产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4 U/mL~10.4 U/mL之间。经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌。     

母乳源益生菌的筛选及其降血糖能力测定

研究从母乳中筛选具有降血糖能力的优良益生菌，为开发降血糖功能益生菌乳制品奠定基础。采用稀释涂布法分离纯化菌株并鉴定，以对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（pNPG）为底物筛选对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶有抑制活性的菌株。从母乳中共计获得21株益生菌，鉴定15株为植物乳杆菌，3株为罗伊氏乳杆菌，3株为格式乳杆菌，经测定，R15和R17对α-葡萄糖苷酶抑制率达12.73%和13.83%,R15和R7对α-淀粉酶抑制率高达88%和89.3%，而商业菌罗伊氏乳杆菌254474对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制率仅有11.4%和80%。表明植物乳杆菌R15具有最优降血糖能力，可为后期研发功能性乳制品提供优良菌株。     

代谢工程改造谷氨酸棒杆菌合成四氢嘧啶

为了获得四氢嘧啶生产菌株并利用此菌株提高四氢嘧啶产量,以谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）野生菌株ATCC13032为研究对象,以赖氨酸积累量为评价指标,强化了天冬氨酸-β-半醛合成代谢流;通过阻断赖氨酸输出通道LysE,表达不同来源的四氢嘧啶操纵子ectABC,获得了四氢嘧啶生产菌株;通过强化天冬氨酸转氨酶和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）再生途径,进一步提高四氢嘧啶产量。结果表明,构建了一株高产赖氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌株LYS-3,赖氨酸积累量为28.48 g/L;表达操纵子HEectABC的谷氨酸棒杆菌ECT-3四氢嘧啶产量达到17.21 g/L;过表达基因aspC和ECpntAB谷氨酸棒杆菌ECT-6,摇瓶发酵四氢嘧啶产量达到21.85 g/L。研究结果可为天冬氨酸-β-半醛衍生物的生物合成提供参考。     

习酒酒曲中产淀粉酶细菌分离及性质研究

从习酒酒曲中分离筛选出16株产α-淀粉酶菌株,镜检及生理生化试验初步鉴定均为革兰氏阳性芽孢杆菌;菌株产酶最适宜温度在45-80℃之间,除一株高温型α-淀粉酶菌株外,其余均为中温型α-淀粉酶菌株;酶解产物纸层析分析,既有液化型α-淀粉酶,也有糖化型α-淀粉酶。     

α-淀粉酶在不同地衣芽孢杆菌宿主菌中分泌表达的对比分析

研究不同地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)宿主菌对α-淀粉酶分泌表达的影响。以Bacillus subtilis的P43启动子,B.licheniformis WX-02α-淀粉酶基因的信号肽、编码区和终止子序列为表达原件,构建了α-淀粉酶分泌表达载体pP43SAT。将pP43SAT分别转入3株B.licheniformis宿主菌:WX-02(ΔamyL)、BL9和BL10,获得3株α-淀粉酶基因工程菌WX-02(ΔamyL,pP43SAT)、BL9(pP43SAT)和BL10(pP43SAT),并将构建的3株工程菌进行发酵对比分析。BL9(pP43SAT)和BL10(pP43SAT)的淀粉酶发酵活力分别达到94.01 U/mL和101.94 U/mL,比原始宿主菌WX-02(ΔamyL,pP43SAT)分别提高了21%和31%,这说明BL9和BL10新型宿主菌有利于淀粉酶的分泌表达。本研究证明多蛋白酶基因缺失可显著提高α-淀粉酶的表达,为α-淀粉酶的高效表达提供了新型宿主菌和新策略。     

重组枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因工程菌构建与表达

根据GenBank枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因序列设计引物,以枯草芽孢杆菌基因组为模板,PCR克隆α-淀粉酶基因(amy),将α-淀粉酶基因插入穿梭表达载体pP43C,构建重组质粒pP43Camy。随后将重组质粒转化八种蛋白酶缺陷的宿主枯草芽孢杆菌WB800,经筛选获得重组枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因工程菌WB800/pP43Camy1026,工程菌摇瓶发酵酶活力达960U。性质研究表明,重组α-淀粉酶的最适作用温度为70℃,最适反应pH为6.0,具有良好的应用潜力。     

