生物素—链霉亲和素免疫组化法检测脊髓灰质炎病毒抗体

应用生物素—键霉亲和素免疫组化法检测自然人群和服苗儿童63份血清中三型脊灰抗体IgG，同时与中和试验对比，阴阳性总符合率均在92％以上，抗体液度呈正相关。组化法不仅敏感性高于中和法，而且较中和法简便、快速。故适用于脊灰抗体检测。     

核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化

目的构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性。方法通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体p PIC9K,重组表达质粒p PIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,甲醇诱导表达CSA蛋白。利用硫酸铵沉淀、2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶亲和层析法纯化CSA蛋白,紫外光谱测定法检测CSA蛋白与生物素的结合活性。结果构建的CSA基因工程菌能有效表达目的蛋白,经硫酸铵沉淀、亲和层析两步法纯化后得到纯度约95%的CSA重组蛋白,其具有与生物素结合的活性,活性为13.6 U/mg。结论利用毕赤酵母表达系统能够有效分泌表达CSA蛋白,该重组蛋白具有良好的生物学活性,为CSA发酵产品的大规模纯化提供了依据。     

链霉亲和素-蛋白A融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将合链霉亲和亲-蛋白A（Streptavidin－proteinA）融合蛋白基因的表达质粒pTSAPA导入大肠杆菌BL21（DE3），成功地表达了该融合蛋白，经SIJS－PAGE及免疫印迹等方法证实该蛋白既具有IgG的结合活性，又具生物素结合活性。     

应用生物素—亲和素间接免疫荧光法检测支原体

应用生物素-亲和素系统导入间接免疫荧光法,对不同株的支原体进行了初步检测。结果生物素-亲和素间接免疫荧光法(ABS—IFA)比普通间接免疫荧光法敏感度高百倍以上。在ABS—IFA方法中,阳性支原体部位苹果绿染色明亮、清晰,而背景浅且较干净。     

生物素-亲和素-DNA纳米颗粒信号放大检测载体的构建

目的构建用于检测细菌、病毒等病原体DNA的生物素-亲和素纳米颗粒信号放大载体。方法设计并合成两端和一端标记生物素的寡核苷酸探针(2B/1B-DNA),与抗生蛋白链菌素葡聚糖(Poly-STV)通过生物素与亲和素作用,偶联形成大分子纳米网状颗粒,并筛选最佳探针类型及其长度、2B-DNA和Poly-STV的浓度及比例和反应条件。结果2B-DNA和Poly-STV形成纳米颗粒信号放大载体的最佳浓度分别为1μmol/L和5μmol/L,最佳浓度比为1∶5,2B-DNA长度为60bp,缓冲液为Buffer B,反应条件为55℃,800r/min,20min。结论已成功构建了生物素-亲和素大分子纳米颗粒,可作为DNA检测信号放大技术的备选载体。     

以多肽为抗原的HIV ELISA检测试剂的影响因素分析

目的：探讨以化学合成多肽为抗原的HIV ELISA检测试剂制备过程中的影响因素。方法分别采用链霉亲和素、牛血清白蛋白偶联剂偶联HIV多肽抗原后包被经紫外线处理或未经紫外线处理的酶标板,同时检测HIV阳性、阴性标本,阳性血清OD＞1.0,阴性血清OD＜0.1为检测成功,分别重复24孔,计算成功率。结果链霉亲和素偶联的HIV多肽抗原包被经紫外线处理后的酶标板成功率最高,为100.0%（48/48）,且显色本底最低。结论采用链霉亲和素偶联HIV多肽抗原及紫外线预处理酶标板对提高检测效果具有很大的帮助。     

蛇床子素结构修饰物JS-B对辣椒疫霉生物活性

对蛇床子素结构修饰物JS-B的生物活性进行了研究.室内生测结果表明:JS-B对辣椒疫霉菌丝干重和游动孢子萌发的抑制中浓度(EC50)分别为43.74、86.03 mg/L.盆栽试验表明:JS-B处理对辣椒疫病有一定预防和治疗效果.根系对JS-B具有一定的吸收性,1000 mg/L JS-B灌根处理,防效达67.16%.用400 mg/L的JS-B喷雾处理辣椒幼苗,分别在施药后1、3、8 d接种辣椒疫霉的游动孢子,其对辣椒疫病的防效分别为71.95%、61.90%和66.72%,与阳性对照药剂烯酰吗啉相当,说明JS-B在防治辣椒疫病中具有一定的持效期.     

