高山被孢霉产孢培养基的筛选

为了促进高山被孢霉产孢,研究分析了8种常用于促进丝状真菌产孢的培养基对高山被孢霉菌丝生长和孢子产量的影响,并对产孢培养基进行了改良。结果表明,在40 g/L的玉米粉培养基中补加10 g/L葡萄糖和无机盐（硝酸盐（2 g/L KNO3）、磷酸盐（1 g/L NaH2PO4）与镁离子（0.3 g/L MgSO4·7H2O））,接种高山被孢霉后于28 ℃培养10 d,再在4 ℃培养14 d,孢子平均产量达到 8.57×106个/mL,是目前用于高山被孢霉菌株保藏的葡萄糖酵母培养基（GY）(孢子平均产量 3.85×106个/mL)的2.23倍。因此,在有少量葡萄糖和无机盐促进菌丝生长的前提下,40 g/L的玉米粉最适合高山被孢霉产孢。     

高山被孢霉突变株产花生四烯酸培养条件的研究

为了研究高山被孢霉突变株12-2-2产花生四烯酸(ARA)的培养条件,选取温度、p H、摇床转速和培养时间为4个影响因素,以生物量、油脂产量和ARA产量为综合评价指标,进行单因素实验和正交实验。结果表明,影响高山被孢霉突变株12-2-2产ARA的因素主次顺序为:温度﹥培养时间﹥摇床转速﹥p H;最优培养条件为:温度26℃,培养时间7 d,摇床转速160 r/min,p H 8。在最优培养条件下,高山被孢霉突变株12-2-2的生物量为32.31 g/L,油脂产量为12.98 g/L,ARA产量为5.12 g/L。     

高山被孢霉生产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展

高山被孢霉能发酵生产多不饱和脂肪酸如花生四烯酸等,具有安全性好、产率高、生产易控制等优点,适宜于工业化生产。本文论述了高山被孢霉产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展,着重于论述发酵过程中碳源、氮源、溶解氧及培养条件等对产物产率的影响作用研究。     

高山被孢霉产花生四烯酸的代谢研究

研究了3个批次的高山被孢霉发酵产花生四烯酸(ARA)过程中,生物量、糖耗、氮耗、油脂含量和ARA含量的变化.结果表明,发酵7d的生物量(干重)为30.650 g/L,糖耗85.33％,氮耗78.81％,发酵液油脂含量17.142 g/L,ARA含量7.482 g/L.     

肉毒碱脂酰转移酶基因沉默对高山被孢霉脂质积累的影响

高山被孢霉是一种工业化生产多不饱和脂肪酸的产油真菌。通过分析高山被孢霉脂肪酸氧化途径中相关基因的转录水平,发现肉毒碱脂酰转移酶(carnitine acyl-transferase,CAT)基因与高山被孢霉脂肪酸氧化紧密相关,进一步利用RNA干扰技术实现在高山被孢霉中CAT基因的沉默,分析发现,在高山被孢霉重组菌中,CAT活性下调了33.3%,总脂肪酸积累量相比野生型菌株提高38.1%,表明通过抑制β氧化途径可以提高高山被孢霉的脂质积累量,这为推动高山被孢霉在脂质生物合成工业化方面的应用奠定了理论基础。     

高山被孢霉谷氨酸代谢调控产脂的初步研究

为解析谷氨酸代谢对产油丝状真菌高山被孢霉(Mortierella alpina)脂质合成的影响,该文考察了补加谷氨酸条件下高山被孢霉谷氨酸代谢相关酶的基因转录水平、酶活性水平和总脂产量等指标。结果显示,补加谷氨酸显著影响了高山被孢霉胞内谷氨酸代谢相关基因的转录水平,NADP⁺型谷氨酸脱氢酶和谷氨酸脱羧酶活性的增加为脂肪酸从头合成提供了充足的还原力,这使得细胞总脂含量提升了3 g/L(约占干重比例10%)。该研究为氨基酸介导的微生物脂质合成机制解析提供了参考。     

