杨梅贮藏期真菌的分离鉴定及基于ITS序列的聚类分析

目的 分离并鉴定杨梅贮藏期真菌。方法 通过稀释涂布平板分离法以及划线纯化, 从贮藏期杨梅果实中分离、纯化真菌菌种, 并结合传统形态学与ITS (internal transcribed spacer)全序列分析对其进行准确鉴定。结果 最终鉴定出共14株真菌, 其中1株毛霉(Mucor racemosus)、1株白地霉(Geotrichum candidum)、 1株腐皮壳属霉菌(Diaporthe sp.)、1株好食链孢霉(Neurospora sitophila)、3株出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)、4株酵母菌(Pichia kudriavzevii, Pichia terricola, Hanseniaspora opuntiae, Saccharomycopsis crataegensis)以及3株青霉(Penicillium sp., Penicillium expansum, Penicillium herquei)。从进化关系上看有3类显示较近的亲缘关系, 第1类为青霉属, 第2类为出芽短梗霉, 第3类为毕赤酵母。结论 结合传统形态学与ITS全序列分析可对杨梅贮藏期真菌进行更为准确的鉴定。     

北宗黄酒麦曲微生物的分离鉴定

利用梯度稀释法和划线纯化法对麦曲中的微生物进行分离纯化,得到7株细菌和5株真菌。通过形态学特征观察和分子生物学方法进行菌种鉴定,细菌分别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、根际芽孢杆菌(Bacillus rhizosphaerae)、索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)。真菌分别为米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、根菌属(Talaromyces radicus)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、伞状犁头霉(Absidia corymbifera)。     

鲜切苹果腐败霉菌的分离鉴定及致腐力的研究

对引起鲜切苹果腐败的霉菌进行分离鉴定并通过活体实验比较致腐能力。从鲜切苹果中分离13株霉菌,通过形态学鉴定方法分为5个属,其中青霉菌属(Penicillium)7株,曲霉属(Aspergillus)1株,枝孢属(Cladosporium)3株,枝顶孢属(Acremonium)1株,链格孢属(Alternaria)1株。根据青霉菌在CA、CYA、G25N培养基上的特征及镜检观察,将所分离的青霉菌鉴定为5种:皮落青霉(P.crustosum),扩展青霉(P.expansum),米舒青霉(P.miczynskii),橘灰青霉(P.aurantiogriseum),鲜绿青霉(P.viridicatum)。活体实验进行腐败与非腐败霉菌的分类,得到腐败霉菌有5种,分别为鲜绿青霉、扩展青霉、皮落青霉、互隔交链格孢霉(A.alternata)、黑曲霉(A.niger);非腐败霉菌有5种,分别为橘灰青霉、地生枝顶孢(A.terricola)、球孢枝孢(C.sphaerospermum)、枝状枝孢(C.cladosporioides)和米舒青霉。5种腐败霉菌的致腐能力从大到小依次为:皮落青霉、扩展青霉、鲜绿青霉、互隔交链格孢霉、黑曲霉。     

市售生鲜湿面中腐败菌的分离与鉴定

采用涂布平板法从生鲜湿面中分离腐败菌,通过形态观察及分子生物学技术对分离腐败菌进行菌种鉴定。结果表明,从生鲜湿面中分离得到8株典型菌株,包括3株霉菌和5株细菌。经鉴定,3株霉菌（A1,B1,C1）分别为草酸靑霉（Penicillium oxalicum）、黄曲霉（Aspergillus flavus）、黑曲霉（Aspergillus niger）;5株细菌（S1～S5）分别为3株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、1株肠炎沙门氏菌（Salmonella enterica）、1株副芽孢杆菌（Bacillus paramycoides）。     

胀袋烤鸡中腐败菌的分离与鉴定

通过胀袋烤鸡中的腐败菌相研究,分离出5株腐败菌,分别编号为A、B、C、D、E。利用生理生化结合16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定。综合生理生化检验结果和系统进化树分析结果,确定5个菌株分别为:A是生孢梭状杆菌(Clostridium sporgenes),B、E是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),C、D是短小芽孢杆菌(B.pumilu)。这将为烤鸡中腐败菌溯源分析及加工与保鲜过程中工艺控制提供借鉴。     

