应用反向被动血凝方法鉴别支原体的研究

用三种兔抗支原体的抗体包被双醛化羊红细胞(SRBC),对分离的支原体标准株的培养物用反向被动血凝方法(RPHA)作种的鉴别。证明 RPHA 特异性好,阴性阳性结果分明,易于判断,是一种简便、快速、经济的鉴别方法。     

梅毒螺旋体血凝试剂盒的研制

以超声波处理的梅毒螺旋体为抗原,致敏经醛化、鞣化处理的绵羊红血球,应用血凝试验检测梅毒患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体。同时以国际上公认的标准方法——FTA-ABS作为对照试验。共检测1125份血清(其中梅毒血清205份,非梅毒血清920份).两种方法检测结果完全相符,即敏感性皆为100％,血凝试验的特异性为99％。     

b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的研制

［摘 要］目的 研制b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗并考察其稳定性。方法 用溴化氰活化提纯Hib荚膜多糖抗原，通过己二酰肼（ADH）与破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合，制备b型流感嗜血杆菌结合物，并考察放置在2～8℃及室温9个月和37℃　3个月后的稳定性。结果 用本工艺提取的多糖，合成的多糖衍生物，多糖蛋白结合物的化学组成及结构特性均达到了国外同类产品的质控要求。结合物在2～8℃及室温放置9个月后基本无降解。结论 为临床评价Hib结合疫苗的安全性和保护效果及确定效期提供了实验基础。     

无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗的研制

目的研制无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)。方法按不同抗原配比配制3组联合疫苗,分别检测疫苗的效价及安全性,从中选择最佳配比配制3批联合疫苗,并用相应批原液,按相同配比配制3批DTaP和3批Hib疫苗作为对照,检测联合疫苗中抗原的相容性。结果3组配比的联合疫苗效价及安全性均达到《中国药典》三部(2005版)要求,联合疫苗中以每毫升含AcP18μgPN、D25Lf、T7Lf和Hib多糖抗原20μg为最佳配比。动物实验证明联合疫苗各抗原间不存在免疫干扰。结论已成功研制4种抗原配比合理的DTaP/Hib联合疫苗。     

HIV化学发光免疫诊断试剂盒的研制

目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIVⅠ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒。方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp36抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测。结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1~100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%~8%(n=20),批间变异系数5%~9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBVa、nti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度<10%。结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性。     

流感嗜血杆菌多糖抗原主要成分的分析

按Schneerson方法提取了2批多糖抗原，每批包括a、b、c、d、e、f6个血清型，并测定了抗原的固总、蛋白、核酸、磷、核糖、葡萄糖及氨基己糖。并用纸层析作进一步鉴定，用反向血凝方法测定血清学特性。结果表明，HK658（c）主要成分为氨基葡萄糖，HK646（f）为氨基半乳糖，HK644（d）为氨基己糖，HK645（a）为氨基己糖及葡萄糖，HK179（b）、HK641（e）主要为核糖，HK641并含有氨基己糖。6个血清型多糖均是型特异抗原，与相应型的IgG致敏血球能产生凝集，且最高滴度可达1：51200。     

兔病毒性出血症诊断试剂盒的研制

<正> 测兔瘟抗原或抗体均需人“O”型红血球,但有的基层单位缺少备用的新鲜人“O”型红血球,为此,作者将新鲜人“O”型红血球进行处理,未影响血凝素滴度,并保留在HA试验中的敏感性及特异性。处理方法是取1ml经洗净压积新鲜人“O”型红血球混悬于8ml生理盐水中,另取2ml 40％福尔马林溶液装在透析袋内,将袋放进血球混悬液中,在振荡器上缓和摇动4小时,振荡器放在室温,振荡过程中不加温。然后将透析袋用小针刺5～6个小孔;放回血球液中继续振荡过夜。将固定后的血球悬液经4层纱布过滤后,用生理盐水洗5～7次,配成20％混悬液放4℃保存备用。本试剂盒有1％和压积两种浓度的人“O型”红血球。兔瘟抗原、兔瘟阳性血清和阴性血清,25％白陶土混悬液,试验结果如下: 1.应用新鲜与固定的人“O”型红血球测试6批     

流感嗜血杆菌的培养、检定及免疫血清的试制

用氯化血红素及辅酶I作为X、V因子来源、用心脑没液作为基础液制备的培养基，所试12个菌株6个血清型流感嗜血杯曲均生长良好，该培养基适于大量培养。应用该培养基培养新分离的三株流感嗜血杆菌，均生长良好，与b型血清产生凝集，属b型。采用死菌抗原（b～f型）及新鲜死菌加佐剂方法免疫（a型）健康家兔，获得较高抗体水平，每种抗原各制备三批血清，其抗体滴度基本上一致。     

O_(139)霍乱弧菌诊断试剂盒的研制

自1992年10月以来，一个新菌型霍乱弧菌在印度、孟加拉等南亚国家引起霍乱暴发流行；1993年夏天，我国新疆等地也从霍乱病人中分离出此新苗型菌株。现已证明，此菌株非O1群霍乱弧菌。按日本坂崎血清系统分型为O139血清型，故称之为O139群霍乱弧菌（简称O139霍乱弧菌）。它不与O1群霍乱弧菌“O”多价血清凝集；对O/129弧菌抑制剂（二氨基二异丙喋啶）有抗性；O139群菌株均产生霍乱毒素（CT）。据报道，O139霍乱弧菌蔓延迅速．传播广泛，很可能会造成第八次世界性霍乱大流行。为能及时发现病人，监测疫情进展和流行病学研究需要，我们已…     

