应激性衰老导致血管内皮细胞能量代谢及线粒体功能异常的研究

为探究H_2O_2诱导的血管内皮应激性衰老中能量代谢和线粒体功能的变化,在H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞衰老模型中,Western blotting检测细胞衰老指标p21、p53、γH2A.X的蛋白表达水平;检测衰老相关的β-半乳糖苷酶蓝染程度;荧光定量PCR检测端粒长度;利用安捷伦Seahorse XFe 96细胞能量代谢仪检测内皮细胞的糖酵解情况和氧耗情况;检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位及ATP水平;检测细胞能量代谢关键酶的表达水平。与正常组相比,H_2O_2刺激的内皮细胞中p21、p53、γH2A.X的蛋白表达明显上调,衰老相关的β-半乳糖苷酶蓝染的细胞比例增加,端粒长度缩短,衰老内皮细胞糖酵解能力下降,线粒体呼吸功能明显降低,ROS水平增加,线粒体膜电位下降,ATP生成减少,但大部分能量代谢关键酶的表达水平不变。因此,内皮应激性衰老可引起内皮能量代谢紊乱及线粒体功能障碍,靶向内皮能量代谢及线粒体功能调节可能是干预内皮应激性衰老的重要策略。     

TSA对发育期大鼠癫痫后脑损伤的保护作用及其机制

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑素A(TSA)在癫痫后脑损伤发病中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、海人酸(KA)组、小剂量TSA干预组(0.03 mg/kg)及大剂量TSA干预组(0.1 mg/kg)组,通过腹腔注射海人酸(KA)制作发育期大鼠癫痫模型,TSA于KA诱导癫痫前2 h腹腔注射给药,评估惊厥发作的等级及记录惊厥的潜伏期。癫痫后24 h处死大鼠,HE染色观察脑组织病理变化;TUNEL染色检测大鼠海马神经元细胞凋亡;CD68染色检测活化的小胶质细胞;Western blot检测IL-1β和TNF-α蛋白的表达。结果 KA组均达到Ⅳ~V级惊厥发作,而TSA干预组能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期。HE染色可见KA组明显的神经元凋亡及细胞水肿,伴有较多的炎症细胞浸润,而TSA干预组能减轻神经元凋亡及细胞水肿,同时减少炎症细胞浸润。与对照组比较,KA组神经元凋亡数、小胶质细胞活化数及炎症因子的表达均显著增加(P<0.05),而TSA能抑制KA诱导的改变。相对于0.03 mg/kg TSA干预组,0.1 mg/kg TSA干预组治疗作用更明显(P<0.05)。结论 TSA能抑制癫痫后海马神经元凋亡、小胶质细胞活化及炎症因子的表达,同时能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期,从而对癫痫后脑损伤起到保护作用。     

低氧条件下人成骨细胞长链非编码RNA5'aHIF-1α的表达

目的观察低氧条件下人成骨细胞HIF-1α反义转录物5'aHIF-1α的表达变化,探讨低氧对人成骨细胞分化影响的调控机制。方法采用人成骨肉瘤细胞系(MG63),随机分为4组,分别在不同氧体积分数(10%、6%、3%和1%O2)条件下培养72 h。用Trizol法提取总RNA,用实时荧光定量PCR法检测5'aHIF-1α表达;用Western blot法检测HIF-1α蛋白表达。结果 10%O2组MG63细胞5'aHIF-1α表达水平是对照组(6%O2)的2.06±0.07倍,3%和1%O2组MG63细胞5'aHIF-1α表达水平分别是对照组的0.63±0.08和0.43±0.03倍。10%O2组5'a HIF-1α蛋白表达水平明显降低,3%和1%O2组HIF-1α蛋白表达水平随氧体积分数降低而逐渐升高。结论低氧条件下,长链非编码RNA-5'aHIF-1α可能在转录或转录后水平抑制MG63细胞HIF-1α的表达,但随着氧体积分数的降低,其抑制作用逐渐减弱。     

小胶质细胞受体与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(AD)是一种以认知与其它机能进行性减退为主要特征的神经系统退行性病变。越来越多的证据表明,炎症反应在AD的病理进程中起了重要的作用。小胶质细胞为脑内固有吞噬细胞,可表达多种受体;β-淀粉样蛋白(Aβ)通过与上述受体的相互作用促进小胶质细胞的活化,刺激炎症反应产生。本文就近年来关于小胶质细胞受体在AD发生发展中的作用作一综述。     

神经炎症在神经退行性疾病和精神疾病中的病理生理作用

阿尔茨海默病、帕金森病、抑郁症、精神分裂症、自闭症和成瘾症等中枢神经系统疾病,会由于其异常的思维模式、认知、情绪状态和行为导致生活品质下降。目前,上述疾病致病机制仍不十分清楚;近来临床与动物研究表明神经炎症可能与这些疾病的发生发展密切相关。在中枢神经系统,过度的炎症反应能激活小胶质细胞,从而导致促炎症因子包括白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放。反过来,促炎症因子亦能加剧神经炎症反应、神经元退化以及大脑功能损伤。本文主要就小胶质细胞介导的神经炎症在神经退行性疾病和精神疾病中的病理生理作用做一综述。     