2株樱桃腐败真菌的鉴定及贝莱斯芽孢杆菌对其抑制作用

为了获得绿色、安全的樱桃天然防腐保鲜剂,从腐败的樱桃上分别分离出2株主要的腐败菌,经菌落形态和分子生物学鉴定,初步鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)和总状毛霉(Mucor racemosus),分明命名为BC-1和SC-1。从实验室保存的菌种库中筛选出两株对樱桃腐败菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,通过形态学及分子生物学鉴定,初步确定均为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),分别命名为KA-2和XK-5。采用LB和landy培养基发酵两株菌,用贝莱斯芽孢杆菌的两种培养基发酵液酸沉后浸泡的方法研究其对樱桃的防腐保鲜作用,发现贝莱斯芽孢杆菌XK-5 landy发酵液酸沉提取物具有更好的防腐保鲜作用。该贝莱斯芽孢杆菌菌株有望作为生产新型绿色、安全的生物防腐保鲜剂的优良菌种。     

鲜切生菜致腐霉菌的分离鉴定

对引起鲜切生菜腐败的霉菌进行分离鉴定。通过形态学鉴定方法,从鲜切生菜中分离出46株霉菌,其中青霉菌属(Penicillium)28株,曲霉属(Aspergillus)13株,枝孢属(Cladosporium)3株,镰孢属(Fusarium)2株。根据不同属在不同培养基上的性状,通过在察氏琼脂培养基(CA)、察氏酵母膏琼脂培养基(CYA)、查氏酵母浸出液加蔗糖培养基(CY20S)、25%甘油硝酸盐琼脂培养基(G25N)和玉米粉琼脂培养基(CMA)等鉴定培养基上的特征及显微镜观察,将28株青霉菌属鉴定为三种:橘灰青霉(P.aurantiogriseum)、鲜绿青霉(P.viridicatum)、草酸青霉(P.oxalicum)。13株曲霉属鉴定为两种:泡盛曲霉(A.awamori)、蜂蜜曲霉(A.melleus)。枝孢属鉴定为一种:枝孢样枝孢霉(C.cladosporioides)。     

浓香型大曲中可培养真菌的分离鉴定与系统发育学分析

采用传统微生物分离手段从浓香型大曲中分离纯化得到69株真菌。通过形态学观察、分子生物学鉴定以及系统发育学分析其分类地位。结果表明:采用ITS区序列进行真菌的分子鉴定可将大多数的真菌鉴定到属,部分真菌甚至能够鉴定到种;浓香型大曲内分离获得的真菌类群主要包括曲霉属(Aspergillus)、红曲霉属(Monascus)、根毛霉属(Rhizomucor)、横梗霉属(Lichtheimia)、青霉属(Penicillium)、拟青霉属(Paecilomyces)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomala)、锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)等目前已报道的大曲真菌类群,同时也发现了Merimbla ingelheimensis、踝节菌属(Talaromyces),尾孢菌属(Cercospora)、枝孢菌属(Cladosporium)、Acremonium impicatum、脉孢菌属(Neurospora)等霉菌类群在大曲中分布。其中曲霉属是优势种群,其菌株数目和种类最多,分别占43.48%和20.69%。本研究极大地丰富了对浓香型大曲中真菌种群的认识。     

甜米酒酒曲微生物分离和菌种鉴定

甜米酒传统酿制工艺中对微生物多样性的研究较为不足。对不同来源的酒曲微生物进行分离和初步分类鉴定。从12种甜米酒酒曲分离纯化细菌和真菌微生物,分别利用细菌16S rRNA基因和真菌内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列为目的基因进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增和测序,通过序列相似性比对和构建系统发育树,并分别进行细菌和真菌初步菌种鉴定。结果显示,从12种不同来源的酒曲筛选和分离到46株细菌和54株真菌;通过分子生物学方法鉴定出41株细菌和16株真菌的种属;酒曲微生物中含有大量芽孢杆菌(Bacillus),少量病原菌和腐败菌,表明酒曲仍需要严格的制作工艺和标准;真菌除酿酒酵母外,还鉴定出毕赤酵母和扣囊复膜酵母等非酿酒酵母及米根霉、小孢根霉、印度毛霉和卷枝毛霉等丝状真菌。     

