百日咳疫苗血清学效力试验与小鼠保护力试验结果的相关性

目的 了解百日咳疫苗血清学效力试验（ＰＳＰＴ）与小鼠保护力试验（ＭＰＴ）结果的相关性,为该法替代ＭＰＴ积累资料。方法 用不同剂量的ＤＴＰ疫苗免疫小鼠,４ｗ后采血,用ＥＬＩＳＡ测定小鼠血清中抗百日咳菌表面 抗原的总抗体滴度。用平行线法计算疫苗的效力,与ＭＰＴ测定结果进行相关性分析。结果１５批疫苗分别用 ＰＳＰＴ和ＭＰＴ法测定的效力单位相关性显著（ｒ＝ ０．９３５８,ｐ＜０．００１）,二者差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。与 ＭＰＴ法相 比,ＰＳＦＦ法有更高的重复性,而且９５％可信限较小。结论ＰＳＰＴ法有望取代ＭＰＴ。     

麻疹乙脑二联活疫苗对小鼠的保护力试验

在研制联合疫苗时，应考虑不同种型疫苗抗原同时注入机体后，其免疫应答反应是否存在相互干扰现象。作者将最近试制的麻脑二联活疫苗，用小白鼠效力试验，检测二联疫苗中乙脑疫苗对小鼠的保护力。以观察麻疹病毒对乙脑疫苗的免疫反应是否存在干扰作用。方法：按现行规程制备麻疹和乙脑活疫苗原液，检定合格后按适当配比混合，加人保护剂冻干制成麻脑二联活疫苗，测定乙脑滴度为7O～73Log＊＊U／（；麻疹病毒液度为40～“2引。（。g－【＊1o／ml；对照苗乙脑的价滴度为6．2。～7．35logPFU／n。l。二联苗与同批乙脑对照苗同时进行效力试验…     

评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验条件的优化

目的优化评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验(Opsonophagocytic assay,OPA)的条件。方法参考美国阿拉巴马大学的WHO指定实验室于2007年1月发布的A.02版实验规程,优化OPA的试验条件。分别以抗性和非抗性肺炎链球菌菌株作为靶细菌检测其对应型结合物受试血清的调理吞噬效价后,再与相应的ELISA效价比较,分析二者的相关性。结果 0.8%二甲基甲酰胺(DMF)诱导HL-60细胞分化4d后,细胞表面标志表达量分别为:CD11b和CD35≥55%、CD71≤15%,活细胞比例≥65%;各型肺炎链球菌工作种子批的复活率≥80%;补体的非特异性杀伤率为18%;各血清型均表现出良好的杀菌活性,且OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价比较,相关系数和斜率非常接近。结论优化的OPA条件符合该试验要求,可用于肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的效力评价。     

应用不同维持液对狂犬病疫苗效力的影响

<正> 为了提高狂犬病疫苗的效价,我们将过去使用的7种氨基酸(Sm_1)维持液,改为199营养液并补加适量人白蛋白,经生产实践证明效价明显提高。对3个生产周期的效力试验结果,经统计分析表明,199营养液明显优于sml(x~2=233,P<0.001),人白蛋白含量增加可明显提高疫苗效价,92年效价比91年明显提高(x~2=82.4,P<0.001),详见附表。     

人凝血因子Ⅷ浓缩物二期法的结果处理

应用二期法测定人凝血因于’浓缩物的效价，其结果处理用作图法，比较繁琐且人为因素影响较大。即使是同一结果，由不同人作图也有差异。根据二期法是用因子见标准品作对照，平行测定样品的原理。我们用三点平行线量反应法公式进行计算，代替作图法。对36次计算结果经统计学处理，二法计算结果的符合率为98．95％。三点法公式如下：标准品的剂量为ds1、ds2、ds3；供试品的剂量为dT1、dT2、dT3；Pn代表标准品的效价；PT代表作品的效价。作品稀释度该公式在二期法测定中，应注意V值的变化。此处的v值不同于其它样品中的V值。在计算因子啊…     