几株乳酸菌与降血糖相关的性能研究

选用从陕、甘、宁等地区传统乳酸菌发酵食品中筛选的18株乳酸菌,通过对其与降血糖相关的性能,即:对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制性、对自由基DPPH和O~(2-)的清除能力、对菌株还原能力等五个方面的研究,结果表明:18株乳酸菌的菌悬液对α-葡萄糖苷酶的抑制率总体高于发酵上清液和细胞破碎上清,其中乳双歧杆菌1号菌株的菌悬液对α-葡萄糖苷酶抑制率在所有菌株中最高为37.48%。其余四个方面均是发酵上清液作用较强,乳双歧杆菌1号发酵上清液对α-淀粉酶抑制抑制率、还原能力和对O~(2-)清除率在所有菌株中均最高,其中抑制率为33.85%,还原浓度为105.25μmol/L,清除率为34.18%。保加利亚乳杆菌1号发酵上清液对DPPH清除率在所有菌株中最高为82.92%。     

β-淀粉酶酶解甘薯淀粉条件分析

麦芽糖可以诱导枯草芽孢杆菌产生中温α-淀粉酶,甘薯淀粉的β-淀粉酶酶解产物主要为麦芽糖。应用高效液相色谱示差折光检测法对不同酶解条件下甘薯淀粉β-淀粉酶酶解产物进行分析。结果表明,液化酶加入量为5~10U/g干淀粉时,酶解产物中葡萄糖的含量最高可达0.94%±0.048%,其含量较低,不会对枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶具有阻遏作用。酶解最佳条件为液化酶加入量5U/g干淀粉,β-淀粉酶最佳加入量为200U/g干淀粉,酶解最佳温度为60℃,最佳酶解时间为28h时,此条件下甘薯淀粉酶解产物中麦芽糖含量达75.8%±1.7%。甘薯淀粉β-淀粉酶酶解产物可以诱导β-淀粉酶酶解产物枯草芽孢杆菌发酵生产中温α-淀粉酶。研究对枯草芽孢杆菌发酵生产中温α-淀粉酶碳源优化具有重要意义。     

驼乳制品中抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性乳酸菌的筛选及益生特性研究

目的:本研究以新疆阿勒泰地区的驼乳制品为研究对象,筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的优良乳酸菌。方法:采用稀释涂布法分离纯化菌株,DNS和pNPG法筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的菌株,通过耐酸性、耐胆盐、模拟胃肠道环境耐受性、抑菌性、抗氧化活性实验评价菌株的益生特性。结果:从驼乳制品中共计获得34株菌株,其中6株对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性,经过形态学和16S rRNA分子鉴定,确定有4株为植物乳杆菌Lactiplantibacillus plantarum,2株为副干酪乳杆菌Lactiplantibacillus paracasei。6株乳酸菌对α-淀粉酶的抑制活性都达到50%以上,其中X34对α-淀粉酶的抑制率最高达到88.59%。本实验中筛选的乳酸菌对α-葡萄糖苷酶的抑制率在11%~16%之间,X31抑制率最高为15.43%。6株乳酸菌在不同pH（1.0、2.0、3.0）和不同浓度胆盐（1、2、3 g/L）的培养基中均可存活。6株乳酸菌在模拟胃液和肠液中的存活率分别达到83%和90%以上。对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率超过90%以上,其中X29对羟自由基的清除率最高为92.43%,对超氧阴离子自由基清除率最强的是X33清除率达到94.04%。6株乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,其中X31对大肠杆菌的最大抑菌圈直径为19.63 mm,X23对沙门氏菌抑菌圈最大达到19.85 mm,菌株X33对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为19.17 mm。结论:从驼乳制品中筛选到6株具有潜在降糖活性的乳酸菌,对强酸、胆盐和胃肠液有一定的耐受性,抗氧化能力较强,具有抑制致病菌的效果,为后期研发功能性降糖饮品提供益生菌株。     

链霉素抗性对棒杆菌产L-赖氨酸的影响研究

北京棒杆菌CICC21721经亚硝基胍(NTG)诱变,涂布在含有不同浓度链霉素的完全培养基上,对生长出来的茵落进行摇瓶发酵并测定赖氨酸、乳酸、残糖含量.赖氨酸产酸最高的一株突变株产量为40.2 g/L,较出发菌株提高了12.2％,糖酸转化率达到58.7％.     