皱皮木瓜腐败微生物的分离鉴定

为探明皱皮木瓜贮藏保鲜过程中腐败变质的原因,采用组织分离法对引起皱皮木瓜腐败的微生物进行分离纯化,初步分离出2 株细菌和6 株霉菌,未分离出酵母菌。回接实验结果表明共有2 株细菌、3 株霉菌能引起皱皮木瓜腐败。通过形态学及分子生物学对5 株腐败微生物进行鉴定,结果表明：2 株细菌分别为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、假蕈状芽孢杆菌（B. pseudomycoides）,3 株霉菌分别为扩展青霉（Penicillium expansum）、枝孢霉菌（Cladosporium velox）、皮落青霉（P. crustosum）。本研究可为皱皮木瓜贮藏保鲜过程中腐败控制提供一定理论支持。     

烟台地区引起甜樱桃采后腐烂霉菌的分离鉴定

为明确引起烟台地区甜樱桃采后腐烂的主要霉菌,对烟台采后腐烂甜樱桃中的霉菌进行分离,应用内部转录间隔区序列分析方法和形态学观察将分离的霉菌进行鉴定。选出代表性霉菌菌株回接樱桃,进行致腐性检测。结果表明:从烟台不同区县收集的腐烂樱桃中分离出的60株霉菌分属于6个种:燕麦赤霉菌(Gibberella avenacea)、总状毛霉菌(Mucor racemosus)、三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)、互生链格孢菌(Alternaria alternate)、奥桑青霉菌(Penicillium polonicum)和烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus),其中互生链格孢菌和总状毛霉数量较多,分别为14株和15株。将这些霉菌中的代表菌株重新接回到甜樱桃,均能引起甜樱桃的腐烂。     

凉果中优势腐败霉菌的分离鉴定

凉果加工与贮藏中霉菌污染直接影响凉果的品质。为明确凉果贮藏中优势腐败霉菌的种类,该研究对在常温贮存4个月后霉变的葡萄干、话梅、杏脯中腐败霉菌进行了分离纯化,得到7种典型腐败霉菌。将分离出的腐败霉菌回接至无菌的葡萄干、话梅、杏脯表面,进行回接侵染实验,通过凉果霉变时间确定出4株菌株为优势腐败霉菌。通过菌落形态特征、菌丝和分生孢子显微结构观察,结合核糖体内转录间隔区（rDNA-ITS）序列分析,构建系统发育,鉴定优势霉菌种属。结果表明：葡萄干的优势霉菌为芽枝状枝孢霉（Cladosporium velox）和暗黄青霉（Penicillium citreonigrum）,话梅的优势腐败菌为细极链格孢（Alternaria tenuissima）,杏脯的优势腐败霉菌为菌核青霉（Penicillium sclerotiorum）。该研究结果可为凉果腐败霉菌的分离鉴定提供可靠的方法,也可为后续凉果杀菌方法的选择,贮藏条件的优化提供依据。     

山茱萸中有益菌的分离和鉴定

将药用植物山茱萸作为有益菌的分离源,以获得常见有害菌的抗性菌,提高山茱萸的利用价值。以马铃薯葡萄糖琼脂和营养琼脂平板分离、纯化其体外真菌和细菌,对获得的菌株进行黑曲霉、黄曲霉和大肠杆菌等有害菌的对峙实验,并对抗性菌进行分子生物学和生理生化的种属鉴定。实验结果表明：从山茱萸中分离纯化28株菌（12株细菌、16株真菌）,其中2株菌对黑曲霉、黄曲霉有一定的抑菌效果,经分子生物学和生理生化实验鉴定,菌株S136是肠杆菌属（Enterobacter sp.）、菌株S138是芽孢杆菌属（Bacillus sp.）的细菌。     

冬季甜瓜腐烂病原菌的分离与鉴定

从冬季贮存甜瓜的腐烂组织中分离病原菌,并对其类型进行检测分析。利用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和溶菌肉汤(LB)培养基培养,依据微生物形态特性,真菌的26S rRNA 序列和细菌的16S rRNA 序列比对以及系统发育进化分析等分子生物学方法,共分离到22 株菌种,其中真菌13 株：包括青霉2 株、链格孢4 株、白地霉4 株、酵母3 株(梅奇氏酵母2 株、毕赤酵母1 株);细菌9 株：包括沙雷氏菌5 株,丁香菌1 株,克雷伯菌、肠杆菌和芽孢杆菌各1 株。根据26S rRNA D1/D2 区序列比对和系统进化树结果显示,两株酵母菌121 和122 可能是梅奇氏酵母属潜在的新种。青霉和链铬孢是甜瓜腐烂致病菌,白地霉和沙雷氏菌是人体致病菌,表明目前甜瓜贮存方法需要进一步改进和完善。     