我国部分地区儿童b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体水平的调查

目的 调查我国部分地区儿童b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖的组分多聚核糖基-核糖醇-磷酸盐(polyribosylribitol phosphate,PRP)的抗体(抗-PRP)水平。方法 采用ELISA法对2007~2014年间来自我国广西壮族自治区、江苏省、河南省的13 799份2月龄~5岁健康儿童的血清标本进行抗-PRP自然抗体水平的检测。结果 2007~2014年间我国2月龄~5岁儿童抗-PRP自然抗体阳性率、抗体浓度达到长期保护水平的比例及抗体几何平均浓度(GMC)呈逐年升高的趋势,其中2~11月龄儿童的抗-PRP自然抗体阳性率较低;不同地区儿童抗-PRP自然抗体水平差异不大,且不同性别间抗体水平分布较均衡。结论 我国2~11月龄儿童仍是Hib的易感人群,是需进行Hib结合疫苗预防接种的重点人群。     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

残余牛血清蛋白含量检测试剂盒的制备和应用

所制备的残余牛血清蛋白含量检测试剂盒，经试验表明具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。可检出疫苗中ng／ml含量的牛血清蛋白。该试剂盒使用简便、快速，现已广泛应用于有关生物制品中牛血清蛋白残余量的检测。     

2.5sNGF酶联免疫检测试剂盒的研制

用成年雄性小鼠颌下腺提纯的 2 5sNGF免疫家兔得到兔抗NGF抗体 ,研制出 2 5sNGFELISA试剂盒。经检测本试剂盒灵敏度达到 1ng ml,在 0 84～ 6 7ng ml范围内线性良好 (r >0 99)。对人、小鼠、大鼠血浆无非特异反应 ,在大鼠血浆中NGF样品回收率在 91%～ 10 7%之间 ,变异系数小于 10 % (n =4)。对NGF参比品进行 6次标定 ,平均值为 13 4± 1 13ng 支 ,板间CV为 8 43% (n =6 ) ,板内CV值均小于 6 % (n =4,3次 )。表明本试剂盒可用于小鼠 2 5sNGF制品的定量检测和药代动力学研究。     

人催乳素化学发光免疫分析试剂盒的制备及验证

目的制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证。方法采用2株不同结合位点的抗hPRL单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证。结果试剂盒最佳定量范围在5～100ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.9999,灵敏度为0.49ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%。试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1500ng/ml。与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.9537和0.9486。结论已成功制备灵敏、特异的hPRLCLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测。     

抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体试剂盒的研制及应用

本文从34株脊髓灰质炎病毒单克隆抗体中,挑选23株单克隆抗体(McAb)组成两套试剂盒:一套是具有各型毒株共同特异的单克隆抗体,偶联上异硫氰酸荧光素,用直接免疫荧光试验,对脊髓灰质炎病毒进行病原学诊断;一套是具有不同毒株特异的单克隆抗体,用中和试验或间接免疫荧光试验,根据抗体在抗原上识别表位的不同及其表位分布关系,可用于脊髓灰质炎病毒毒株问的差异和抗原变异的研究,以及疫苗株与野毒株的鉴别。近年来我们收集了286株脊髓灰质炎病毒标本,用上述试剂进行了病原学的诊断及抗原性质方面的分析研究。证明了这些试剂具有高度的特异性,可快速、简便、敏感地进行病原学诊断。应用单克隆抗体试剂从抗原表位水平来分析研究毒株的性质,鉴别疫苗相关株,这是一种较为理想的选择。     

甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒的制备

目的制备甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,并进行验证。方法采用磁珠法从甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品中提取病毒RNA,逆转录合成cDNA。根据NCBI最新公布的大流行甲型H1N1流感病毒(2009)基因序列,设计针对编码基质蛋白M基因的引物和探针,检测甲型流感病毒;设计针对血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因特异性的引物和探针,检测甲型H1N1流感病毒;同时针对人的RNaseP基因设计用于内部控制的引物和探针。所有探针均为Taqman探针,5'端标记FAM,3'端标记BHQ1。对最佳荧光PCR反应条件进行优化,在此基础上组装成甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,对其特异性、灵敏度、精密性和稳定性进行验证。与市售试剂盒的检测结果进行对比,并对63份临床甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品进行检测。结果设计的PCR引物及探针能对甲型H1N1流感病毒进行准确检测,与流感病毒的其他型和亚型无交叉反应;试剂盒的灵敏度为0.004个血凝素单位;试验内变异系数小于2.5%,批间变异系数小于5%;试剂盒放置-20℃保存,稳定性良好;检测20份甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品的结果与市售试剂盒一致;检测63份流感疑似患者咽拭子样品,其中大流行甲型H1N1流感病毒阳性36份,普通甲型流感病毒阳性5份。结论所制备的甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒具有较高的灵敏度、特异性、精密性和稳定性,可用于目前流行的甲型H1N1流感病毒的快速检测。     

丙型肝炎病毒核心总抗原检测试剂的评价

目的评价国外丙型肝类病毒核心抗原检测试剂盒的质量以及窗口期检测核心总抗原(HCVcAgTrak-C)的意义。方法用该试剂检测8649份自然献血员及566份HCV可疑感染者血清的核心总抗原,并与抗体试剂(Anti-HCV)、游离抗原(HCVfreeAg)试剂、核酸(HCVRNA)试剂进行比较。结果筛出核心总抗原和抗体同时阳性血清152份,抗体阴性而总抗原阳性血清5份。利用RNA试剂检测这5份血清,结果HCVRNA阳性。利用HCVfreeAg试剂检测这9215份血清,发现2份阳性,其中1份为抗原和抗体同时阳性,RIBA检测确证这份血清产生的是核心区抗体。另1份为单独抗原阳性。结论在应用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时使用HCVcAg试剂检测,可以减少因窗口期造成的漏检。