水稀释硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体

以人的免疫球蛋白G1(IgG1)为抗原对无特定病原体(SPF)级来航鸡进行免疫,在34周内采集血清并收集所产鸡蛋,采用水稀释硫酸铵盐析法从鸡蛋卵黄中纯化得到了抗人IgG1的鸡卵黄抗体(IgY),测定了纯化工艺中每一步的蛋白收率,并对免疫周期内不同时间卵黄中抗体的质量浓度、亲和能力及特异性进行了考察。结果显示蛋白总收率为4.90%,其中超滤和沉淀是影响总收率的主要因素;血清和卵黄中抗体的质量浓度在第22—23周达到最大值;亲和常数在第8周达到最大,为1.1×109L/mol;IgY抗体与其他种属的IgG抗原不发生结合,是一种高特异性的抗体。该纯化方法不仅能够制备出纯度很高的抗体,而且工艺简单、经济,易于大规模生产。     

防龋卵黄抗体的研制

应用本室构建的龋齿疫苗工程菌株及 GTF抗原免疫母鸡 ,取鸡卵黄以水 -硫酸铵 -离子交换层析法提取纯化蛋黄抗体 (Ig Y ) ,以放免法测定血清及蛋黄中的抗体。结果用上述 2种抗原免疫的鸡 ,在血清及蛋黄中均能检出抗 GTF抗体。提纯的蛋黄抗体 ,经 SDS- PAGE电泳检测 ,相对分子质量约为 2 2 0 0 0 0 ,纯度达到 97.9% ,经 2 -巯基乙醇处理后 ,分为重链和轻链 ,相对分子质量分别约为 76 0 0 0和 2 80 0 0。经免疫印迹分析 ,具有良好的免疫学特异性。     

鸡卵黄抗体(IgY)的诱导

目的　获得鸡卵黄抗体（Ｉｇｙ）,并研究该抗体在鸡的黄液中表达的进程。方法　用吗啡—牛血清蛋白 结合物为模型抗原对３０周龄产蛋鸡进行免疫诱导,用ＥＬＩＳＡ间接法测定不同时间的抗体滴度。结果全程免疫过 程中白蛋白抗体最高滴度为１：１２８００,吗啡抗体最高滴度为 １：１６００,经 ５次免疫后（４２周龄）抗体滴度不再升高。结论　为使目的抗体在鸡卵黄液中持续而高质量诱导奠定基础。     

抗胃癌基因产物的IgY抗体的研究

将人胃癌细胞系MGC803细胞中,由癌基因编码的P_(110)蛋白提纯作为抗原免疫产卵母鸡,从该鸡所产卵的卵黄中提出一种对人胃癌具有特异性的IgY抗体。该抗体与人胃癌组织的免疫组化反应率为80％,明显高于其他癌组织及正常胃组织。将该抗体与蓖麻毒素A链交连成IgY-Riein A,分别攻击培养中的人胃癌及其他癌细胞,结果IgY-RicinA对人胃癌细胞的TCID_(50)为0.01mg/ml,明显低于其他癌细胞。表明所制备的IgY是一种较好的抗肿瘤多克隆抗体。     

重组(酵母)乙型肝炎疫苗接种母鸡的体液免疫应答

<正>近年来,对鸡抗体研究较多,现已证明用病原体免疫母鸡可诱发机体产生特异性抗体,但用重组酵母乙肝疫苗刺激母鸡诱发免疫应答的研究还未见报道。为此本实验采用重组酵母乙肝疫苗免疫母鸡,观察其血清特异性抗体变化及其诱发体液免疫应答水平及免疫应答持久性。 首次免疫用乙肝疫苗10μg/只鸡（美国海南鸡）加福氏完全佐剂,经背部皮下多点及鸡翅下注射,后用同剂量疫苗加福氏不完全佐剂加强,每次免疫间隔2～3周,共加强免疫4     

抗氯霉素卵黄抗体的制备及其分离纯化

将合成的氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物(CAP-BSA)作为免疫抗原注射到母鸡体内得到氯霉素卵黄抗体(IgY). 比较了不同的提取方法,用优化的辛酸-硫酸铵沉淀法从卵黄液中初步提取卵黄抗体. 选用3,3￠-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的"间隔臂",合成了分离纯化抗氯霉素特异性IgY的亲和层析柱. 将IgY粗品经过亲和层析柱,得到的特异性IgY的抗体活性提高了10倍,收率约为3.3%.     

