳清蛋白粉及其制品中厌氧微生物污染严重,经鉴定污染的主要微生物为生胞梭菌。     

藏羊源纤维素降解菌-沙福芽孢杆菌的分离鉴定及其生物学特性

为获得藏羊源纤维素降解益生菌,该试验采用纤维素刚果红培养基从藏羊瘤胃液中分离筛选出可降解纤维素的细菌,结合形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析对其进行种属鉴定,通过生长曲线的测定、抑菌试验和药敏试验研究该分离菌株的部分生物学特性。结果表明：筛选出一株纤维素刚果红培养基上呈粉红色、革兰氏染色呈阳性的菌株,命名为BS1-ql。分离菌株BS1-ql产芽孢,氧化酶试验、触酶试验呈阳性等生理生化特征符合芽孢杆菌属的特点,其16S rDNA序列与多株芽孢杆菌属菌株相似度达到96%以上,与沙福芽孢杆菌同源性达100%且处于同一最小分枝,明确该分离菌株是沙福芽孢杆菌。沙福芽孢杆菌BS1-ql生长迅速、接种2 h后进入对数生长期;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌的抑菌圈均达8.96 nm以上,均有一定的抑制能力;对大多数常用抗生素呈现不同程度的敏感,对头孢他啶抗生素表现为耐药。结论：成功分离鉴定出一株藏羊源沙福芽孢杆菌,该分离菌株生物学特性良好,为藏羊源益生菌提供了候选菌株。     

醋醅中分离菌株W321种属鉴定的研究

试验以从醋醅中分离纯化到的菌株W321为研究对象,为进一步开发利用这一菌株,根据菌株W321的形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列,对其进行种属鉴定的研究.经形态与生理生化鉴定菌株W321属于芽孢杆菌属,16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性达到了99％,表明与枯草芽孢杆菌极为相似,因而将菌株W.鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

胶原蛋白酶产生菌的筛选及初步鉴定

从养殖场附近淤泥中采样,分离得到20株胶原蛋白水解活性的菌株.经活性平板初筛、摇床复筛及酶活测定,筛选得到1株胶原蛋白酶活性为28.70U/mL的菌株.通过对该菌株16S rDNA的blast检索及序列分析表明,该菌株与蜡状芽孢杆菌属有99％以上的同源性,结合生理生化实验结果,经形态观察、生化试验,初步鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌.     

市售婴幼儿配方奶粉和婴幼儿米粉中梭状芽胞杆菌的分离和综合鉴定分析

目的 对57件市售婴幼儿配方奶粉、50件婴幼儿米粉进行梭状芽胞菌分离鉴定分析及毒素基因检测,获得梭状芽胞杆菌的污染水平数据,并评估各鉴定方法。方法 通过分离菌株的生长特性、革兰染色、普通显微镜下形态特征等表型特征,应用微生物飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）、16S rRNA基因测序技术、全基因组测序技术对分离菌株进行综合鉴定,通过PCR对分离的梭状芽胞杆菌进行肉毒毒素基因检测,对肉毒毒素基因PCR阳性片段进行测序和比对分析。结果 57份市售婴儿配方奶粉中有26份样品中检出38株梭状芽胞杆菌,其中9份样品中同时检出超过两种细菌。50份市售婴幼儿米粉中有5份样品检出5株梭状芽胞杆菌。奶粉中分离的一株楔形梭菌E型肉毒梭菌毒素基因PCR扩增阳性,扩增片段测序比对结果显示这段序列并不是E型肉毒梭菌毒素基因,全基因组测序结果也证实。43株梭状芽胞杆菌均未检出肉毒梭菌的毒素基因。结论 梭状芽胞杆菌鉴定需要多种方法的综合分析。市售婴幼儿配方奶粉、婴幼儿米粉中存在梭状芽胞杆菌的污染,应加强婴幼儿配方食品中重要梭状芽胞杆菌的监测,为风险评估提供数据支持。     

