自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体的纯化与检测

为了提纯并鉴定自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体,探讨其在部分组织中的免疫定位．首先合成带谷胱甘肽转移酶标签的自噬基因融合蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体浓度,最后用免疫亲和纯化方法提纯抗血清中的多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测抗体效价,蛋白印迹检测抗体特异性及在组织中的表达情况．结果表明：制备得到自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其质量浓度为每10μL含5μg,用酶联免疫吸附法显示此抗体效价及特异性较高,蛋白印迹显示蛋白大小为55kD左右．     

苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究

研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体.采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价.结果表明,苏丹红Ⅰ抗体的效价为1:8 000,可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测.     

大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的同源建模和B细胞表位的预测

利用生物信息学软件SWISS-MODEL和Deep View 4.1对Gly m Bd 28K进行同源建模并对做出的模型进行评估。利用DNAStar和SOPMA分析Gly m Bd 28K的亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原指数和二级结构,预测出Gly m Bd 28K的4个B细胞线性表位5-13,75-77,175-177,200-203。根据三级结构模型,通过Disco Tope 2.0预测出Gly m Bd 28K的6个与构象表位相关的区段11-14,40-41,43,114-115,185-192,194-207。     

人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.     

家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究

从家蚕cDNA文库中扩增到家蚕BmAGO2基因完整的ORF序列,通过Lasergene软件分析获得BmAGO2的抗原表位区（命名为Kago2）,构建含Kago2的表达载体,转化大肠杆菌诱导表达,融合蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blotting检测抗血清的效价可达到1∶25 600以上,抗体特异性较好。表达谱分析结果显示,BmAGO2蛋白在家蚕卵期、蛹期、蛾期和五龄幼虫期均表达,但在蛹期表达量要偏低。而在五龄幼虫各组织中BmAGO2蛋白的表达差异较明显,BmAGO2蛋白在头部和表皮中大量表达,丝腺、马氏管和脂肪中也有少量表达,而在血淋巴、气管和中肠中未检测到该蛋白的表达。结合BmAGO2表达谱分析结果,进一步利用其抗体通过免疫共沉淀方法从BmAGO2蛋白表达量高的家蚕头部和表皮中分离出BmAGO2蛋白及结合的RNA,并逆转录成cDNA。以家蚕miRNA潜在的靶基因Bmem4,Bm（spl）-like,Bmemc,Bmmγ,Bmmβ2作为检测基因,荧光定量PCR分析获得的BmAGO2结合RNA,和对照组RNA相比,Bmem4,Bm（spl）-like,Bmemc,Bmmγ,Bmβ2基因在BmAGO2结合RNA中的含量分别富集了3.93、1.31、2.4、1.31、0.97倍。miRNA靶位点分析表明,Bmem4和Bmemc存在多个miRNA结合位点,极有可能是miRNA的靶基因。目前还没有有效的家蚕miRNA靶基因高通量鉴定方法,本实验为家蚕miRNA靶基因的高通量筛选提提供了可靠地实验途径。     

硝基苯胺多克隆抗体的制备及鉴定

用合成的免疫抗原硝基苯胺-BSA免疫新西兰大白兔,获得了特异性的硝基苯胺多克隆抗体.最佳包被抗原实验确定了包被抗原最佳浓度(1μg/mL),用间接酶联免疫吸附试验测得抗体效价达1∶12 800.以所获得的抗体建立间接竞争酶联免疫吸附分析法,交叉反应表明,硝基苯胺的特异性抗体与其他类似结构的类似物无明显交叉反应.     

家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究

从家蚕cDNA文库中扩增到家蚕BmAGO2基因完整的ORF序列,通过Lasergene软件分析获得BmAGO2的抗原表位区(命名为Kago2),构建含Kago2的表达载体,转化大肠杆菌诱导表达,融合蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blotting检测抗血清的效价可达到1∶25 600以上,抗体特异性较好。表达谱分析结果显示,BmAGO2蛋白在家蚕卵期、蛹期、蛾期和五龄幼虫期均表达,但在蛹期表达量要偏低。而在五龄幼虫各组织中BmAGO2蛋白的表达差异较明显,BmAGO2蛋白在头部和表皮中大量表达,丝腺、马氏管和脂肪中也有少量表达,而在血淋巴、气管和中肠中未检测到该蛋白的表达。结合BmAGO2表达谱分析结果,进一步利用其抗体通过免疫共沉淀方法从BmAGO2蛋白表达量高的家蚕头部和表皮中分离出BmAGO2蛋白及结合的RNA,并逆转录成cDNA。以家蚕miRNA潜在的靶基因Bmem4,Bm(spl)-like,Bmemc,Bmmγ,Bmmβ2作为检测基因,荧光定量PCR分析获得的BmAGO2结合RNA,和对照组RNA相比,Bmem4,Bm(spl)-like,Bmemc,Bmmγ,Bmβ2基因在BmAGO2结合RNA中的含量分别富集了3.93、1.31、2.4、1.31、0.97倍。miRNA靶位点分析表明,Bmem4和Bmemc存在多个miRNA结合位点,极有可能是miRNA的靶基因。目前还没有有效的家蚕miRNA靶基因高通量鉴定方法,本实验为家蚕miRNA靶基因的高通量筛选提提供了可靠地实验途径。     

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64基因的原核表达

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白Gp64是杆状病毒感染宿主细胞的重要功能蛋白之一.通过Oligo6.0设计一对特异性引物,用于扩增Gp64基因的部分DNA片段,对聚合酶链式反应扩增得到的DNA片段进行纯化,并对纯化后的双酶切DNA片段与经同尾酶双酶切后的原核表达载体p ET28a进行连接;对捕获有重组质粒p ET28a-Gp64的大肠杆菌BL21(DE3)细胞进行异丙基硫代半乳糖苷诱导,通过SDS-PAGE对诱导产物进行电泳分析,结果表明扩增的目的片段获得了表达;采用电透析的方法纯化了该蛋白,为进一步制备抗Gp64蛋白抗体做准备.     

