浓香型白酒糟醅中可培养酵母18S rDNA全序列的系统学分析

从发酵7d的浓香型白酒发酵酒酷中分离到84株酵母菌,通过形态特征、生理特性检测及18SrDNA分子生物学水平鉴定方法将其归为6个类群,并建立系统发育树。结果表明,样品酒醅中可培养酵母以伊萨酵母属（Issatchenkia）和毕赤酵母属（Pichia）为主,得巴利酵母属（Debaryomyces）和假丝酵母属（Candida）占有相当的比例,其中还有一定数量的其他属种如酵母属（Saccharomyces）和红酵母属（Rhodotorula）。     

贵州浓香型白酒窖池可培养细菌系统发育分析

从贵州某名酒厂浓香型白酒窖泥和酒醅中分离到477 株细菌,通过形态特征和生理特性检测等传统方法鉴定,发现绝大多数为芽孢杆菌(446 株),占总细菌株数的93.50 %,将形态和生理生化特征一致的芽孢杆菌归类为XJ-1～XJ-20二十大类群.并采用16S rDNA序列分析和测序,构建系统发育树.结果表明,芽孢杆菌属菌株中,以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为主,占总芽孢杆菌数的32.96 %;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus) 和栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)也占有相当的比例,还有一定数量的Bacillus niabensis和巴达维亚芽孢杆菌(Bacillus bataviensis)以及少量的球状芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)和不确定种芽孢杆菌(Bacillus sp.).除芽孢杆菌属菌株之外,还分离出极少量的短短芽孢杆菌属(Brevibacillus)的不确定种菌株,占已分离总芽孢杆菌数的1.57 %.表明贵州地区浓香型白酒窖池中微生物具有明显的多样性,且地衣芽孢杆菌为其明显的优势种群,这和四川境内酒厂中的微生物类群相似,但也有区别.     

利用16S-23S rDNA间隔序列对葡萄酒中的酒酒球菌的鉴定

对从宁夏银川地区自然发酵的葡萄酒中分离得到30株菌株,并对菌株进行分子鉴定、生理生化鉴定和酿酒适应性的筛选.从中优选出4株菌株,对筛选出的4株菌株分别进行了PCR扩增,得到它们的16S～23S rDNAITS片段,并测定所得到片段的DNA序列.将测定结果与GenBankDNA数据库已知的菌种对比,确定4株菌株均为酒酒球菌.     

浓香型白酒酒醅细菌群落结构及其变化规律

该试验利用PCR-DGGE技术研究了浓香型白酒酒醅细菌群落结构及其发酵过程中的变化规律,结果发现:所有酒醅样品均出现13~23条较清晰的条带,其中第1、2、3、5、6、12、13号条带在所有样品中均有检出,且优势度较高;所有样品生物多样性指数都在2.12~2.80之间,发酵前期,多样性指数总体呈先增加后降低的趋势,发酵第49d时到达最低值,之后多样性指数有所增加,后期保持平稳;相邻发酵时间酒醅细菌DGGE图谱相似性指数较高,为0.58~0.78。     

发酵肠中一株细菌的16S rDNA鉴定及抗菌肽Surfactin对其芽孢灭活的效果

经过杀菌的发酵肠,仍有部分会变质,为探究其原因并进行控制而进行了以下试验。从商业发酵肠中分离获得1株耐热芽孢菌株B1,为构建控制技术,提高发酵肠安全水平,对该芽孢菌进行鉴定,并研究抗菌肽surfactin对其芽孢生长曲线的影响及盐类对surfactin灭活芽孢效果的影响。采用16S rDNA序列分析对该菌进行鉴定,并研究了不同浓度的NaCl和Na2HPO4?12H2O对surfactin灭活芽孢效果的影响。结果表明,该菌属蜡样芽孢杆菌属,同源性相似度达99%,仅有surfactin对芽孢作用时,不同浓度（20、25、30、35 μg/mL）的surfactin对其芽孢没有显著的杀灭作用,与NaCl和Na2HPO4?12H2O协同作用时,3%、5%、9%的NaCl可配合50 μg/mL和100 μg/mL的surfactin可有效杀灭芽孢,Na2HPO4?12H2O无此效果。该菌属于蜡样芽孢杆菌属,NaCl与surfactin共同作用可有效杀灭蜡样芽孢杆菌的芽孢,Na2HPO4?12H2O无显著作用。     