灌肠类熟肉产品生产环节微生物污染风险评估

根据国家食品安全标准检测灌肠类熟肉制品生产过程各环节环境、原辅料及产品的菌落总数、大肠菌群、亚硫酸盐还原梭状芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌,同时测定致病菌的耐药性。结果显示:原辅料和中间产品受大肠菌群和厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的污染较重;生产用水和终产品的卫生状况良好。环境和原辅料中均有致病菌检出,主要为金葡菌和沙门氏菌。分离出的沙门氏菌和金葡菌耐药严重,分别有88.89%的沙门氏菌和85.71%的金葡菌具有多重耐药性。说明灌肠类熟肉制品生产过程极易受到大肠菌群、厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌、金葡菌和沙门氏菌的污染,生产原辅料是主要的微生物污染来源。     

一株产胞外多糖植物内生菌EJS-3菌株的分离和鉴定

从中药植物-百部的组织中分离到一株高产胞外多糖的植物内生菌EJS-3菌株,该菌株在产糖培养基中可以得到23.6g/L的胞外多糖,转化率为47.2%(gEPS/g蔗糖)。通过16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。通过PCR扩增,得到1450bp的16SrRNA序列。PCR产物序列通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比较。通过Bioedit7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示,EJS-3的16SrRNA序列和数据库中的类多粘芽孢杆菌KCTC1663菌株的序列的同源性为99.31%。在细菌系统发育分类学上,EJS-3菌株归属多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。     

一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从菜园土壤中分离筛选到1 株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱。通过形态特征、16SrDNA 序列分析和系统发育分析,菌株K6 与B. amyloliquefaciens 位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌。     

羽绒羽毛中亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检测方法研究

针对GB/T10288—2003《羽绒羽毛检验方法》和FZ/T80001—2002《水洗羽毛羽绒试验方法》中亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检验操作方法,结合实际检验工作,研究了亚硫酸盐添加量、多粘菌素B添加量、培养温度和培养时间与检出菌落数的关系。结果发现,每100mL培养基中添加1mL10%亚硫酸钠溶液,1mL～2mL多粘菌素B,并且培养温度为36℃～40℃时最利于亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的生长繁殖。     

一株源于果园Alicyclobacillus的分离、鉴定及其生物学特性

目的:为了解脂环酸芽孢杆菌在果园土壤中的分布情况,对陕西果园土壤进行研究。方法:以酸化的YSG培养基分离培养脂环酸芽孢杆菌,观察菌株形态,测定生理生化特性,应用API 50CHB及API ZYM系统测定糖酵解和酶反应,以气相色谱(GC)分析脂肪酸组成,并以16S rDNA序列分析法构建系统发育树。结果:分离菌株与标准菌株的形态基本一致,酶谱有很大的相似性但糖酵解反应差异较大;16S rDNA序列分析显示,分离菌株与标准菌株属于同一属的不同种,分离菌与Alicyclobacillus contaminans的同源性达到99%。结论:采用国际通用的脂环酸芽孢杆菌的分离方法,结合API系统、脂肪酸组成分析及16S rDNA序列分析,可以快速的将分离菌鉴定到种;脂环酸芽孢杆菌在果园土壤中确有分布,可能对果汁质量造成威胁。     

酒醅中芽孢杆属细菌的16S rDNA全序列系统学分析

从浓香型白酒窖池酒醅中分离到69株芽孢杆菌,通过形态特征和生理特性检测等传统鉴定方法,将其归为5个类群。用聚合酶链反应（PCR）扩增出5个类群代表菌株的16SrDNA基因全序列,并对其进行测序。用blast软件在Genbank中进行所得序列的同源性检索,并构建系统发育树。从系统发育树可以看出,样品中芽孢杆菌以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）为主,枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）也占有相当的比例,还有一定数量的蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereuso表明窖池酒醅中芽孢杆菌呈现多样性,且优势种群不明显。     