重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽在大肠杆菌中融合可溶表达

将N-利用基质(NusA)和人骨形态发生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的编码基因进行基因融合,实现了hBMP-2m在大肠杆菌中的融合可溶表达.以大肠杆菌基因组DNA为模板PCR扩增得到NusA基因,通过NdeⅠ和AflⅡ酶切位点将其置换出重组融合表达载体pDsbA-hBMP-2m中的DsbA基因,使hBMP-2m基因重组于NusA基因的下游,重组质粒转化E.coli BL21(DE3),获得工程菌.在30℃条件下,经IPTG诱导表达后,融合蛋白占细胞总蛋白的45%左右,并且主要以可溶形式存在,可溶部分达90%以上.经过简单的Ni 2+柱一步纯化即可得到纯度较高的融合蛋白.通过融合表达的方式表达出可溶性的目的蛋白,有望复性后通过肠激酶酶切得到hBMP-2m单体,进一步二聚体化得到具有生物活性的hBMP-2m.     

念珠藻Fe-SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

根据低等物种Fe-SOD核酸序列设计简并引物，以念珠藻基因组为模板，扩增获得了念珠藻Fe-SOD基因.将此基因重组至原核表达载体pET22b（＋），构建成工程菌pET-SOD，并转化至大肠杆菌宿主.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得Fe-SOD蛋白分子量约为28 kD，占全菌蛋白的78％，并以包涵体形式表达.经Ni2＋亲和层析柱纯化后，目的蛋白的SOD比活力达1 100 U/mg，在紫外可见光谱中表现出金属Fe的特征峰.肿瘤细胞共培养试验表明，此Fe-SOD具有一定的抗SPC-A-1肺腺癌细胞增殖的能力.     

角料的宝石学特征及优化处理

角料是指鹿，羊，牛以及犀牛的角。属非晶质体，成分为有机质。具美丽的颜色或色带。呈半透明或不透明，油脂光泽，韧性强，硬度小，密度轻，折光率低，在紫外光下发较强的蓝白色荧光。具良好的热塑性，易于加工和抛光，优化处理后可提高质量，产品日益受珠宝爱好者青睐。     

香兰素亚硝基化合物极谱波特征及应用

根据香兰素亚硝基化合物所产生的极谱波建立了一种灵敏、简便、快速的测定食品中香兰素的极谱分析新方法。线性范围０．０１５～１．８μｇ／ｍＬ,检出限为６．７×１０－３μｇ／ｍＬ。研究了极谱波性质及电极反应机理,测定了麦片、蜜饯中香兰素含量。     

电除尘器电晕电场特性测试及湿度的影响

本文介绍了测定电除尘器二维电晕电场特性的改进型探针法,并对大量试验数据进行分析,初步探讨了湿度对二维电晕电场特性的影响。改进型探针装置采用了高阻分流旁路降压法及其它辅助措施。在同轴圆筒装置中和板线装置中,测量了空间电位。测量值与计算值相吻合。     

浅谈火候及其运用

火候是烹饪的基本技术要素之一,它在烹饪中的作用是有目共睹的,但多少年来,人们对火候的认识只停留在现象的解释上,没有较深的理论作依托,运用传热学公式对火候及食物的传热过程进行分析,进一步揭示食物加热中的各种现象,使火候的掌握更加合理便捷。     

苏州古城保护与更新中形态学、类型学理论与方法的应用

历史性城市的保护和更新越来越受到人们的重视,探求保护和更新的理论与方法已成为历史性城市发展的一大课题,文章运用形态学、类型学的理论,以平江历史街区的保护和整治设计为例,探索了历史环境中城市建筑形态更新的方法。     

高校学报与科教兴国

着重阐述了高校自然科学学报的功能及作用,并结合现代科学技术发展特点,提出了应强化和发挥学报的引导、服务功能及作用。     

混凝土,砂浆强度数理统计程序及应用

提出了混凝土、砂浆强度数理统计的数学模型及该模型的软件程序。由统计和验收程序可直接求出月、季、年强度统计参数、标准差、总体不合格率估计伍等，并可计算出各种验收参数。回归、回弹程序可与常用六种曲线拟合。根据计算出的秦数既可评定单位工程质量又可分析总体质量。列举了应用实例。     

根皮苷的应用及分离纯化研究进展

根皮苷具有降低血糖、抗氧化等作用,目前已被应用于医药、化妆品、食品、植物组织培养等领域．对根皮苷的应用及目前用于分离纯化根皮苷的方法进行了综述,以期对根皮苷的开发利用提供帮助．     

有机食品利弊及安全性分析

从有机食品产量、鉴定技术、营养和口味、生产成本、对环境的影响等五个方面分析了有机食品的利弊后认为,有机食品是否可以在中国进行大面积的种植尚需探讨,有机食品的大量生产可能对中国的食品安全产生负面的影响.     

油脂精细化工产品的开发与利用

本文从丰富的天然油脂资源、庞大的油脂家族和油脂广阔的开发途径等３个方面，阐明可再生资源－油脂，将成为合成有机化工产品基础原料的可能性和必然性。