用于PCR检测的乳品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法比较研究

比较了乳品中金黄色葡萄球菌DNA的6种提取方法的效果,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA的方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA,作为模板进行PCR检测,检测效果良好,对UHT全脂乳、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为10、10CFU/mL和55CFU/g。     

鉴定金黄色葡萄球菌的多重PCR方法

建立了一种快速鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌的多重PCR方法。利用金黄色葡萄球菌的特异基因、耐甲氧西林基因和4种肠毒素基因nuc、mecA和sea、sec、sed、see建立6重PCR反应体系,并对PCR体系,引物浓度进行优化。6对PCR引物均能特异地扩出相应的目的基因。对47株金黄色葡萄球菌的检测结果与应用单重PCR鉴定结果完全一致。实验所建立的多重PCR方法能在一个反应体系中鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效的检测手段。     

金黄色葡萄球菌致病因子检测的PCR方法

介绍了金黄色葡萄球菌致病因子检测的聚合酶链式反应(PCR）方法，已取得的成果和存在的问题，这些方法也同样适用于其它致病菌的检测。     

食品中金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的研究

以耐热核酸酶基因nuc、纤维蛋白原结合蛋白基因clfA和SmaI限制性酶切片段特异序列为靶基因,设计筛选引物,建立并优化了检测金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,SA)的多重PCR体系。采用10株SA和46株非SA验证了该多重PCR具有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到1.197 3 ng。人工污染样品,当起始污染量为1.2个/g时,37℃增菌培养6 h即可检出。一共检测了43份样品,检出3份阳性样品,其中有2份阳性样品与传统方法一致,另外一份阳性样品用测序验证。作者建立的多重PCR方法可特异、快速地实现对SA的检测。     

PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。     

PCR技术检测金黄色葡萄球菌进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)是引起食物中毒的主要致病菌之一,其传统方法包括选择性培养、生化鉴定等步骤,耗时长、灵敏性差,很难满足食品安全快速检测要求。PCR技术是近年来广泛应用于食品中致病微生物快速检测的现代方法之一,其目的基因多种多样,主要包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多种特异性鉴别基因。本文综述了PCR技术应用于金黄色葡萄球菌检测的各种目的基因,并简要介绍了多重PCR及实时定量PCR等新技术的应用。     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测思路构建

本文对金黄色葡萄球菌的相关内容展开论述,并阐释了PCR技术检测原理与应用特点,通过研究细菌培养与DNA提取、合理设计引物、多重PCR反应条件优化、PCR反应检测等内容,以期提高食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测结果的准确性,确保市场中流通食品的安全性。     

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

PCR技术在金黄色葡萄球菌中的研究进展

金黄色葡萄球菌是造成人类食物中毒的常见致病茵之一,对其进行检测与鉴定显得尤为重要.随着PCR技术的发展,金葡菌也得以深入研究.本文主要就应用于金黄色葡萄球菌的PCR技术进行简要综述.     

乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的PCR检测

介绍了PCR技术在检测乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素方面的研究进展，并对其今后的发展方向和前景进行了展望。     

肉制品中志贺氏菌DNA的快速提取方法

肉制品中致病菌DNA的提取对PCR检测具有重要意义。以污染志贺氏菌的猪肉为材料,比较了沸水浴法、裂解液煮沸法、CTAB/SDS法、改良的碱性异硫氰酸胍法4种提取方法对志贺氏菌DNA的提取效果,并以提取的DNA为模板进行PCR检测。结果表明:改良的碱性异硫氰酸胍法提取志贺氏菌DNA的效果较好,猪肉中志贺氏菌的PCR最低检出限为5×100CFU/g,整个检测时间<8h。经改良的碱性异硫氰酸胍法操作简便、经济省时,可用于肉类的PCR检测。     

金黄色葡萄球菌鉴定方法研究

目的 为了筛选出能够快速准确鉴定金黄色葡萄球菌的方法。方法 利用国标法、VITEK 2 Compact生化鉴定、16s rDNA序列分析和PCR鉴定等4种方法对酱卤肉制品中分离出的典型菌落进行鉴定。结果 国标法检测结果显示菌株为革兰氏阳性菌,血平板上有明显的透明溶血圈且血浆凝固酶试验结果为阳性,符合金黄色葡萄球菌判定标准。VITEK 2 Compact生化鉴定结果中不吻合的典型生化谱仅有1项（dMAL）,判定菌株为金黄色葡萄球菌（98%概率）,为极好的鉴定。16s rDNA序列比对分析及以邻接法构建的进化树均显示典型菌落为金黄色葡萄球菌。以耐热核酸酶基因（nuc）设计的引物能扩增出单一的清晰条带,能快速准确的识别出金黄色葡萄球菌。结论 4种方法均能准确鉴定出金黄色葡萄球菌,但耗时都比较长,通过改进实验方法,缩短DNA提取时间,PCR鉴定将表现出较大优势。     