羽毛羽绒微生物污染状况分析

针对我国羽毛羽绒国家标准及欧盟羽绒检测标准中有关微生物指标的限量要求,结合实际检验过程,通过对来自生产企业送检及市场销售的羽毛羽绒及羽绒制品200批进行微生物含量检测,结果发现羽毛羽绒微生物污染比较严重,不合格率为24.5%,其中嗜温性需氧菌的不合格率为8.0%,粪链球菌的不合格率为6.0%,亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的不合格率为22.5%,沙门氏菌未检出;亚硫酸还原梭状芽孢杆菌为羽毛羽绒主要污染菌,其在样品中主要以芽孢形式存在。     

胀袋烤鸡中腐败菌的分离与鉴定

通过胀袋烤鸡中的腐败菌相研究,分离出5株腐败菌,分别编号为A、B、C、D、E。利用生理生化结合16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定。综合生理生化检验结果和系统进化树分析结果,确定5个菌株分别为:A是生孢梭状杆菌(Clostridium sporgenes),B、E是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),C、D是短小芽孢杆菌(B.pumilu)。这将为烤鸡中腐败菌溯源分析及加工与保鲜过程中工艺控制提供借鉴。     

沙漠生物结皮高产胞外多糖菌株的筛选与鉴定

采用传统的分离纯化方法从沙漠生物结皮中分离到27株产胞外多糖菌株,并通过苯酚-硫酸法从中复筛,筛选到一株产多糖量为7445.80mg/L的菌株XJ-27。根据菌株的形态学特征、生理生化鉴定方法初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis);通过16S rDNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定,PCR扩增得到1452bp的序列,PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过MEGA4.0软件绘制系统发育树,结果进一步确认了该菌的地位,XJ-27在细菌系统发育分类学上也归属为苏云金芽孢杆菌。     

一株葡聚糖酶产生菌的分离选育及鉴定

利用葡聚糖平板初筛,三角摇瓶复筛,从土壤样品中中分离得到一株葡聚糖酶高产菌株P5,发酵酶活力可以达到2.5U/mL。菌株呈长杆状、革兰氏染色阳性、产芽孢;生理生化实验结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌最为相近;16S rDNA基因序列包含1510个碱基对,同源性分析显示该菌株与枯草芽孢杆菌菌株最为相近,最高相似性为99%,基于16S rDNA基因序列的系统发育分析显示,该菌株与枯草芽孢杆菌菌株CD-6及YPM8的亲缘关系最近,根据以上多相分类结果鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

蜂胶对肉制品中主要腐败菌的抑菌效果研究

对胀袋西式火腿中的优势腐败菌进行分离,并通过16SrRNA基因序列分析对分离菌株进行鉴定,综合分析确定各菌株分别为枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与生孢梭状芽抱杆菌;以分离菌株为目标菌,进行蜂胶抑菌实验.结果表明:蜂胶对分离菌株及菌株混合液均有明显抑菌效果,并确定最低抑菌浓度为:枯草芽孢杆菌(0.1g/100mL)、短小芽抱...     

窖泥中产丁酸菌的筛选、鉴定及生长性能研究

通过对川南某酒厂的老窖泥富集培养、分离纯化,经丁酸发酵实验,筛选出1株高产丁酸的梭菌。经16Sr DNA鉴定,该菌为丁酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum),命名为丁酸菌YD-4。经对该菌株生长性能条件研究,其最适生长温度为37℃,最适p H值为7.0,最适接种量为2%,菌体浓度达1.64×108个/m L,产丁酸量可达到3.44 g/L。     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

一株高效油脂降解菌的分离鉴定及其性能研究

从餐馆隔油池废水中筛选分离得到一株能高效降解油脂的芽孢杆菌DK-1,经16S rDNA同源性序列分析,鉴定为解淀粉类芽孢杆菌,并进一步考察了菌株的生物量、油脂去除率、CODCr去除率及乳化活性等性能。实验结果表明,菌体的乳化指数为65%,在初始油脂质量浓度为5 g/L,CODCr为55 000 mg/L左右的模拟高含油有机废水中,该菌株能生长并快速降解油脂,在48 h内油脂去除率为97.3%,CODCr的去除率为91.9%。