补料方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的影响

在50 L发酵罐中采用4种补料培养方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜进行比较。结果表明,通过补料可以明显地促进灵芝菌丝体的生长和灵芝三萜的合成,同时,不同的补料方式对菌丝体生长和灵芝三萜合成有不同的影响。采用指数补料方式可获得较高的菌丝体干质量,并提高灵芝三萜含量,与传统的发酵方式相比,采用此补料策略取得了较好的效果。发酵终点灵芝菌丝体干质量达到17.68 g/L,灵芝三萜含量达到4.58 g/100 g干菌丝体,分别比分批发酵提高了65.70%和100.88%。     

一种徐州紫芝多糖和三萜的测定及其菌丝发酵特性研究

通过水提多糖及醇提三萜的方法,分别利用苯酚-硫酸法和香草醛-高氯酸法测定一种徐州紫芝子实体中灵芝总多糖及总三萜含量。通过酸水解多糖可知,紫芝多糖主要由木糖(Xyl)67%、葡萄糖(Glu)29.6%及阿拉伯糖(Ara)3.4%组成。通过对紫芝菌丝体生长培养基进行正交试验优化可知,菌丝生长最佳配方为(g/L):葡萄糖+玉米粉10+10,大豆粉6,硫酸镁0.5。利用不同碳源对紫芝菌丝进行液体发酵培养可知:紫芝菌丝发酵液中胞外总三萜含量随着发酵时间延长而增多,第4或5天含量达到一个峰值,最大峰值为2.80 mg/L,之后总三萜含量在缓慢下降,在第9天胞外三萜含量出现第2个峰值,最大峰值为2.43 mg/L。当在大米发酵培养基中添加0.2%玛卡粉时,第5天发酵液中胞外总三萜含量达到3.15 mg/L,比不添加玛卡粉发酵液中增加12.5%,第9天发酵液中胞外总三萜含量达到3.27 mg/L,比不添加玛卡粉发酵液中增加34.5%。     

大孔树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜

研究比较大孔树脂对灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的吸附特性,优选其对灵芝总三萜的分离纯化工艺条件。采用紫外分光光度法测定灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的含量,选择8种大孔树脂,以总三萜吸附率和解吸率为指标,筛选最佳树脂型号,并考察最佳树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜的工艺参数。结果表明：8种大孔树脂中,HPD-500型大孔树脂对灵芝子实体总三萜的吸附解吸效果最好,最佳纯化工艺条件为上样液浓度1.0 g干样/mL,最大上样量2 BV,用8.5 BV的75%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝子实体总三萜纯度达60.59%;而AB-8型大孔树脂对灵芝孢子粉总三萜的吸附解吸效果最好,且最佳纯化工艺条件为上样液浓度0.4 g干样/mL,最大上样量3 BV,用8.5 BV的95%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝孢子粉总三萜纯度达65.48%。综上,HPD-500型和AB-8型大孔树脂分别富集纯化灵芝子实体和灵芝孢子粉中总三萜的工艺效果显著,简单可行,为灵芝三萜的深入探究和工业化纯化灵芝子实体和孢子粉总三萜提供理论依据。     

无柄灵芝代料栽培基质营养组成与其功能成分累积的关系研究

寻求灵芝高产多糖和三萜的栽培配方,采用常规栽培灵芝的4种培养基配方,栽培无柄灵芝(Ganoderma resinaceum)获得子实体和孢子,硫酸-蒽酮法测定其多糖含量,香草醛-高氯酸法测定其三萜含量。通过多元回归拟合确定灵芝子实体、孢子的多糖和三萜产量与培养基主要营养成分粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、可溶性总糖的相关性方程。根据方程计算得到常用原料对功能成分产量的贡献度,结合原料成本,分别对子实体、孢子功能成分产量最高的配方1、配方3进行改良,得到子实体高产功能成分的配方A和孢子高产功能成分的配方B。配方A:玉米粉7%、麦麸7%、玉米芯84%、蔗糖1%、石膏1%,子实体多糖产量123.5 mg、三萜产量122.76 mg,与配方1相当,但成本降低42.29%。配方B:玉米粉5%、麦麸5%、甘蔗渣88%、蔗糖1%、石膏1%,孢子多糖45.83 mg、三萜31.59 mg,与配方3相比分别提高92.88%、96.70%,而成本相当。     