应用改良抗体结合试验(ABT)方法检测狂犬病疫苗效力

目的 应用改良抗体结合试验（ＡＢＴ）方法在体外快速测定狂大病疫苗效力。方法 将定量的狂犬 病毒中和抗体与疫苗样品进行结合，将剩余的中和抗体的滴度用快速荧光灶抑制试验（ＲＦＦＩＴ）进行测定，然后计算 待测疫苗的效价，并与传统的ＮＩＨ效力试验结果进行比较。结果ＡＢＴ与传统的ＮＩＨ效力试验的结果有良好的相 关性，而且快速、经济，重复性高。结论 该方法在大多数情况下可取代ＮＩＨ效力试验。     

重组牛碱笥成纤维细胞生长因子国家标准品的研制

目的 建立效价测定用的重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）国家标准品。方法 按WHO有关要求制备标准品,分装、冻干后进行,以bFGF国际标准品为标准进行协作标定。结果 经验测外观、无菌实验合格,水分为0.99%,于－20、4和25℃条件下放置3个月其生物活性稳定。该标准品经3家实验室协作标定,共23次测定,平均效价为6971 IU／支。实验均数的95％可信区间为6266－7753 IU／支,单次实验的95％参考值范围为3394－10965IU／支,平均可信限率为10.995%。结论 该批重组牛bFGF国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,效价定为7000IU／支,批号为01／96。     

重组人表皮生长因子生物活性国家标准品的研制

【摘 要】目的 建立测定重组人表皮生长因子（rhEGF）活性用国家标准品。方法 按WHO有关要求，制备并检测标准品，以EGF国际标准品为标准进行协作标定。结果 冻干EGF标准品经外观、无菌、水分检测均符合规定，在-20、4、25和37℃保持33个月生物活性稳定，协作标定几何平均效价为6823IU/支。实验均数的95％可信区间为5958～7812IU/支，单次实验的95％参考值范围为2241～12056IU/支，平均可信限率为14．64％。结论 该批EGF标准品可作为国家标准品，效价定为6800IU/支，批号为97/01。     

短期异常低温对重组乙型肝炎疫苗效力相关因素的影响

目的模拟重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗在冷藏存储过程中发生的异常低温情况,探讨短期异常低温储存对乙肝疫苗效力相关因素的影响。方法选取3个不同表达系统(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)来源的乙肝疫苗,分别于0、-7、-20℃储存1或7 d,检测疫苗的吸附完全性、上清中铝离子含量、效价和体外相对效力,比较乙肝疫苗经短期异常低温储存后与2~8℃正常储存条件下的差异。结果经短期异常低温储存后,疫苗的吸附完全性、疫苗上清中铝离子含量未发生变化;3种乙肝疫苗的ED50在0.16~0.68μg之间波动;汉逊酵母乙肝疫苗体外相对效力的变化幅度不超过10%,酿酒酵母乙肝疫苗在-20℃冻存7 d后相对效力较2~8℃储存下降21.8%。结论短期异常低温储存后,乙肝疫苗仍能保持较好的吸附完全性,非胶体状态铝含量未发生变化,疫苗效价和体外相对效力在部分异常储存条件下出现下降,但仍符合质量标准要求。     

浅谈化学检测实验室内部比对实验方法及结果评价

介绍了化学检测实验室内部比对实验的几种常用方法，并对内部比对实验的评价方法进行了较为系统的研讨。样品标准值无置信区间时，可选择检测方法的再现性限进行评价；样品标准值的不确定度已知时，可采用E值进行评价；有2组测定数据，每组数据有多个平行测定结果时，可使用t检验法进行评价；对于多组测定数据，每组数据有2个平行测定结果时，可用z比分数法进行评价。     

