树干毕赤酵母木糖醇脱氢酶基因表达载体构建及在酿酒酵母中的过表达

针对树干毕赤酵母xyl2基因设计相应引物。以p-AKRX为骨架载体,通过酶切连接的方式构建1个酿酒酵母工业菌株的表达载体p-AKRX2-2。将该表达载体线性转化酿酒酵母后,测定转化子SUN-Ⅰ木糖醇脱氢酶(XDH)及其表达情况。与原始菌株相比,重组酿酒酵母中的XDH活力是原始菌株的3.65倍。该重组质粒载体的构建可有效弥补酿酒酵母缺少代谢木糖关键基因的缺陷,为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建奠定基础。     

专利

专利名称:酿酒酵母的耐受多种抑制剂的菌株专利申请号:CN201010192303.X公开号:CN101880636A申请日:2010.06.04公开日:2010.11.10申请人:天津大学本发明公开了一种酿酒酵母的耐受多种抑制剂的菌株,其命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YYJ003,保藏于中国微     

枸杞酒酿酒酵母的选育及其产香性能分析

酿酒酵母对酒的风味物质代谢具有重要作用。为获得适合枸杞酒发酵的酿酒酵母,该研究从枸杞汁自然发酵液和枸杞果表面筛选获得发酵性能优良的酿酒酵母11株。以市售酵母RV171、DV10、安琪SY和安琪RW作为对照,基于不同菌株发酵枸杞酒的理化性质和感官评价的差异,获得了酿酒酵母出发菌株Saccharomyces cerevisiae M-23。通过常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)对酿酒酵母M-23进行诱变,结合高通量筛选(high-throughput screening, HTS)技术,最终选育出酿酒酵母菌株M-23-7-14。采用气相色谱-质谱法对自酿枸杞酒和2种市售枸杞酒(健康快车、金色传杞)中的主要挥发性化合物进行定性和定量研究,并结合气味活性值(odor activity value, OAV)分析,评价不同枸杞酒的香气特征。结果表明,选育的酿酒酵母与市售酿酒酵母在发酵枸杞酒的基本理化指标上无显著差异,其中,选育获得的M-23-7-14与出发菌株M-23相比,枸杞酒的主要风味物质相对总量提高了37.0%,并...     

蓝莓果酒专用酵母的分离、筛选及鉴定

为筛选得到适合蓝莓果酒发酵的酵母菌株,对来自不用品种的蓝莓成熟果实、蓝莓叶及蓝莓果园的土壤进行筛选,共分离得到122株酵母菌;采用镜检和杜氏管发酵法初筛,产酒精能力、耐性能力复筛,并选用葡萄酒酿酒酵母(K酵母)对比,最终确定BBF-17为最优菌株。采用18S r DNA序列鉴定以及系统发育树分析,对选定酵母菌进行分子生物学鉴定,结果显示BBF-17与酿酒酵母(EU649672.1)最为接近,相似度达99%,该菌株鉴定为酿酒酵母。     

本土酿酒酵母与商业酵母混菌发酵特性研究

为研究优良本土酿酒酵母与商业酵母在混菌发酵中的发酵特性,以商业酿酒酵母UCD522和UCD2610为原始菌株,构建携带卡那霉素抗性基因(KanMX)的菌株UCD522K和UCD2610K,并在2种酵母可同化氮(YAN)质量浓度(55,433 mg N/L)下验证抗性标记不会影响酵母的发酵速度和细胞数量.在此基础上,将N...     

不同酿酒酵母发酵特性及抗氧化特性的比较

该文比较了不同来源的5株葡萄酒酿酒酵母(2株野生酿酒酵母CC17、SC5,2株实验室常用工程菌株BY4743、INVSC1,以及1株工业酿酒酵母菌株CICC1450)的生长曲线、泡沫产生能力、H2S产生能力、CO2产生能力,结果表明该实验室分离得到的野生酿酒酵母CC17具有良好的发酵特性.经不同浓度的氧化性物质H2O2和甲萘醌分别处理后得知,CC17在抗氧化性能上具有明显优势,说明该菌株在实际生产中具有开发利用的潜力.     