不同地域酱香型白酒酒醅细菌群落比较研究

采用PCR-DGGE技术研究了不同地域酱香型白酒酒醅细菌群落的差异。结果发现,所有酒醅样品均出现6~18条较清晰的条带,其中第1号、第3号、第4号、第12号条带在所有样品中均有检出,且优势度较高;所有样品细菌群落生物多样性指数都在1.26~2.11之间,酒醅细菌群落相似性指数均在0.45以下,表明不同地域之间的细菌群落差异较大。     

醋醅中细菌菌株的分离鉴定及系统学分析

对取自陕西省的醋醅中分离得到的菌株进行16S rRNA基因序列的系统学分析.通过聚合酶链式反应(PCR)的扩增,结合16S rRNA基因序列的同源性分析,比较未成熟醋醅样品与已成熟醋醅样品中细菌组成的差异,并构建两者的系统发育树.结果表明,未成熟醋醅样品呈现较高的细菌多样性,并且在设定一个假定阈值后,2个醋醅样品中的优势种群均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),仅在数量上存在差异.     

利用16S rDNA序列及tuf-RFLP鉴定蒙古国发酵乳中的乳酸菌

运用16S rDNA序列分析和tuf-RFLP技术对采于蒙古国扎布汗省的25份发酵乳样中分离出的110株乳酸菌进行鉴定。首先将分离的110株乳酸菌的16S rRNA基因进行扩增,测序并构建系统发育树,初步鉴定为41株嗜热链球菌,40株瑞士乳杆菌,11株德氏乳杆菌保加利亚亚种,2株发酵乳杆菌,1株乳明串珠菌,2株肠膜明串肠膜亚种,1株乳酸乳球乳酸亚种和12株属于干酪族的菌株。由于干酪乳杆菌族的16S rDNA序列差异很小,故采用tuf-RFLP技术对这12株进行了进一步的验证,通过分离菌株与模式菌株tuf-RFLP图谱的比较分析,结果表明这12株菌均为干酪乳杆菌。     

酸马奶中乳杆菌Lb.casei.Zhang和ZL12-1的16S rDNA基因序列及聚类分析

利用遗传学方法对分离自内蒙古锡林郭勒盟牧区采集的酸马奶样品中的乳杆菌Lb．casei．Zhang和ZL12-1的16S rDNA扩增与测序．并将结果与同属的乳杆菌作同源性分析，建立系统发育树，以求更准确地确定其归属，为益生菌的筛选奠定基础。结果表明，菌株Lb.casei.Zhang标准菌株Lb．casei ATCC334^T同源性为100％，菌株zLl2—1与标准Lb.gallinanum ATCC 33199^T的同源性为98％。结合系统发育树及16S rDNA的部分序列分析结果，将Lb.casei.Zhang判定为Lb．caseissubsp.casei.ZL12-1鉴定为Lb.gallinanum，这与传统分类方法所得鉴定结果一致。     

酱香型酒醅产香芽孢杆菌的分离鉴定及其代谢产物分析

本文研究了酱香型酒醅中的产香芽孢杆菌及其优势代谢产物。通过平板分离法从酱香型酒醅中筛选出5株芽孢杆菌,采用PLFA技术对其鉴定,分别为:蜡样芽孢杆菌(Bacillus ereus)、泛酸枝芽孢杆菌(Virgibacillus pantothenticus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis);革兰氏染色试验结果说明:这五类菌株均为革兰氏阳性菌;生化分析发现:枯草芽孢杆菌产淀粉酶能力最强,巨大芽孢杆菌蛋白质水解能力最强;以高粱粉为底物进行固态发酵,采用GC-MS分析技术对发酵代谢产物进行分析表明:菌株的优势产物主要为3-羟基-2-丁酮,另外还有少量的2,3-丁二醇和酯类等芳香物质。蜡样芽孢杆菌、泛酸枝芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌这五类菌株是酱香型白酒主要的产香功能菌。     

16S rDNA序列关键位点的信息论分析

16S rDNA中含有较多的菌种特异性信息,但是如何使用这些信息进行菌种鉴定却因不同菌种间序列的特征变化缺少规律而变得困难。作者使用信息论方法对那些种内较保守,种间变异明显的关键位点进行研究。结果表明,16S rDNA序列中仅有少数位点对菌种的分类是重要的。基于少数关键位点的相似度比传统的全序列鉴定有着更好的统计学特性。     