二氢杨梅素对丙泊酚麻醉引起的大鼠认知功能障碍的影响及机制

二氢杨梅素(DMY)具有神经保护作用。本研究观察DMY对丙泊酚诱导的大鼠认知功能障碍的影响,并从小胶质细胞极化的角度探讨其机制。10周龄SD大鼠先进行腹腔注射丙泊酚(100 mg/kg)一次,然后灌胃给药DMY(每天200 mg/kg),共7天。Morris水迷宫测试发现DMY改善了丙泊酚诱导的认知功能障碍,Western blot分析发现DMY下调了丙泊酚诱导的大鼠海马组织中CD68和iNOS的表达,而上调海马组织中Arg1的表达。ELISA法检测发现DMY降低丙泊酚诱导的大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的水平,而增加IL-4和IL-10的水平(均P<0.05)。本研究结果阐明DMY改善了丙泊酚麻醉引起的大鼠认知功能障碍,其机制可能与调节小胶质细胞极化有关。     

缺氧诱导因子-1与炎症关系的研究进展

从缺氧诱导因子-1(HIF-1)的结构特征、HIF-1在炎症环境中的主要功能、HIF-1α在炎症性疾病中的作用、炎症与炎症因子、炎症因子对HIF-1的调节几个方面对HIF-1与炎症关系的研究进展进行概述,从而为治疗炎症性疾病以及寻找新的抗炎药物提供新的思路和依据。     

食管鳞癌组织中HIF-1α及Fascin蛋白的表达

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及细胞骨架蛋白(Fascin蛋白)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法:应用免疫组织化SP法检测80例食管鳞癌及癌旁组织中HIF-1α及Fascin蛋白的表达,分析其与食管鳞癌病理特征的关系。结果:食管鳞癌组织中HIF-1α及Fascin蛋白的总阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05),在食管鳞癌组织中HIF-1α的表达与Fascin蛋白的表达呈正相关(r=0.252,P=0.024);HIF-1α及Fascin蛋白在食管鳞癌组织中的表达与癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05),但均与年龄、性别等因素无关(P>0.05)。结论:高表达HIF-1α及Fascin蛋白在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,且高表达的HIF-1α蛋白与Fascin蛋白存在相关性。     

星形胶质细胞通过CX47促进少突胶质前体细胞增殖

目的:研究星形胶质细胞(AST)对少突胶质前体细胞(OPC)生长分化的影响及作用机制。方法:用P3SD乳鼠,建立星形胶质细胞与少突胶质前体细胞原代培养体系。实验分两部分,第一部分为常规OPC培养组、AST分泌因子组、AST与OPC直接接触式培养组;第二部分为AST与OPC直接接触式培养组、缝隙连接干扰对照组、缝隙连接干扰组。免疫荧光鉴定OPC与AST细胞纯度,光镜观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞周期,转录组测序分析不同状态下OPC中缝隙连接蛋白CX47差异表达,PCR和Western blot检测鉴定转录组测序CX47差异表达,EDU检测CX47干扰后OPC增殖能力,流式细胞术测干扰CX47后细胞周期变化。结果:光镜与流式检测发现,与AST接触培养的OPC增殖能力最强、新生细胞数目最多。转录组测序分析和PCR验证显示,AST接触调控OPC增殖的主要差异表达蛋白为CX47,干扰CX47后细胞周期阻滞在G1期,OPC增殖能力明显下降。结论;AST可通过缝隙连接蛋白CX47调控细胞周期,促进OPC增殖。     

脑穿刺损伤并局部注药大鼠模型的构建初探

目的建立脑穿刺损伤并局部注药大鼠模型,为进一步研究奠定基础。方法成熟的wistar雌性大鼠20只,按随机数字表法分为正常对照组和脑穿刺损伤组,每组10只。脑穿刺损伤组大鼠麻醉后,微型钻钻孔、将针刺入颅内,经顶叶皮层插入脑组织中4 mm,伤及皮层,刺入位置为中线旁开3 mm,额状缝前3 mm,留针2 min,并用X线侧位片和正位片检查刺入位置和深度后退出。正常对照组仅开颅,不致伤。Wistar大鼠脑穿刺后,消毒断头取大鼠皮层细胞原代培养,经纯化后星形细胞传代培养,取第3代星形胶质细胞进行GFPA的免疫组织化学检查鉴定细胞形态,观察脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的光密度OD值、数密度值。结果经原代及传代培养,获得大量几乎为单一种类细胞,其特点为胞体较大,形状不规则,胞质较丰富,细胞核圆形或卵圆形,常偏于胞体一侧,细胞突起较多较长,符合星形胶质细胞形态。免疫荧光检测显示GFAP阳性细胞为97%,脑穿刺损伤组原代培养细胞数量增多,脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的数密度分别为73.41±6.53和51.37±5.36,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的光密度值分别为2.41±0.34和1.37±0.38,2组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论脑穿刺损伤并局部注药大鼠模型可以观察穿刺损伤部位的星形胶质细胞的变化,为在细胞水平研究创伤性脑损伤提供了平台。