绿色木霉木聚糖酶在燕麦木聚糖上的亲和吸附和解析

研究了液相环境对绿色木霉木聚糖酶在水不溶性燕麦木聚糖上的亲和吸附及木聚糖酶―木聚糖复合体的解吸的影响。结果表明,燕麦木聚糖对木聚糖酶的亲和吸附作用主要依赖于它们之间的静电作用和氢键作用,疏水作用对吸附没有贡献。以pH3.0的柠檬酸―柠檬酸钠缓冲溶液为吸附体系的液相时,每克燕麦木聚糖的最大吸附容量为77IU的木聚糖酶。用含0.025mol/LNaCl、pH为7.0的柠檬酸―磷酸氢二钠缓冲溶液作为洗脱液,能将96%的被吸附的木聚糖酶洗脱下来,此时木聚糖酶活回收率为74.3%。     

百日咳毒素、丝状血凝素和黏附素的纯化

目的采用新型层析介质对无细胞百日咳疫苗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamen-toushemagglutinin,FHA)和黏附素(pertactin,PRN)3组分进行分离纯化。方法调整PT和FHA发酵液上清的pH值和电导后,PT经Capto SP ImpRes和Capto MMC进行两步层析,FHA经Capto SP ImpRes进行一步层析;PRN热处理原液经Capto Adhere和Capto SP ImpRes进行两步层析。纯化产物经4%～12%NuPAGE进行鉴定,ImageQ分析纯度;LC-MASS(Thermo LTQ Velas)进行蛋白质的质谱检测;PT和FHA经BiaCore T200进行定量分析,并计算各步回收率。结果纯化后,无细胞百日咳疫苗3组分纯度均达95%以上;PT和FHA的总回收率均在30%左右;电泳图谱上的各组分条带经LC-MASS鉴定,均与Uniprot Bordetella pertussis数据库数据高度同源。结论采用新型层析介质有效纯化了无细胞百日咳疫苗PT、FHA和PRN,提高了抗原纯度,大大缩短了生产时间。     

虫草素发酵、纯化及产业化研究新进展

近几年,通过国内外学者的共同努力,虫草素在其产量、分离纯化技术方面取得了较大进展。本文对高产虫草素的生产方法及分离纯化技术的最新研究进展进行系统概述,并总结虫草素产品开发现状,旨在为中国虫草素的快速产业化提供指导。     

Production, Purification and Partial Characterization of Four Lipases from a Thermophile Isolated from Deception Island

Four lipases were purified from ID17, a thermophilic bacterium belonging to Geobacillus genus isolated from Deception Island, Antarctica. Lipase activity was detected by opacity test and p-nitrophenyl laurate methods. Lipase production was better in a medium containing tryptone as the carbon and nitrogen source, without non-ionic detergents and pH 7.5. Proteins were ultrafiltered from supernatant and separated using anion exchange and size exclusion chromatography resulting in four distinct fractions with lipase activity (called Lip1–4). Purified lipases showed an optimal pH at 9.0, 9.5, 10.0 and 8.0 and temperature at 65, 70, 75 and 80 °C for Lip1–4, respectively. Lip1 and Lip2 showed higher activity using p-nitrophenol decanoate as substrate, whereas Lip3 and Lip4 prefer p-nitrophenol laurate. Based on their molecular weight Lip1 and Lip2 are trimeric and pentameric proteins, respectively, whereas Lip3 and Lip4 are monomeric proteins. Lip1 was exceptionally thermostable maintaining 70 % of its activity after incubating it at 70 °C for 8 h. Based on their characteristics, the four lipases obtained from ID17 are good candidates to understand the mechanisms of lipase stability and to be used in different types of industrial applications.     

免疫抑制酸性蛋白的分离纯化及鉴定

采用卵巢癌腹水为原料，经盐析、DEAE－52、SephadexG100、等电聚焦电泳，Sepharose4B反相免疫亲和层析技术，分离纯化出免疫抑制酸性蛋白（IAP）纯品，经8．0％聚丙烯酰胶凝胶电泳、免疫电泳和双向免疫交叉试验，证实其为单一成分；用此抗原免疫家兔，获得了IAP抗血清，其效价为1：32。     

Isolation of Endogenously Assembled RNA-Protein Complexes Using Affinity Purification Based on Streptavidin Aptamer S1