抗轮状病毒IgY的研制

目的用鸡卵黄制备抗轮状病毒（ＲＶ）免疫球蛋白,预防和治疗婴幼儿ＲＶ感染。方法制备ＲＶ 抗原,通过不同途径免疫母鸡,几种纯化方法联合应用从鸡卵中提取特异性鸡卵黄抗体（ＩｇＹ）,进行理化学检定及动 物效力实验。结果免疫母鸡均可产生特异性ＩｇＹ,纯度可达９１％以上,产量为４４ｍｇ／蛋;可保护乳鼠兔受ＲＶ攻击; ＩｇＹ耐热、耐酸,室温保存半年、４℃两年效价不变。结论已成功地应用ＲＶ免疫母鸡制备出高效价特异性抗ＲＶ－ＩｇＹ。     

禽流感病毒抗原-抗体复合物的制备及其免疫原性

目的制备禽流感病毒抗原-抗体复合物,并检测其免疫原性。方法以H5亚型禽流感病毒的HA蛋白为抗原,其病毒的高免卵黄为抗体,将抗原与抗体按不同比例混合,制备禽流感病毒抗原抗体复合物。免疫1日龄SPF仔鸡,进行保护力试验;于免疫后不同时间检测血清HI抗体水平,并与H5亚型油乳剂灭活疫苗进行比较。结果抗原与抗体比例为1∶0.6的抗原-抗体复合物在免疫仔鸡15d后,其诱导的平均抗体水平达6.5log2,与H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(6.2log2)相比,差异无统计学意义;在等量病毒攻击后,二者对仔鸡的保护率相同(93.3%)。结论制备的禽流感病毒抗原-抗体复合物具有良好的免疫原性,为研制禽流感新型复合物疫苗提供了依据。     

化脓隐秘杆菌溶血素和铁结合蛋白的抗体应答分析

目的 对化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes）溶血素（pyolysin,PLO）和铁结合蛋白（iron-binding protein,IBP）的抗体应答情况进行分析。方法 采用腹腔注射途径建立化脓隐秘杆菌小鼠感染模型,观察不同剂量细菌对小鼠的致死性和注射部位形成的组织病变。制备化脓隐秘杆菌灭活抗原,采用肌肉注射途径免疫45只雌性昆明小鼠和10只山羊,每只小鼠0.2 mL,每只山羊1 mL,均进行3次免疫,每次间隔2周,第3次免疫后2周采血分离血清。采用ELISA法测定感染小鼠、健康圈养羔羊、化脓隐秘杆菌灭活抗原免疫小鼠和山羊血清中抗PLO和IBP的IgG抗体水平。结果 注射部位出现化脓和皮肤坏死的小鼠血清中能检出高水平的抗PLO和IBP抗体;无组织病变小鼠血清中仅能检测到低水平的抗IBP抗体;连续注射无组织病变剂量细菌的小鼠血清能检出抗PLO和IBP抗体。圈养羔羊血清抗PLO抗体阳性率高,而抗体水平低。免疫小鼠和山羊血清中均能检出抗IBP抗体,但部分动物检测不出抗PLO抗体。结论 IBP是化脓隐秘杆菌感染和灭活疫苗免疫诱导抗体应答的主要抗原之一,PLO抗体水平具有反...     

灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果

目的评价灭活轮状病毒(rotavirus,RV)与灭活肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠,同时设单价疫苗组,均经小鼠腿部肌肉注射,隔2周免疫1次,共2次,分别于每次免疫后2周,经小鼠尾静脉采血,分离血清,经56℃灭活30 min后,采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14 d,各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50%~67%,中和抗体效价为2.2~2.8,加强免疫后14 d,抗体阳转率达100%,中和抗体效价为28.5~35.9。初次免疫后14 d,各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83%~100%,中和抗体效价为4.0~7.1,加强免疫后14 d,中和抗体阳转率达100%,中和抗体效价为25.4~71.8;联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义(P0.05);RV和EV71抗原量按160/160 EU配比时,可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论 RV与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答,抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关,未发现两种抗原间有协同或拮抗作用。     