灵芝菌在绿茶发酵中的应用

对灵芝菌在绿茶培养基与无茶培养基中摇瓶发酵时菌体生长和胞外多糖合成进行了对比研究,实验结果表明,灵芝菌生物量降低了17.08%,胞外粗多糖产量增加了42.5%。同时对灵芝菌在改善低档绿茶品质中的应用也进行了探索,低档绿茶经过灵芝菌摇瓶发酵后,茶汤主要呈味成分含量发生变化,茶多酚降解了64.8%,游离氨基酸总量增加了9.7%,酚氨比降低了67.8%,水溶性灵芝胞外多糖增加,茶汤品质得到很大改善。     

甘蔗渣、啤酒糟培养灵芝研究和成分分析

通过研究4个供试灵芝菌株生长速度、爬壁能力、菌丝密度和气生菌丝量等性状,筛选出最佳的灵芝母种培养基配方为马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,蔗渣粉20 g,蛋白胨3 g,磷酸二氢钾3 g,硫酸镁1.5 g,维生素B20.1 g;通过比较4个菌株在不同栽培基质上子实体干重、子实体厚度和子实体直径筛选到最适灵芝栽培配方为甘蔗渣82%、啤酒糟15%、石灰粉2%、糖1%;椴木栽培灵芝和蔗渣栽培的灵芝之间总三萜含量差异不大,其中4个供试灵芝总三萜含量均高于10 mg/g;实验结果显示蔗渣栽培的灵芝子实体中多糖含量是椴木栽培灵芝的两倍以上;重金属检测结果显示蔗渣栽培灵芝主要重金属元素含量低于椴木灵芝,但微量元素Mg、Zn、Se等含量较高,其中有机硒含量为0.189 mg/g。     

部分稀土元素对灵芝多糖和三萜类物质液体发酵的影响

研究5种稀土元素(镧(La)、铈(Ce)、钕(Nd)、镨(Pr)、铒(Er))对灵芝液体发酵生产灵芝多糖产量和灵芝三萜类物质的影响。结果表明：不同的稀土元素在适宜浓度时对灵芝多糖和灵芝三萜的产量均具有一定程度的促进作用。其中稀土元素镨对灵芝胞内多糖、胞外多糖和胞内三萜的生产促进作用最明显,分别在浓度为0.01、0.001mmol/L和0.1mmol/L时,使三者产量分别达到最高的772.56、452.76mg/L和398.49mg/L,分别是对照的4.67、3.05和1.91倍;而对于胞外三萜,0.001mmol/L的镧诱导效果最好,其产量达到610.08mg/L,是对照的2.03倍。可见适宜的稀土元素及浓度可显著提高灵芝多糖和灵芝三萜的生产。     

海南栽培灵芝与野生灵芝的总三萜酸含量比较

目的:比较海南栽培灵芝与野生灵芝中总三萜酸的含量。方法:以熊果酸为对照品,5%香草醛-冰乙酸和高氯酸为显色剂,采用分光光度法在548nm波长处测定样品的吸光度值。结果:栽培海南赤芝的总三萜酸含量为1.96%,栽培信州赤芝的总三萜酸含量为1.29%,野生海南赤芝的总三萜酸含量为1.65%,野生黄边灵芝的总三萜酸含量为2.23%。野生海南灵芝的总三萜酸含量为2.00%。结论:栽培海南赤芝的总三萜酸含量高于野生海南赤芝及栽培信州赤芝,但低于野生黄边灵芝及野生海南灵芝。为灵芝的栽培和开发提供了有意义的理论依据。     