Efficient isolation of endogenously assembled viral RNA-protein complexes is essential for understanding virus replication mechanisms. We have developed an affinity purification strategy based on an RNA affinity tag that allows large-scale preparation of native viral RNA-binding proteins (RBPs). The streptavidin-binding aptamer S1 sequence was inserted into the 3′ end of dengue virus (DENV) 5′–3′ UTR RNA, and the DENV RNA UTR fused to the S1 RNA aptamer was expressed in living mammalian cells. This allowed endogenous viral ribonucleoprotein (RNP) assembly and isolation of RNPs from whole cell extract, through binding the S1 aptamer to streptavidin magnetic beads. Several novel host DENV RBPs were subsequently identified by liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), including RPS8, which we further implicate in DENV replication. We proposed efficient S1 aptamer-based isolation of viral assembled RNPs from living mammalian cells will be generally applicable to the purification of high- and low-affinity RBPs and RNPs under endogenous conditions.     

油茶皂甙提纯分离和结构鉴定方法综述

总结了国内外有关油茶皂甙的研究概况 :1)油茶皂甙的提取方法 ;2 )纯化方法 ;3 )分离方法 ;4)结构及鉴定方法。     

大鼠血纤溶酶原的纯化和鉴定

以大鼠血清为原料,采用硫酸按盐析法,Lysine－Sepharose4B、Red－SepharoseCL6B和SephadexG150层析法,分离提纯了大鼠血纤溶酶原（Plasminogen,PGn）。利用尿激酶依赖的酶谱分析法鉴定其酶原的生物活性,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）对其纯度和分子量分析。结果表明纯化得到的为90kDa的单一组分的纤维蛋白溶酶原。这种纯化方法的建立为进一步大量制备PGn奠定了基础。     

凹凸棒石黏土的提纯及其纯度表征

在质量分数不超过15%的凹凸棒石黏土浆料中加入质量分数为3.5%的焦磷酸钠为分散剂,可以使浆料的黏度降至最低,此时可以最有效地去除凹凸棒黏土中的蛋白石(Si O2)杂质,以达到最佳提纯的效果。在提纯凹凸棒石黏土XRD衍射图中,提纯蛋白石的特征曲线几乎不可见,微结构中也见不到游离的Si O2颗粒。X射线荧光检测结果表明Si O2含量由提纯前的56.94%降至提纯后的38.44%,提纯后凹凸棒石黏土的吸附水的能力提高38%。     

乙醇胺的反应与分离技术

介绍了乙醇胺的生产和分离技术.建议国内企业新建乙醇胺装置的规模必须在40kt/a以上,同时要加强技术开发,提高产品质量,并进行下游产品的应用研究.     

巴斯德梭菌甘油脱水酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质的研究

用聚合酶链反应(PCR)技术,从巴斯德梭菌(C lostridium pasteurianum)扩增出甘油脱水酶基因(dhaBCE),在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳结果显示,分别有相对分子质量为66、21、16 kD三条特异性蛋白表达条带。用金属镍亲和层析及S-300H凝胶层析将重组蛋白进行分离纯化,所得纯酶的比活为4.26 U/mg。重组酶的最适反应温度42~44℃,最适作用pH=9.10~9.50,它对三个底物结构类似物的米氏常数(Km)值分别是:1,2-丙二醇0.38 mmol/L,甘油0.29 mmol/L,1,2-乙二醇2.0 mmol/L;对辅酶B12的Km值为0.22μmol/L。     

大肠杆菌L- 天冬酰胺酶的分离纯化及其特性

目的 建立简单有效的L- 天冬酰胺酶分离纯化工艺，研究L-天冬酰胺酶的特性。方法 采用冷丙酮破壁处理，经稀碱液抽提、离子交换层析和亲和层析进行纯化。通过温度试验、pH试验、SDS－PAGE图谱、紫外吸收光谱等研究酶的特性。结果 建立了简单高效的纯化工艺，可使L-天冬酰胺酶的纯度达94．4％，比活为520u/mg蛋白，总收率为65．7％。L-天冬酰胺酶的相对分子质量分别为143900和166700，均为有抗癌活性的EC－2组分，在270nm有最大吸收。最适作用温度为40－50℃，最适作用州为8.0-9.0在40℃以下能保持稳定。结论建立了大肠杆菌L-天冬酰胺酶的分离纯化工艺，并研究了L-天冬酰胺酶的酶学特性。     

制甲醇焦炉气的净化工艺

山东兖矿国际焦化有限公司利用已停产的德国凯泽斯图尔焦化厂设备，建设年产2000kt焦炭装置，同时利用焦炉生产的剩余焦炉气配套建设生产能力为236．5kt／a的甲醇装置。