IgY抗体对幽门螺旋菌菌体抗原细胞毒活性的中和作用

以超声震荡及高速离心法裂解空泡毒素基因阳性 (VacA+ )HP临床分离株 ;采用Hela细胞体外培养法分析此HP菌体蛋白的细胞毒活性及其免疫产卵母鸡制备的IgY抗体的保护作用。HP菌体抗原制备物经SDS PAGE显示至少有十余个蛋白区带 ,主要区带位于约 940 0 0和 6 70 0 0。以此HP菌体抗原包被的ELISA显示 ,球部溃疡患者血清IgG抗体滴度明显增高。体外培养中HP菌体蛋白制备物对Hela细胞具有明显的细胞毒活性 ,LD50 小于 12 μg/ml。以此抗原免疫产卵母鸡 ,提取的IgY抗体浓度依赖地阻断HP菌体蛋白的Hela细胞毒活性 ;提示局部应用抗体制剂做被动免疫 ,有可能成为治疗HP感染性疾病的有效方法     

幽门螺杆菌全菌抗原对母鸡的免疫原性

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)全菌抗原的免疫原性及Anti Hp IgY的预防和治疗作用。方法　用超声Hp波粉碎的Hp抗原免疫产蛋母鸡 ,通过IHA和ELISA间接法检测母鸡的免疫应答。用SDS PAGE分析Hp全菌抗原 ,并用抗Hp IgY做免疫印迹。结果　母鸡免疫成功率为 10 0 %。初免 45d后 ,抗Hp IgYIHA效价为 1∶10 2 4,ELISA效价超过 1∶45 0 0 0。Hp抗原的SDS PAGE显示有 2 6条蛋白染色带 ,其中主带有 10条 ,免疫印迹表明Hp的超声粉碎物特异性抗原蛋白带相对分子质量为 70 0 0 0、6 6 0 0 0、42 0 0 0、3430 0、2 95 0 0、2 70 0、185 0 0。结论　本研究为工业化制备抗Hp IgY奠定了基础     

抗急性非淋巴细胞白血病M_5型单克隆抗体研究

用急性非淋巴细胞白血病(急非淋)M_5型白血病相关抗原免疫 BALB/C 小鼠,取免疫鼠脾细胞与 NS-1骨髓瘤细胞融合,建立了2株能稳定分泌抗急非淋 M_5型白血病抗体的杂交瘤株。所分泌的单克隆抗体与急非淋 M_5型白血病有反应,与其他型白血病没有交叉反应,具有很好的特异性。CFU-GM 培养结果对骨髓造血干细胞没有影响。     

酿酒酵母钙通道膜蛋白单克隆抗体制备及鉴定

以酿酒酵母电压门控钙通道膜蛋白（Cch1p）、牵张敏感性钙通道膜蛋白（Mid1p）和瞬时受体电位钙通道膜蛋白（Yvc1p）为研究材料，制备其单克隆抗体。采用生物信息学方法确定3种膜蛋白抗原表位，根据分析结果克隆抗原基因，并进行原核表达和表达产物分析鉴定，通过Ni²⁺-NTA树脂亲和层析技术获得重组抗原蛋白，免疫小鼠后细胞融合技术制备单克隆抗体，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测抗体效价，免疫印迹技术检测单克隆抗体对重组纯化抗原和天然酿酒酵母钙通道膜蛋白的反应性和特异性。生物信息学分析结果表明，Cch1p、Mid1p和Yvc1p抗原表位可能分别位于1~300位氨基酸残基、359~548位氨基酸残基、1~236位氨基酸残基；克隆目的基因条带大小分别为926bp、570bp和708bp，与预期结果一致；原核表达抗原蛋白分子量分别为60000、25000和30000，Western blot检测条带正确；重组纯化抗原免疫BALB/c小鼠，细胞融合技术制备单克隆抗体，ELISA检测显示单克隆抗体效价分别高达1∶256000、1∶128000和1∶64000，Western blot检测到3种重组纯化抗原和天然酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p。这些结果说明本文制备的单克隆抗体可以成功用于检测酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p表达的相关研究。     

鸡卵抗体(IgY)理化特性的研究

本文研究了抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型鸡卵抗体（IgY）的理化特性，实验证明IgY在室温条件下能保持活性6个月，经巴氏消毒后抗体活性不丧失，并且具有很好的耐酸性，研究结果提示特异性IgY可作为良好的婴幼儿食品添加剂。