响应面法优化超声辅助提取灵芝三萜的工艺研究

以南韩赤灵芝子实体为原料,采用超声波辅助提取方法,分别研究超声时间、超声功率、乙醇体积分数和料液比对灵芝三萜得率的影响,并在单因素试验的基础上,以超声时间、超声功率和乙醇体积分数为显著因素,根据Box-Benhnken设计原理,对试验进行响应面优化设计。获得的最优工艺参数为超声时间27 min、功率160 W、乙醇体积分数87%。以最优工艺条件为参数,所得灵芝三萜最大得率为1.300 0%,实际测得三萜得率1.298 0%,与传统有机溶剂浸提法相比,超声时间短、节省溶剂用量,能源消耗少,得率更高。将提取得到的灵芝三萜化合物初步纯化后,进行体外抗氧化试验,并与传统浸提法所得灵芝三萜的抗氧化性进行对比。抗氧化活性研究主要从DPPH自由基清除率、羟自由基清除能力两个方面进行。同一处理条件下,随着灵芝三萜浓度的增加,抗氧化活性越明显。经超声处理后的灵芝三萜,其抗氧化活性在DPPH自由基清除率、羟自由基清除率方面均明显优于传统浸提法所得。     

利用中药渣培养灵芝菌及生物活性成分的研究

采用固体发酵技术,利用中药渣栽培灵芝菌。研究了灵芝菌最适的发酵条件、子实体生长条件及其生物活性成分(灵芝多糖及灵芝三萜化合物)和重金属的含量。结果表明,灵芝菌固体发酵最适温度为26～28℃,培养基含水量55%～60%,pH5.0～6.0,氧气充足,无需光照;子实体的适宜生长条件为:温度25～30℃,空气湿度90%左右,pH4.0～6.0,氧气充足,需要光照。灵芝酸多糖含量:韩芝3.35%、赤芝3.11%,甜芝4.03%。甜芝子实体中灵芝三萜含量为1.13%;重金属含量均在安全范围内。     

灵芝深层发酵中麦角甾醇含量的测定

利用HPLC法研究了灵芝真菌发酵过程中胞内外麦角固醇的含量,经紫外全波长扫描,确定测定波长为282mm,研究表明：此方法测定麦角固醇含量最大标准偏差为O．92％,得到线性回归方程为y=28685x-382．61（R=0．9998）,该回归方程在20～500嵋的范围内。精密度试验,灵芝真菌发酵胞内外麦角固醇含量RsD分别为O．40％和1．96％,说明此试验设计条件精密度良好,经加标后,麦角固醇的回收率在96．82～102．50％之间,表明此方法用于测定灵芝真菌发酵过程中麦角固醇含量准确、可行,经测定灵芝真菌发酵至120h,麦角固醇含量增至最高,胞内含量达到O．64mg／g,胞外含量达到0．07mg／mL。     

破壁对灵芝孢子粉品质的影响

以灵芝孢子粉为原料,利用微波、超声对其进行破壁,以微波和超声的时间、功率、料液比为因素,灵芝孢子粉的多糖和三萜的含量为指标,得到最佳破壁工艺为料液比20∶1 (mL/g),微波功率280 W,微波时间90 s。以微波破壁所得到的灵芝孢子粉为原料,对比破壁前后的孢子粉粒度、松紧密度、比表面积、色度、休止角并用电镜观测形态;测定破壁前后孢子粉的总脂肪、总多糖、总三萜、灰分、蛋白质、多酚等营养成分含量,比较破壁前后孢子粉的品质。结果表明,破壁后灵芝孢子粉的感官状态与未破壁孢子粉差异明显:孢子粉的比表面积、松紧密度、色度均明显增加;粒度、流动性有所减小。经过破壁后的孢子粉中脂肪、多糖、三萜、灰分、蛋白质等营养物质的含量均不同程度地提高。实验证明,微波破壁处理有助于灵芝孢子粉中三萜、粗多糖、粗脂肪等功能性成分的溶出,大大增加了灵芝孢子粉有效成分的溶出。     