26S rDNA序列分析法鉴定开菲尔发酵液中的酵母菌

利用26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定了内蒙古牧区传统开菲尔发酵液中的酵母菌,为筛选可发酵特色乳酒的酵母菌奠定基础。对所分离纯化得的酵母菌进行菌落特征和细胞显微形态区分,在形态鉴定基础上,选择代表菌进行26S r DNA D1/D2区序列分子鉴定。结果表明,共分离到36株酵母菌,形态聚类为5类,经DNA提取、26S r DNA D1/D2区PCR扩增、酶切、基因序列分析和同源性比对,鉴定为5种分子类型的酵母菌,分别为胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa)、诞沫假丝酵母菌(Candida zeylanoides)、发酵毕赤酵母菌(Pichia fermentans)、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、有孢圆酵母菌(Torulaspora delbrueckii)。传统开菲尔发酵液中分离到的酿酒酵母,具有可发酵特色乳酒的潜质。     

利用16S rDNA序列分析鉴定一株产抗菌物质的微生物菌株

从桃子上分离纯化得到1株产抗菌物质的菌株,命名为fmb3菌,通过抑菌实验发现该菌对革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌、革兰氏阴性菌大肠埃希菌和真菌扩展青霉等3种常见食品病原菌具有显著的抑菌效果。利用16SrDNA分析对该菌作了系统进化鉴定,首先提取fmb3菌基因组DNA,根据不同种属的细菌的16SrDNA序列两端的保守性设计通用引物,对fmb3菌16SrDNA片断进行PCR扩增,对扩增得到的目标片段测序,并且利用NCBIBLAST对测序结果进行比对,构建系统进化树进行分析,初步确定该菌属于枯草芽孢杆菌。     

16S rRNA基因序列方法分析传统发酵菜中乳酸菌多样性

以发酵甘蓝卤水中微生物的总DNA为模板,用扩增革兰氏阳性菌16S rRNA基因的方法研究中国发酵甘蓝菜卤中乳酸菌的多样性。获得了42种含有1.5kb的16S rRNA基因插入核苷酸片段的克隆菌。利用克隆菌落核苷酸的部分序列和NCBI数据库中搜索到的相似序列进行对比后作出鉴定,结果得出4种独特的菌落,鉴定为Lactobacillus acidifarinae、植物乳杆菌(Lactobacillus Plantarum)、融合乳杆菌(Weissella confusa)和足球菌属(Pediococcus sp.)。此外,还发现两种非核糖体序列。用这种分子方法发现了常规分离培养技术未鉴定的乳酸菌,如Lactobacillus acidifarinae。     

甜瓜细菌性果斑病病原菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

从新疆昌吉甜瓜实验田中采集发病甜瓜样品12 份,对甜瓜细菌性果斑病病原菌进行分离纯化,并根据形态观察、致病性测定得到甜瓜细菌性果斑病病原菌1 株。以该菌总DNA为模板,采用细菌16S rDNA通用引物进行聚合酶链式反应扩增,并克隆到pGM-T载体,测序结果表明：克隆的16S rDNA序列长度为1 493 bp,通过GenBank上序列比对搜索工具分析,并构建系统发育树,对该菌株进行鉴定,结果表明该菌属于Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems（Aac）,即燕麦嗜酸菌西瓜亚种。     

55株芽孢杆菌16S rRNA基因序列测定与系统发育学分析

采用16S rRNA基因序列分析法对中国工业微生物菌种保藏管理中心(CCIC)保藏的55株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)进行复核鉴定。菌株经纯化培养,以改良CTAB法提取总DNA,采用细菌16S rRNA通用引物、TD-PCR方法(touchdown-PCR)进行16S rRNA基因序列扩增,PCR产物纯化后直接进行序列测定,序列经人工校对后用Clustal X进行比对分析,最后用MEGA3.1软件构建系统发育树。系统发育分析结果表明:55株枯草芽孢杆菌中有52株菌种与原鉴定结果一致,有3株菌种与原鉴定结果存在差异,其中2株鉴定结果为巨大芽孢杆菌(B.megaterium),另1株鉴定结果为地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)。     

硅酸盐细菌B925对烟草黑胫病菌的抑制作用及其16S rDNA序列分析

用从烟草根际土壤中分离的一株硅酸盐细菌B925及其发酵原液和发酵液的无菌滤液进行了对峙培养促进烟草种子萌发、离体叶片接种法和室内盆栽防治烟草黑胫病试验16S rDAN序列分析。结果表明:①B925发酵液处理能促进烟草种子萌发;②能减轻烟草黑胫病的扩展。对烟草黑胫病的预防作用为58.3%;③该菌为胶质芽孢杆菌。