芦丁、槲皮素对α-淀粉酶抑制活性研究

以α-淀粉酶为评价指标,探讨了芦丁和槲皮素的辅助降血糖功能。研究结果芦丁和槲皮素对α-淀粉酶抑制均呈阳性,表明芦丁和槲皮素都具有辅助降血糖的功能。芦丁溶液、槲皮素溶液和阿卡波糖对α-淀粉酶的半抑制浓度分别为0.258mg/mL、0.233mg/mL、0.095mg/mL。芦丁、槲皮素、阿卡波糖对α-淀粉酶的抑制作用大小顺序为:阿卡波糖>槲皮素>芦丁。     

柚皮素与α-淀粉酶相互作用的研究

本文研究了柚皮素与α-淀粉酶的相互作用。柚皮素与α-淀粉酶反应形成复合物,从而对α-淀粉酶的催化活性、荧光特性以及柚皮素的抗氧化活性产生相应的影响。采用酶动力学方法和荧光光谱法研究了柚皮素对α-淀粉酶的抑制作用。在pH6．8、37℃条件下反应20min,柚皮素（1mg／mL,0．05mL）对小淀粉酶（0．33U／mL,0．2mL）催化活性的抑制率达到36．6％。该抑制作用是以非竞争性方式进行。柚皮素对α-淀粉酶的内源性荧光产生有规律的猝灭作用,其方式以静态猝灭为主。二者主要通过疏水作用力发生结合反应形成复合物,有1个结合位点,表观结合常数约10^5L／mol。另一方面,由于与α-淀粉酶发生复合反应,柚皮素的还原力和抗亚油酸氧化的活性也有一定程度的降低,而可能导致其生物活性发生改变。     

以水解液为原料的α-淀粉酶发酵工艺条件的研究

本文以枯草杆菌BF-7658诱变菌株Ning为试验菌株,以玉米粉酶水解液为碳源,以豆饼粉碱水解液为氮源,在摇瓶条件下和1.5L发酵罐上进行发酵工艺条件的研究。研究结果表明,该菌株在碳氮比为1:2,pH为6.5～7.5的培养基中可获得较高的α-淀粉酶活性,在1.5L发酵罐中试验α-淀粉酶活性平均可达447.2u/ml,最高能达183.7u/ml(比原菌粗粮发酵提高约150u/m1)。因此,本文试验的清液发酵工艺具有较高的工业推广价值。     

α-淀粉酶在棉织物上的热失活动力学及稳定性

研究3种热稳定剂以及α-淀粉酶质量浓度、汽蒸温度、汽蒸时间和酶液pH值对中温α-淀粉酶在棉织物上热稳定性的影响.探讨中温α-淀粉酶在棉织物上的热失活的动力学.结果表明,棉织物的结构本身对中温α-淀粉酶就具有很好的热稳定效果,醋酸钙、乳酸钠和低分子质量壳聚糖(LWCS)都能进一步提高α-淀粉酶在棉织物上的热稳定性,其中以LWCS的效果最好;棉织物α-淀粉酶退浆优化工艺为:α-淀粉酶0.1 g/L,LWCS0.5 mmol/L,酶液pH值6.100℃汽蒸10 min.按此工艺对棉织物进行处理后,退浆率达到97.2%.     