破壁与去壁灵芝孢子粉的化学成分与抗氧化活性比较

本研究以去壁灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉为原料,探究不同孢子壁加工工艺对灵芝孢子粉化学成分及抗氧化活性的影响。实验对比了两种灵芝孢子粉的水分、灰分、膳食纤维、蛋白质、总三萜、总多糖、微量元素、氨基酸等主要指标及其体外抗氧化活性。结果表明,去壁灵芝孢子粉在灰分、水溶性膳食纤维、蛋白质、总多糖、总三萜和水解氨基酸的含量分别是2.227%、8.810%、15.922%、12.129%、2.556%、6.744%,均高于破壁灵芝孢子粉,其中总多糖含量较破壁提高了近12倍。三萜的色谱图显示,去壁孢子粉中含有更丰富的萜类物质。对比两种孢子粉醇提相与水提相的抗氧化活性,去壁灵芝孢子粉醇提相显示出最强的抗氧化活性,在2 mg/mL的浓度下,总还原力和DPPH自由基清除率分别为1.114和89.860%;在0.5 mg/mL的浓度下,其ABTS+自由基清除率为99.714%,与同浓度下V_C阳性对照组结果相当;在10 mg/mL浓度时,羟基自由基清除率达到84.301%。因此,去壁技术提高了灵芝孢子粉中关键物质含量,增强了其抗氧化能力。     

耐硒驯化灵芝菌种的液态发酵中硒的富集特征

对灵芝(Ganoderma lucidum)菌株在平板上做耐硒驯化,然后对驯化前后灵芝菌种液态发酵过程中富硒性能进行了比较,最后对驯化灵芝液态发酵中硒富集特征进行了研究。实验结果表明,灵芝菌种经耐硒驯化后,其生物量、菌丝体硒含量、总硒含量最高分别达到16.1 g/L,13 264μg/L和91.5 mg/L,明显优于未驯化组。对驯化灵芝液态培养过程中硒富集特征研究表明,富硒灵芝中存在硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、硒甲基硒代半胱氨酸(SeMeCys)和无机硒(Se(IV))等4种硒形态,其中SeMet、SeCys2占主要部分,分别可达硒代氨基酸总量的60%～90%、10%～40%;在培养过程中单一增加Na2SeO3添加浓度,并不能显著增加灵芝中硒代氨基酸含量,而更多以Se(IV)形式存在。     

对破壁处理灵芝孢子粉功能特性的测定与分析

采用球磨法对灵芝孢子粉进行破壁处理,测定对比灵芝孢子粉破壁前后的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分的溶出量,粗多糖和总三萜的生物活性物质溶出量,测定分析了水、醇提取物DPPH·、ABTS·清除能力和还原能力。结果表明:灵芝孢子粉破壁前后水分和灰分变化不显著,粗蛋白溶出量增加了33.96%,粗脂肪溶出量提高了2.94倍;灵芝孢子粉粗多糖和总三萜活性物质溶出量分别增加了40.90%和55.21%;破壁后灵芝孢子粉抗氧化能力显著提高。     

赤灵芝中三萜类活性成分的提取筛选和质谱分析

研究赤灵芝总三萜最佳提取工艺条件,评价三萜类化合物对脂肪氧化酶的抑制效果。采取单因素实验和响应面法分析提取时间、提取次数、液料比和乙醇浓度对赤灵芝三萜得率的影响,筛选最佳工艺参数;利用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术（HPLC-ESI-MS）对赤灵芝中三萜类提取物化学成分进行分析鉴定,以脂肪氧化酶为生物靶分子,采用超滤质谱技术筛选酶抑制剂,探究三萜类化合物对脂肪氧化酶的抑制效果。结果显示：最佳工艺条件为料液比1:30、乙醇浓度75%、提取次数3次和提取时间1.5 h;在这些条件下,总三萜得率为1.04%;从赤灵芝中筛选出5种脂肪氧化酶抑制剂,5种化合物对1.0 U/mL脂肪氧化酶活性有较强抑制作用,抑制效果的强弱顺序为灵芝酸B（52.64%）>灵芝酸C2（40.21%）>灵芝酸D2（31.25%）>灵芝酸F（12.69%）>灵芝酸A（10.82%）。实验结果表明,响应面法筛选赤灵芝三萜的提取工艺参数准确可靠,可用以赤灵芝三萜的生产制备;赤灵芝中三萜类活性成分可抑制脂肪氧化酶,表明有缓解炎症的功效,研究结果可为赤灵芝中抗炎成分的进一步研究提供一定理论基础。     