感官异常番茄酱和杏酱中腐败细菌的快速鉴定

目的采用微生物快速质谱鉴定法快速鉴定新疆感官异常番茄酱和杏酱中的细菌。方法对感官异常番茄酱和杏酱中的细菌进行分离培养获得9株细菌菌株,运用Vitek MS微生物快速质谱鉴定仪对分离的细菌菌株进行鉴定,同时采用VITEK2微生物鉴定仪鉴定菌株。结果番茄酱中获得的5株菌分别为:解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沃氏葡萄球菌、粪肠球菌;杏酱中获得的4株菌分别为巴氏葡萄球菌、粪肠球菌、沃氏葡萄球菌、浸麻类芽孢杆菌。结论本研究快速鉴定结果与化学鉴定结果基本一致。     

一例茶饮料污染源的分析

某企业生产的一批茶饮料中发现某些产品变质,3份样品出现pH值下降,或产气胀罐现象,或有肉眼可观察到浑浊、变色等感官指标的变化。检测发现引起腐败变质的主要是细菌,其数量≥104 CFU/mL,4株主要污染菌菌株经16S rDNA序列比对,鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、肠杆菌属(Enterobacter sp.)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)和短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。样品中还有数量很低(101～102 CFU/mL左右)的霉菌检出,经形态观察初步鉴定为交链孢霉(Alternaria spp.)、枝孢霉(Cladosporium spp.)、曲霉(Aspergillus spp.)和青霉(Penicillium spp.)。该案例中霉菌虽然不是主要的腐败变质菌,但是其菌相组成与空气中主要的霉菌菌相一致,显示该污染的源头可能是空气,细菌的组成也能支持这个推论。实践中,通过更换无菌空气过滤器,确实解决了污染问题,证实了该推论。     

一款10年陈熟普洱茶中可培养微生物的分离鉴定

在贮存过程中微生物的种类和数量对普洱茶的品质有很大影响。本实验用4种不同的选择性培养基对一款10年陈熟普洱茶中的微生物进行选择性培养和计数;不同的微生物菌落被分离,并用显微镜进行形态观察和初步鉴定,根据细菌的16S rRNA进行分类。结果表明：该款普洱茶的细菌总数为4.3×103CFU/g;霉菌数约为20CFU/g,未发现该普洱茶中存在酵母和放线菌;根据菌落形态分离到的7株细菌都是革兰氏阳性菌,分别属于5个种,即枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 2株、解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens) 1株、地衣芽孢杆菌(B. Licheniformis) 2株、嗜热芽孢杆菌(B. sporothermodurans) 1株和 B. shackletonii 1株;用显微镜进行的形态观察鉴定只分离到两种霉菌,即黑曲霉(Aspergillus niger)和产黄青霉(Penicillium chrysogenum)。     

Succession of bacterial and fungal communities during natural coffee (Coffea arabica) fermentation

Bacteria, yeasts and filamentous fungi were isolated during natural coffee processing. Bacteria were isolated in greater numbers at the beginning of the fermentation, when the moisture of the coffee beans was around 68%. Gram-positive bacteria represented 85.5% of all bacteria isolated, and Bacillus was the predominant genus (51%). Gram-negative species of the genera Serratia, Enterobacter and Acinetobacter were also found. Approximately 22% of 940 randomly chosen isolates of microorganisms were yeasts. Debaryomyces (27%), Pichia (18.9%) and Candida (8.0%) were the most commonly found genera, and these three genera tended to appear more often as the fruit was fermented and dried. Aspergillus was the most abundant genus besides Penicillium, Fusarium and Cladosporium, with 42.6% of the total fungi isolates. The genera and species identified included members known to have pectinase and cellulase activities. Of the 10 organic acids analyzed and quantified in coffee beans, acetic and lactic acids may have been generated by microbial activity. Butyric acid was not detected in any sample.     

PSYCHROTROPHIC AND MESOPHILIC FUNGI ISOLATED FROM IMPORTED FROZEN LEAN MEAT IN EGYPT

From 475 samples of imported frozen lean beef in Egypt, 859 psychrotrophic fungal strains (770 strains by the dilution plating and 89 strains by direct plating) were isolated. There were also 1291 mesophilic fungal strains isolated (1133 and 158 strains by the two different methods, respectively). The predominant psychrotrophs identified were species of Cladosporium and Penicillium while most mesophiles were in the genera of Aspergillus, Cladosporium and Penicillium.