高山被孢霉发酵生产花生四烯酸发酵条件优化

通过对一株高山被孢霉菌株（Mortierella alpina）发酵生产花生四烯酸（ARA）的摇瓶培养研究,以菌体干质量、出油率和ARA含量为标准,确定了其最佳发酵工艺条件。摇床实验确定的最佳培养条件为摇床转速180 r/min,培养基碳氮比为3.0,发酵温度为26 ℃,pH 值为6.2,发酵周期为5 d。在此发酵条件下,在10 L自动发酵罐进行放大发酵试验,菌体干质量、出油率和ARA含量分别高达45.4 g/L、24.1 g/L和49.6%。     

高山被孢霉产花生四烯酸的发酵和老化工艺

高山被孢霉对于淀粉质原料具有优良的利用能力。采用经淀粉酶液化的玉米粉-豆粕培养基,研究了高山被孢霉在5 L容积机械搅拌罐液态发酵的主要参数,如搅拌转速和通气体积比对于高山被孢霉发酵产花生四烯酸的影响,得到最优的搅拌转速和通气体积比,分别为200 r/min和1∶1。研究发现,采用发酵罐培养5 d的菌丝体,最佳的老化温度和保温时间分别是20℃和5 d。本研究把谷物粗原料成功用于高山被孢霉发酵产花生四烯酸,经发酵罐优化和菌体老化后的花生四烯酸产量达到11.7 g/L,菌体老化可以在保持产量的同时缩短发酵周期,有效降低生产成本,有望实际用于花生四烯酸的工业化生产。     

高山被孢霉发酵生产多不饱和脂肪酸的初步研究

高山被孢霉具有很强的脂肪合成能力,并可积累多种多不饱和脂肪酸,为进一步提高高山被孢霉多不饱和脂肪酸产量,对碳源、氮源等对高山被孢霉菌体生长和多不饱和脂肪酸(PUFA)生产的影响进行分析。研究结果表明:甘油可以作为葡萄糖的替代物用于高山被孢霉工业化发酵生产多不饱和脂肪酸;当脱脂豆粉与硝酸钾的比例为2∶1时,此时菌体形态最利于脂肪酸生产,脂肪酸和花生四烯酸的产量分别为11.20g/L和5.89g/L,花生四烯酸的产量提高了4.0倍。      

高山被孢霉对5种抗生素的敏感性研究

以固体培养基上菌落数为指标,研究高山被孢霉在5种抗生素(氨苄青霉素、红霉素、潮霉素B、卡那霉素和氯霉素)的不同浓度下的生长情况。结果表明:与空白对照组相比,高山被孢霉对潮霉素B最敏感,当浓度300μg/m L时,致死率为91.7%;对卡那霉素和红霉素较敏感,在400μg/m L卡那霉素中的致死率为73.3%,在400μg/m L红霉素中的致死率达到70%;对氨苄青霉素和氯霉素不敏感,300μg/m L氨苄青霉素、250μg/m L氯霉素不能抑制高山被孢霉生长,致死率只有20%以下。     

不同碳、氮源质量浓度对高山被孢霉脂质积累及SNF1复合体转录调控的影响研究

高山被孢霉(M.alpina)是一株具有较强脂质合成能力的产油微生物,其脂质积累受培养基中碳、氮源调控。探究了不同葡萄糖和酒石酸铵质量浓度对M.alpina生长及脂质积累的影响,并进一步研究不同碳、氮源质量浓度下M.alpina SNF1复合体各亚基的转录水平。结果表明:初始酒石酸铵质量浓度一定时,M.alpina脂肪酸含量随碳氮比(C/N)的增加而提高,C/N为24.6时其脂肪酸含量比C/N为4.6时提高42.6%,初始葡萄糖质量浓度一定时,氮源限制下(C/N=76.7)M.alpina脂肪酸产率达到2.6 g/L,是氮源存在时的1.5~3.2倍,与葡萄糖相比氮源水平对M.alpina脂质积累影响更为显著。氮源一定时高葡萄糖质量浓度(C/N=24.6)下SNF1复合体各亚基转录水平比对照组提高13.9~20.5倍;而氮限制导致的高C/N同样可促进其转录水平的提高。高C/N和氮限制均属于营养失衡信号,说明M.alpina SNF1转录水平的变化是其对胞外营养水平的响应方式,并与脂质积累水平具有相关性。     