灵芝发酵小麦的营养特性与抗氧化能力

采用灵芝对小麦进行固态发酵,并对发酵前后小麦的营养成分和抗氧化能力进行了测定与比较。结果表明,小麦发酵后,蛋白质、粗脂肪、总可溶性物质、可溶性蛋白和可溶性糖的质量分数分别比发酵前提高8.1%、14.9%、837%、197%和537%,氨基酸组成与矿物质含量也发生了改变。小麦发酵后抗氧化能力显著提高。灵芝发酵小麦水提物的DPPH·清除能力、羟基自由基清除率、铁氰化钾还原力和超氧阴离子自由基清除率均显著高于小麦水提物(P 0.05)。灌胃灵芝发酵小麦水提物,可以提高D-半乳糖致衰小鼠血清和肝脏中的SOD、GSH-Px等抗氧化酶活力,降低MDA含量,说明灵芝发酵小麦可提高小鼠对氧自由基的抵抗能力,降低氧自由基过氧化损伤,延缓D-半乳糖的致衰作用。     

酸浸高压法破壁对灵芝孢子中三种主要成分变化影响的研究

研究酸浸高压法对未破壁灵芝孢子中灵芝多糖、灵芝总三萜和麦角固醇含量的影响,与未经酸浸高压的未破壁及已破壁的灵芝孢子进行含量比较。以无水葡萄糖为对照品,用紫外–可见分光光度法,对灵芝孢子的灵芝多糖含量进行测定;以齐墩果酸为对照品,用紫外–可见分光光度法,对灵芝孢子的灵芝总三萜含量进行测定;以麦角固醇为对照品,用反相高效液相色谱法,对灵芝孢子的麦角固醇含量进行测定,根据结果对三种成分含量进行比较。结果表明,经酸浸高压的未破壁灵芝孢子,其灵芝多糖的含量明显高于未经酸浸高压的未破壁及已破壁灵芝孢子,其灵芝总三萜和麦角固醇的含量明显高于未经酸浸高压的未破壁灵芝孢子。酸浸高压法可作为一种新的灵芝孢子破壁方法,该法获得的灵芝多糖、灵芝总三萜和麦角固醇的含量明显高于对照组。     

挤压处理灵芝孢子粉提取灵芝多糖

以挤压喷爆为处理方法,孢子破壁率和灵芝多糖得率为研究对象,分析水分含量、螺杆转速、温度、进料速度对灵芝孢子的破壁率和灵芝多糖得率的影响。采用正交试验优化挤压工艺条件得出：水分含量15%、螺杆转速223r/min、温度125℃、进料速度155g/min,在此条件下灵芝孢子破壁率为78.6%,多糖得率为2.219%,通过在最佳条件下进行二次挤压,灵芝孢子破壁率提高为83.48%,多糖得率为2.37%。     

不同破壁技术对灵芝孢子油提取的影响

通过比较酸热法、超声波冻融法和高能纳米冲击磨法对灵芝孢子粉破壁效果,找到适合工业化生产的孢子油提取的最佳破壁技术。结果显示:采用高能纳米冲击磨法可显著提高灵芝孢子的破壁率和孢子油得率,在球料比3∶1(质量比),球磨时间6 h的条件下,破壁率为90.36%,灵芝孢子油得率为30.79%。