芜菁中膳食纤维的提取及其理化性质的研究

以芜菁为原料,通过生物法与化学法结合除去其中的淀粉、蛋白质、脂肪和碳水化合物,从而得到较纯净的膳食纤维。研究了α-淀粉酶水解温度、α-淀粉酶用量、NaOH浓度和NaOH水解温度等4个因素对膳食纤维提取率的影响,并结合芜菁的理物性质确定了膳食纤维的最佳提取工艺条件。结果表明:当α-淀粉酶水解温度为65℃、α-淀粉酶量为0.3%、NaOH质量分数为7%、NaOH水解温度为60℃时,膳食纤维的提取率可达到6.5%,成品呈浅黄色,气味淡,且生理活性好,溶胀性高达5.6mL/g,持水力为780%。     

α-淀粉酶水解对芭蕉芋淀粉理化性质的影响

目的酶法水解为芭蕉芋淀粉进行改性,提高芭蕉芋淀粉的应用价值,扩大于其在食品工业的应用范围。方法以芭蕉芋淀粉为原料,采用α-淀粉酶水解制备酶解淀粉,结合热失重(TGA)技术考察α-淀粉酶水解对芭蕉芋淀粉热稳定性和其他理化性质的影响。结果与原淀粉相比,酶解淀粉的溶解度和膨胀度、吸水度和吸油度增大;透光率和冻融稳定性降低;TGA结果表明,α-淀粉酶水解不改变芭蕉芋淀粉的组成成分,且酶解芭蕉芋淀粉的分解温度较高,表明其热稳定性增加。结论通过α-淀粉酶酶解法可制备满足工业需要的改良芭蕉芋淀粉。     

米曲霉40188产中性蛋白酶、α-淀粉酶特性的研究

通过对米曲霉40188产酶特征及中性蛋白酶及α-淀粉酶酶学特征的研究,得出米曲霉40188制曲最佳时间为50～72 h,中性蛋白酶和α-淀粉酶酶活在40℃稳定,随着温度升高酶活降低,但α-淀粉酶的热稳定性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶的最适pH为7～8,α-淀粉酶的最适pH为6～8,α-淀粉酶的耐盐性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶酶活随着盐浓度的增加呈下降趋势。     

Gelatinization and Liquefaction of Starch with a Heat Stable α-Amylase

Sweet potato and corn starches were gelatinized and liquefied to dextrose equivalent (DE) 10 in a steam-jacketed kettle or in a twin-screw extrusion cooker in a single step process with a heat stable ex-amylase. The time required to gelatinize and liquefy 20% starch slurries in a kettle at 95°C was 45 to 50 sec. Starch powder (10 kg/hr) and water (2-6 kg/hr) were fed to an extrusion cooker to adjust the moisture contents of the starch from 20 to 55% (wet basis) and gelatinized and liquefied to DE 10 at a barrel temperature of 120°C or above with 2 to 3% (w/w) a-amylase added. The optimum conditions for the operation were to feed starch with water to maintain 50% moisture and 2% heat stable a-amylase at a barrel temperature of 120°C.     

天然复配改良剂对绿茶吐司品质的影响

目的 探讨天然复配改良剂对绿茶吐司品质的影响。方法 以绿茶吐司为研究对象,采用单因素试验分别分析α-淀粉酶、海藻酸钠、大豆卵磷脂这3种天然改良剂对绿茶吐司品质的影响。再通过响应面试验,选择对感官评分影响最大的质构指标-硬度为响应值,确定3种复配改良剂的最优组合,最后进行验证试验。结果 复配改良剂的最优组合为:α-淀粉酶添加量0.069 g/kg、海藻酸钠添加量1.925 g/kg、大豆卵磷脂添加量1.426 g/kg。按此组合制作的绿茶吐司,与不加改良剂的吐司相比,在感官评分、硬度、弹性、胶着性、咀嚼性和抗老化指标上具有明显的优势,产品的理化指标符合GB/T20981—2021《面包质量通则》;微生物指标符合GB 7099—2015《食品安全国家标准糕点、面包》。结论 天然复配改良剂能显著改善绿茶吐司的品质,可为复配改良剂在绿茶吐司中的应用提供参考。