PELA-OmpK微球疫苗的部分特征及其对鲫鱼的口服免疫效果

目的研究聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide-co-polyethylene glycol,PELA)包裹哈维弧菌(Vibrio har-veyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK制备的微球疫苗的部分特性及其对鲫鱼(Carassius auratus gibelio)的口服免疫效果。方法用可生物降解的合成高分子材料PELA,通过乳化溶剂挥发法包裹OmpK,制备微球疫苗,Bradford法测定蛋白浓度,计算蛋白包裹率;通过扫描电镜观察微球粒径大小及其在4℃保存不同时间的形貌。取鲫鱼随机分为3组:微球疫苗组、OmpK蛋白组和空白对照组,前两组采用疫苗或蛋白拌饲投喂方式口服免疫,投喂3 d,间隔7 d,再投喂3 d加强免疫;对照组投喂不含疫苗的饲料。加强免疫4周和8周后,经腹腔注射20 LD50的Vh EcGS020802株攻击,记录各组鱼死亡数,计算相对免疫保护率。结果制备的PELA-OmpK微球疫苗中OmpK蛋白的包裹率达78%。微球粒径小于12μm,且90%微球的粒径小于5μm。4℃保存10 d微球表面光滑、圆整;保存30 d PELA微球降解,粒径较大的微球表面出现空洞;保存60 d可见大量碎片,微球表面毛糙松散,出现多个空洞。微球疫苗加强免疫鲫鱼4周和8周后,对活菌攻击的相对免疫保护率分别为70%和48%,而口服OmpK蛋白组和空白对照组鱼全部死亡。结论用PELA包裹裸疫苗制备成微球疫苗,对抗原具有一定的保护作用,PELA用作鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。     

流行性乙型脑炎活疫苗流行病学效果观察

1991年对58645名1～7岁儿童进行了乙脑活疫苗流行病学效果观察,接种乙脑活疫苗组29639人,发生乙脑2例,发病率为6.75/10万;未接种组29006人,发生乙脑46例,发病率158.59/10万,二者差异显著(x~2=39.49,P<0.005),疫苗当年保护率95.74％、保护比1:23.49,高于国内灭活疫苗报告的结果,同时,活疫苗对病情的轻重和转归有良好的影响.而且使用简便安全。     

白介素-2佐剂狂犬病疫苗的免疫学效果

目的研究白介素-2佐剂狂犬病疫苗的免疫学效果。方法将人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗原液与基因工程白介素-2按一定比例混合,制成白介素-2佐剂狂犬病疫苗,另将疫苗原液加氢氧化铝,制成铝佐剂狂犬病疫苗。将白介素-2佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗分别于0、7d经腹腔免疫昆明小鼠,0.5ml/只,并在免疫前和免疫后4、6、10、17、2、31、45和59d,眶静脉采血,用快速免疫荧光灶抑制试验检测小鼠血清中和抗体。同时于0、7d经腹腔免疫BALB/c小鼠,0.5ml/只,第15天取脾检测淋巴细胞转化率。结果白介素-2佐剂疫苗与氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗淋巴细胞转化率差异均有显著意义。与铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗相比,白介素-2佐剂疫苗诱导产生中和抗体的时间早,抗体滴度高。结论白介素-2佐剂狂犬病疫苗具有良好的免疫学效果。     

应用统计分析和化学动力学参数评价生物制品的稳定性

目的应用统计分析和化学动力学参数评价生物制品的稳定性。方法以重组乙型肝炎疫苗为例,拟合其效力随时间衰减的回归直线,由其95%置信曲线预测制品的有效期。根据阿伦尼乌斯方程,从较高温度下效力衰减的速率常数估算较低温度下的速率常数。由衰减速率常数计算制品的半衰期,并用于稳定性评估。结果通过对稳定性数据的统计分析能预测有效期和失活速率常数等化学动力学参数能有效地反映制品稳定性的变化。结论应用统计分析和化学动力学参数研究生物制品的稳定性,可以在设定的置信区间下预测制品的有效期,缩短临床前稳定性研究所需的时间,并对生产变更可能导致的稳定性变化进行可靠的评估。     

重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品的研制

目的制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,用于重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力评价。方法选取检定合格的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)原液,经协作标定表面抗原蛋白含量后,加入氢氧化铝佐剂和冻干保护剂,冷冻干燥制备重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)冻干参考品,并按《中国药典》三部(2010版)要求进行各项检定。经10次独立试验测定冻干参考品小鼠效力,采用Reed-Münch计算ED50值;将冻干参考品置4℃(8周)、37℃(4和8周)后分别检测疫苗效力,分析其稳定性,依据Q10法进行效期推测;并对2个生产企业10批疫苗进行效力测定,分析其适用性。结果制备的冻干参考品各项指标均符合规定,小鼠ED50均值为0.183μg,CV为50.5%;该CHO细胞效力冻干参考品蛋白含量定为20μg/ml,规格为10μg/0.5 ml;冻干保护剂、冻干工艺对乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的效力影响较小,冻干参考品在37℃放置不同时间,效力变化不明显,表明冻干参考品稳定性较好,有效期约为7年;10批疫苗中,不合格率为10%,表明该参考品可用于乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力质控。结论制备的冻干参考品可作为重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)效力检定的质控参考品。     

毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果

目的研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果。方法甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌,采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法,对表达产物进行纯化。纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,制备成疫苗,并进行效力试验。放射免疫法检测免疫小鼠血清抗体浓度,计算ED50和相对效力。ELISA法检测血清中的preS2S抗体。结果纯化后的preS2(epi)S蛋白相对分子质量约为27000,且能与特异性抗体结合。两批纯化蛋白制备的疫苗ED50分别为0.35和0.48μg/ml,参比苗为0.52μg/ml。2批疫苗的体外相对效力分别为1.5和1.1,均合格,血清抗体平均浓度为808和784mIU/ml,参比苗为312mIU/ml。2批疫苗免疫小鼠后均产生了preS2抗体。结论该纯化方法实用有效,纯化后的preS2(epi)S蛋白比S蛋白具有更好的免疫原性。     

Synthesis of a novel oligomeric intumescent flame retardant and its application in polypropylene

A novel oligomeric phosphorous‐nitrogen containing intumescent flame retardant, poly (4,4‐diamino diphenyl methane‐O‐bicycli pentaerythritol phosphate‐phosphate) (PDBPP), was synthesized and characterized. Thermal stability and flammability properties of polypropylene (PP)/PDBPP composites with various PDBPP loading were investigated by thermogravimetric analysis (TGA), limited oxygen index (LOI), and cone calorimeter, respectively. The results showed that the incorporation of PDBPP could improve both the thermal stability and flame retardancy of PP considerably. PP/30%PDBPP system had a LOI value of 28 and its peak heat release rate was reduced by 60% relative to pure PP. Infrared spectrum and field emission scanning electron microscope measurements revealed that PDBPP and PP/PDBPP composites would form a continuous multicellular char layer containing phosphoric acid when exposed to elevated temperature. It was suggested that the very char layer was responsible for the enhanced thermal stability and improved flame retardancy. POLYM. ENG. SCI., 2009. © 2009 Society of Plastics Engineers     

不同年龄人群接种人用狂犬病疫苗的接种反应及免疫应答

目的观察不同年龄人群接种人用狂犬病疫苗的接种反应及免疫应答。方法选择身体健康、无犬伤史及狂犬病疫苗接种史的627名观察对象进行免疫原性检测,按生理发育状态分为5组:1～3岁组、4～6岁组、7～16岁组、17～40岁组和≥4l岁组,分别于免疫前、首针免疫后14和45 d,抽取静脉血,分离血清,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescence focusinhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒抗体效价,并计算抗体几何平均滴度(GMT)。在所有免疫原性受试者中随机抽取225名,进行接种反应观察。结果 225名观察对象接种人用狂犬病疫苗后的局部总反应率为5.15%,全身总反应率为4.42%,反应程度均为弱、中反应,无高强度及严重不良反应的病例报告。免疫前所有样本血清抗体GMT均≤0.2 IU/ml,抗体均为阴性;首针接种人用狂犬病疫苗后14 d,各年龄组人群抗体阳转率均达100%,但抗体GMT各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中4～6岁组和7～16岁组较高,分别为9.42和9.01 IU/ml,1～3岁组和≥41组较低,分别为6.11和6.35 IU/ml,而4～6岁组与7～16岁组及1～3岁组与≥41岁比较,差异均无统计学意义(P>O.05);首针接种人用狂犬病疫苗后45 d,各年龄组人群的抗体阳转率仍为100%,各年龄组平均GMT在14.8～16.40 IU/ml之间,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论不同年龄组人群接种人用狂犬病疫苗后临床反应轻微,免疫应答良好。但3岁以下婴幼儿及老年人抗体产生的时间有延迟的趋势,建议老年人及婴幼儿在接种人用狂犬病疫苗第l、2针时,应适当增加剂量,以提高血清抗体阳转率及免疫成功率。