复合酵母在赤霞珠发酵过程中酵母菌相互作用研究

利用WL营养琼脂培养基对发酵过程不同阶段分离的菌株进行初步分类,结果表明,这些菌株分为5属8种:酿酒酵母(Saccharomyces serevisiae)、有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、克鲁维毕赤氏酵母(Pichia kluyveri)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis),假丝酵母(Candida)。对初步分类菌株进行26S r DNA D1/D2区扩增和测序,测序结果经Blast比对后证实,研究了这几种酵母在不同阶段的构成比,揭示了整个过程中酵母菌的生物多样性和不同菌种的动态变化。在此基础上选用interdelta分析对161株酿酒酵母进行菌株区分,结果显示,这些酿酒酵母可归为9个基因型。研究了这9个基因型在复合发酵过程中的菌株组成及变化,为利用降酸酵母降酸研究提供依据。     

稳定高效表达木糖还原酶基因工业酿酒酵母的构建及木糖醇发酵的初步研究

将树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶基因XYL1连接到适用于酿酒酵母工业菌株的多拷贝整合载体pYMIKP中,构建得到表达质粒pYMIKP-XYL1,转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces cerevisiae6508。在G418平板上筛选转化子,得到含高拷贝木糖还原酶基因的酿酒酵母重组菌株XGH2,,该菌株的木糖还原酶比活力为0.8 U/mg(蛋白),比出发菌株提高了80倍以上,表明外源基因在工业菌株中实现了高效表达。摇瓶发酵结果显示,重组菌株XGH2木糖消耗为27.9 g/L,木糖消耗率为51%;木糖醇产量为30.2 g/L,木糖醇的转化率大于1.0 g/g木糖。     

甘露聚糖对酿酒酵母菌株生长及抗氧化活性的影响

葡萄酒酿造是一个高糖、高酸、低pH的相对恶劣生境,且发酵产生的乙醇会影响酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞的生长与代谢。为探究甘露聚糖在酒精发酵过程中对酿酒酵母细胞活力及抗氧化代谢的影响,以添加不同质量浓度甘露聚糖的模拟葡萄汁为试材,动态检测酒精发酵过程中酿酒酵母菌株的生物量、细胞活力及抗氧化活性。结果表明,甘露聚糖在酿酒酵母菌株生长的全过程对细胞活力具有显著提升作用(P<0.05);与对照组相比外源添加甘露聚糖能够显著提高酿酒酵母细胞的三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase, ATPase)活性及细胞内还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)(P<0.05),可清除细胞内过量的活性氧(reactive oxygen species, ROS)、丙二醛(malondialdehyde, MDA),提高细胞的抗氧化能力。综合分析,外源添加质量浓度为300 mg/L甘露聚糖可以有效提升酿酒酵母细胞的活力及抗氧化活性。     

基因工程策略改造产油微生物酿酒酵母的研究

理性改造功能性油脂生产菌株,获得高油脂含量、高比例多不饱和脂肪酸(polymerase unsaturated fatty acids,PUFAs)及食品安全性的优良工程菌,将会为微生物功能性油脂的工业化生产注入新动力。产油微生物油脂积累过程中,苹果酸酶(ME)对油脂产量具有调控作用,其活性直接影响到胞内油脂积累的量。然而,功能性油脂天然生产菌株遗传操作体系不成熟,油脂积累调控机制不清晰,阻碍了对其理性改造的进程。针对于此,需选择遗传操作平台成熟、遗传背景清晰的酿酒酵母为对象,采用基因工程策略对酵母苹果酸酶编码基因(ME)进行敲除,构建苹果酸酶编码基因缺失的酿酒酵母菌株。后期研究中将功能性油脂天然生产菌株油脂积累调控途径中关键基因ME导入相应同源基因缺失的酿酒酵母中,为构建用于油脂积累机制分析的重组菌株打下基础。     

基于生物量产率的低产乙醇酿酒酵母的筛选

目的:建立一种从酿酒酵母突变库中快速筛选低产乙醇酵母菌株的方法。方法:以转录因子spt15随机突变酿酒酵母文库为研究模型,以高生物量产率作为低产乙醇酿酒酵母的筛选标记,利用24孔板对spt15突变酵母文库进行初筛。对初筛获得的目标菌株,以乙醇产量作为筛选标记进行复筛,最终获得乙醇合成能力较低且生物量较高的酿酒酵母菌株。结果:(1)利用易错PCR技术构建了spt15随机突变文库,并将其转化至酿酒酵母YS59,获得酿酒酵母YS59 spt15突变文库;(2)经初筛,获得14株生物量产率≥70%的酿酒酵母YS59 spt15突变菌株;(3)通过复筛,筛选出编号712的低产乙醇突变菌株,其乙醇合成量降低了28.1%;(4)通过序列比对,发现spt15-712上有9个碱基发生突变,分别是A161G,T426C,T462C,T493A,A506G,T546C,T622C,T658C,A750T9。结论:成功建立了一种高通量筛选低产乙醇酿酒酵母的方法 ,并利用这种方法筛选出乙醇合成量降低28.1%的低产乙醇突变菌株。     