模拟蟹肉中金黄色葡萄球菌生长模型的建立

运用预测食品微生物学的方法研究了不同温度下模拟蟹肉中金黄色葡萄球菌的生长规律,选取了3种模型(Gompertz模型、Logistic模型、Linear模型)进行拟合,建立不同温度下的生长模型。通过标准差和相关系数的比较得出10℃的最适生长模型为Linear模型,15℃、20℃、25℃、30℃的最适生长模型为Gompertz模型,再通过不同温度下最适模型方程得到模拟蟹肉中金黄色葡萄球菌的迟滞期λ、最大生长速率μm以及相对最大细菌浓度(A)。     

Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

建立了Taqman探针实时PCR方法,针对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。研究所设计的引物具有良好的特异性,而且Taqman探针实时PCR方法检测sea基因的灵敏度高,最低检出限为69 fg,并且该方法可在8 h内完成人工污染乳中金黄色葡萄球菌的检测,最低检出限为83 cfu/mL。研究所建立的方法具有特异性强、灵敏性高及操作简便等优点,适宜于牛乳中金黄色葡萄球菌污染的调查及监测。     

DNA carryover in milk samples from routine milk recording used for PCR-based diagnosis of bovine Staphylococcus aureus mastitis

Real-time PCR techniques are increasingly used to detect udder pathogens from milk samples collected non-aseptically at routine milk recording. The objectives of this study were (1) to estimate the statistical associations between cycle threshold (Ct) values for Staphylococcus aureus in non-aseptically collected composite samples taken at routine milk recording from cows milked consecutively with the same milking unit and milk meter; and (2) to formulate practical and plausible guidelines for understanding the diagnostic implications of PCR testing for Staph. aureus intramammary infection at routine milk recording. The study included 4 herds with conventional milking parlors and repeatedly low Ct-values for Staph. aureus (representing a high DNA load) in bulk tank milk. Composite milk samples were collected from all cows at all milking units during routine milk recording using the Tru-Test electronic milk meter (Tru-Test Group, Auckland, New Zealand) and analyzed using the PathoProof PCR (Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland) assay. Milking clock times were retrieved at each milk meter to establish the milking order of the cows at each unit. A multinomial logistic regression was applied to estimate the association between Ct-values from cows milked consecutively with the same milking unit and milk meter. The following groups were selected based on Ct-values: (1) 0–31.3, (2) 31.4–33.9, (3) 34.0–37, (4) 37.1–39.9, and (5) 40 (negative result). The association between groups from cows milked consecutively with the same milking unit and milk meter was statistically significant. Approximately 60% of cows were in Ct group 5 if the antecedent cow was also in Ct group 5, but only 20% of cows were in Ct group 5 if the antecedent cow was in Ct group 1. The probability of cows being in Ct group 1 was not markedly influenced by the group of the antecedent cow. Statistical relationships in the intermediate range gave a plausible indication of a dose-response relationship. Carryover of bacterial DNA via the milking unit and milk meter is very likely to affect PCR results for Staph. aureus. Therefore, information about milking order must be considered in mastitis control efforts. We suggest a practical interpretation of PCR results: cows with a Ct-value <32 can be labeled “very likely to be infected with Staph. aureus,” but cows with Ct-values of >37 and 32–37 can be labeled “very likely to be negative for Staph. aureus” and “uncertain Staph. aureus status,” respectively.     

单冻生虾仁中金黄色葡萄球菌的风险评估

金黄色葡萄球菌对水产品的污染比较严重,大部分中毒事件来自于金黄色葡萄球菌产生的肠毒素.本文参照国际上风险评估的经验,按照CAC的规定,从危害识别、暴露评估和危害特性等方面客观地对单冻生虾仁中金黄色葡萄球菌进行了风险评估.最后对水产品加工企业提出了一些建议.     

简便易行的食用菌菌丝体基因组DNA提取法

用CTAB法直接从食用菌菌丝体培养物中提取DNA，并将所提取DNA进行PCR，得到了较清晰的扩增图谱，用该法提取的食用菌菌丝体DNA可用于分子生物学研究，具有简便易行的优点。