高产花生四烯酸的高山被孢霉突变株的选育

为获得高产花生四烯酸的高山被孢霉突变株,利用~(60)Co-γ射线对实验室保藏的高山被孢霉M12进行辐照诱变育种。在辐照剂量为1、2和3 kGy时,致死率分别为73.6%、80.6%和93.8%。以生物量、含油率和花生四烯酸产量为综合评价指标,经初筛和复筛,选育出了一株M12-2-2突变株。经摇瓶发酵,该突变株的生物量为30.73 g/L,含油率为40.51%,ARA产量为4.75 g/L,其ARA产量比出发株提高了1.65倍。经十代传接培养后,该突变株的遗传性能稳定。     

发酵法生产新型营养强化剂--花生四烯酸

本文研究了温度、PH、培养时间以及碳源、氮源等因素对高山被孢霉菌I49-N18的细胞生长、产油脂和花生四烯酸的影响,确定了该菌株发酵生产花生四烯酸的最佳培养基和最佳培养条件,使得其干菌体重（DW）可达25.9g/l,总脂（TL/DW）含量达36.6％,花生四烯酸（AA/TL）含量达71.0％。     

基于pH值调控的高山被孢霉发酵生产花生四烯酸的补料工艺

为了提高高山被孢霉（Mortierella alpina）发酵生产花生四烯酸（arachidonic acid,ARA）的产量,研究pH值控制及不同底物流加方式对M. alpina产ARA的影响。在0～90 h菌体生长阶段pH值维持在6.0,90 h以后上调至6.5,并在此基础上考察了3 种补料方式（一次性补料、恒定葡萄糖速率补料和pH值反馈补料）对菌体生物量、油脂产量及ARA产量的影响。结果表明：发酵过程中pH 6.0时可以促进菌体的生长,而pH 6.5时有利于油脂的合成。与其他补料方式相比,pH值反馈补料不仅使发酵周期缩短至160 h,而且在该条件下得到ARA最大生产强度及产量,分别为1.32 g/（L·d）和8.82 g/L。     

利用乙醇胁迫作用提高花生四烯酸产量

利用乙醇胁迫作用提高花生四烯酸(AA)产量。探讨了乙醇加入时间及加入量,并通过发酵后期降低转速延长了乙醇胁迫作用时间,确定了降低转速的时间点。结果表明,发酵5d后添加4%的乙醇,并在5.5d后降低转速减少机械力所带来的对发酵后期菌丝体的破坏作用,最终将AA产量从10.6g/L提高到17.6g/L。     

提高深黄被孢霉菌丝细胞油脂合成总量及其不饱和脂肪酸酯含量的研究

葡萄糖的添加方式对深黄被孢霉（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌａｉｓａｂｅｌｉｎａ）Ｍ０１８菌株细胞油脂的生物合成影响显著，葡萄糖流加（３０ｈ）培养所得菌体细胞油脂含量达８０．５％，比消前一次性加入培养所得菌体细胞油脂含量提高了１７．２％。Ｚｎ２＋可显著提高油脂的碘值，但对细胞油脂合成总量影响甚微。柠檬酸钠有利于菌丝细胞生长，但不利于油脂的生物合成。培养温度在２０～２５℃之间适合菌丝细胞的生长，也有利于细胞合成油脂，低温有利于不饱和脂肪酸酯的合成。Ｍ０１８菌株将葡萄糖转化合成油脂的同时，菌丝细胞形态发生显著改变，丝状细胞逐渐膨大呈球形或椭圆形。以乙醇和正已烷对菌体进行分步抽提，油脂得率最高。     

碳氮比(C/N)对高山被孢霉中花生四烯酸积累的影响

为探究氮源及碳氮比(C/N)对高山被孢霉(Mortierella alpina)中花生四烯酸(ARA)积累的影响,选取无机氮硝酸钠和有机氮尿素为氮源,分别于高、中、低C/N条件下(C/N为40:1、20:1和10:1)进行M.alpina发酵实验.分析发酵过程中菌体生物量(DCW)、发酵液残C量、发酵液残N量的变化,并...