草酰乙酸对酿酒酵母荔枝酒发酵中醋酸代谢的影响

以能同时利用可发酵性糖和乙酸的酿酒酵母为出发菌株,研究荔枝酒酿造过程中添加不同浓度的草酰乙酸(OAA)对酿酒酵母代谢醋酸的影响。结果表明:添加OAA对酿酒酵母代谢醋酸具有显著影响。添加OAA促使酿酒酵母表达较高的丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)、乙醛脱氢酶(ALDH)及乙酰辅酶A合成酶(ACS)的酶活性,产生较多的酒精和乙醛以及较少的琥珀酸、苹果酸和甘油,提高了酿酒酵母代谢醋酸的能力。添加0.8 g/L的OAA,酿酒酵母代谢醋酸的量比对照提高了60 mg/L。     

一种酿酒酵母多倍体系列菌株的构建及快速筛选方法

介绍了一种酿酒酵母多倍体系列菌株的构建和快速筛选的方法,即利用HO基因表达使酿酒酵母菌株交配型发生转变,通过相应菌株间的杂交构建酿酒酵母多倍体系列菌株,与已知交配型的酿酒酵母菌株杂交,显微镜观察杂合子,快速筛选得到多倍体菌株。PCR分析及DNA含量测定结果进一步表明得到的多倍体菌株是正确的。研究所采用的构建多倍体及快速筛选的方法快捷、可靠。     

常压室温等离子诱变筛选高产酯酶的菠萝蜜果酒酿酒酵母

该研究的目的是选育1株高产酯酶的酿酒酵母,通过增加菠萝蜜酒中酯类的含量提高菠萝蜜酒的香气质量。以菠萝蜜果浆自然发酵液中分离获得的1株产酯酶酿酒酵母CS31为出发菌株,利用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)进行诱变育种,通过酒精耐受性实验、杜氏小管产气实验及菠萝蜜果酒发酵性能实验进行初筛,检测菌株对不同碳链长度底物(C2、C4和C6)的酯酶活性进行复筛,选育出1株能顺利完成果酒发酵的高产酯酶突变菌株YB93。随后,通过比较突变菌株YB93和出发菌株发酵菠萝蜜果酒的香气成分,进一步验证该突变菌株的产香能力。结果表明,突变菌株YB93的酯酶(C2～C6)比活力均明显高于出发菌株CS31,其中YB93的最大的酯酶(C2)比活力(952.67 U/g)比CS31(764.32 U/g)高出24.64%。相对于出发菌株,经突变菌株YB93发酵的酒样总挥发性物质提高了34.28%,酯类物质提高了60.67%,有效地提升了果酒中果香和花香类化合物的含量,明显增强了菠萝蜜果酒的香气品质。此外,突变菌株YB93经鉴定为酿酒酵母(S...     

昌黎赤霞珠葡萄相关酿酒酵母的分离与筛选

以昌黎地区赤霞珠葡萄为样本,从中分离出5种酵母。通过菌落特征、菌体形态及赖氨酸培养基鉴定,初步确定其中4株为葡萄酒酿酒酵母。通过高浓度酒精(10%~18%)、高浓度SO2(100~400mg/L),高糖浓度(10%~60%)和高温(37、42℃)的耐受性实验,初步筛选出两株可耐受14%浓度酒精、300mg/L SO2、50%的葡萄糖浓度及42℃高温的菌株。与市售的两种酿酒酵母进行葡萄酒发酵实验,将所得酒样进行理化分析及感官品评,结果表明菌株a发酵力强,较市售酵母菌发酵后挥发酸含量低,残还原糖含量为0.40g/L,且葡萄酒感官评价最高。最终选出菌株a为赤霞珠葡萄酿酒酵母最佳菌株。     

新疆伊犁牧区发酵乳制品中酵母菌的分离和多样性分析

为保护新疆民族传统工艺制作的奶酪中经几千年驯化的优良酵母菌株,从新疆伊犁牧区少数民族家中采集样品20份,分离得到33株酵母菌,并对其进行生理生化鉴定、利用26S rDNA D1/D2区域序列分析对这些菌株进行了分类鉴定和多样性分析。共鉴定出4属5种,其中唐布拉牧区和那拉提牧区的优势菌株为发酵毕赤氏酵母(Pichia fermentans),托里县和布尔津县采集的样品中的优势菌种为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是奶酪样品中的共同菌株。     

酿酒酵母菌株的筛选与培养条件的优化研究

以实验室保藏的酿酒酵母为目标菌株，从生长条件、发酵能力的关键工艺因素进行研究分析，以提高菌株酿酒酵母的发酵力为目的，探究高发酵力酿酒酵母实验室最佳培养条件。为了确定酿酒酵母的最适培养条件，采用单因素试验及L₉(3³)正交试验研究影响酿酒酵母生长的关键因素，包括培养温度、培养时间及转子转速。结果表明优化的培养条件为培养温度30℃,转子转速150 r/min，培养时间20 h，培养条件优化后的发酵液发酵力为1.6269 U。     

4 株本土非酿酒酵母的发酵特性

对分离于我国3 个葡萄酒产区的葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）CVE-HU36、葡萄园有孢汉逊酵母（H. vineae）CVE-HV6、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）CVE-MP20和陆生伊萨酵母（Issatchenkia terricola）CVE-IT8共4 株非酿酒酵母菌株进行纯种发酵实验,以酿酒酵母BDX为对照,比较4 株非酿酒酵母的发酵和产香特点。结果表明,4 株非酿酒酵母菌株中CVE-HV6菌株生长能力最强、具有最大的发酵速率,并高产甘油和乙醇;CVE-HU36菌株合成乙酸能力最强;CVE-MP20菌株具有最低的乙醇产率;CVE-IT8菌株苹果酸产量较高。不同非酿酒酵母菌株的产香能力存在明显差异：CVE-HV6菌株产乙酸苯乙酯、苯乙醇和癸酸能力显著高于酿酒酵母和其他3 株非酿酒酵母,其中乙酸苯乙酯含量为酿酒酵母的3.04 倍;CVE-HU36菌株的β-香茅醇含量高于酿酒酵母（2.05 倍）和其他3 株非酿酒酵母;CVE-MP20菌株在5 株酵母菌中产乙酸乙酯和α-萜品醇能力最高,且高产异丁醇;CVE-IT8菌株高产辛酸和4-乙基愈创木酚。4 株非酿酒酵母具有不同的发酵性能和产香特性,综合来看,CVE-HV6菌株的酿造特性要优于其他3 株菌,在提升葡萄酒香气和改善品质方面具有较好的应用潜力。     

一株刺梨非酿酒酵母的分离鉴定、生理特性及混菌发酵研究

为获得适合刺梨果酒酿造的非酿酒酵母菌株,从刺梨自然发酵液中分离优质非酿酒酵母,通过形态学与26S rDNA序列分析来鉴定菌株;从葡萄糖耐受性、柠檬酸耐受性、酒精耐受性、二氧化硫耐受性、单宁耐受性、β-糖苷酶产生能力、硫化氢产生能力等方面分析菌株的生理特征;与酿酒酵母混合发酵刺梨果汁,从发酵刺梨果酒常规理化指标、感官品评以及香气物质方面探讨非酿酒酵母对刺梨果酒品质的影响。结果表明,利用赖氨酸筛选培养基从刺梨果实上筛选出80株非酿酒酵母,嗅闻法筛选出一株产香浓郁的菌株F13。形态学与分子生物学鉴定结果表明,F13为一株刺梨来源的葡萄汁有孢汉逊酵母;该菌株可耐受浓度为300 g/L葡萄糖、3%乙醇、3%柠檬酸、300 mg/L SO₂以及25 g/L单宁处理。但酒精耐受性和β-糖苷酶产生能力不及酿酒酵母X16。此外,F13菌株不产硫化氢。F13与酿酒酵母混合发酵可降低刺梨果酒的酒精度和挥发酸,增加残糖量,分别为11.1%±0.39%、(0.67±0.03)g/L、(20.41±1.44)g/L。F13不影响刺梨果酒的感官品评,但可有效增加刺梨果酒中醇类物质的种类和含量,降低酯类物质种类和含量。本研究从刺梨自然发酵液中得到一株非酿酒酵母F13,对酿酒环境具有较优的耐受性(耐糖、酸、酒精度、二氧化硫),具有一定的工业化应用潜能。     

酿酒酵母遗传缺陷型菌株化学转化方法研究

研究酿酒酵母遗传缺陷型菌株化学转化方法的目的是通过特定的手段,来改变转化条件,从而达到提高酿酒酵母遗传缺陷型DNA的转化率。为了充分发挥酿酒酵母遗传缺陷型菌株的作用,首先需要提高其转化率,为此,我们在针对酿酒酵母遗传缺陷型菌株化学转化方法时,可以以此为切入点,将对遗传缺陷型菌株的转化带来影响的元素进行解析,通过相应的处理方法降低这些元素对遗传缺陷型菌株转化率的影响,从而提高酿酒酵母遗传缺陷型菌株的转化率。