大米蛋白酶解产物抗氧化活性及功能性质研究

采用不同的蛋白酶（木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、精制中性蛋白酶和碱性蛋白酶）水解大米蛋白,以制备抗氧化活性肽。结果发现,精制中性蛋白酶水解大米蛋白得到的产物对DPPH自由基的清除能力最强,而且水解度其清除能力影响显著。同时测定了酶解产物的还原能力、金属离子螯合能力以及在Fe2+引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,结果表明,此酶解产物表现出一定的还原能力,能够抑制由Fe2+引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,具有一定的金属离子螯合能力。结果表明,这种肽具有一定的抗氧化活性,具有良好的功能特性。      

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

乳清蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究在不同的酶种类、[E/S]、酶解时间下,乳清蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,在胃蛋白酶37℃,[E/S]为0.15%,水解温度水解时间2 h;胰蛋白酶[E/S]为0.4%,水解温度50℃,水解时间2 h的条件下,乳清蛋白的酶解物有较强的抗氧化活性。     

响应面法优化杏仁蛋白酶解工艺及其抗氧化活性研究

研究了杏仁蛋白的酶解工艺及其抗氧化活性。在单因素试验基础上,通过Box－Behnken中心组合设计优化酶解条件,确定出最佳酶解条件为pH14．72、温度54℃、底物浓度2．8％、酶底比1．2％,在此最优条件下水解度（DH）为27．12％。杏仁蛋白酶解液对DPPH·自由基的清除能力最强,其次为0：一‘自由基,最弱的为·OH自由基,清除率分别为85．92％、73．97％和65．92％．     

罗非鱼鱼肉及组分蛋白酶解产物的抗氧化特性

采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究比较不同蛋白酶在1、2、4、6、8h对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:3种酶的酶解产物都具有一定的抗氧化活性,中性蛋白酶酶解产物的水解度和蛋白回收率最高,胃蛋白酶酶解产物对DPPH自由基和羟自由基的清除效果最好;综合各项指标选择中性蛋白酶对罗非鱼肉的组分蛋白(肌原纤维蛋白、肌浆蛋白、基质蛋白)进行4h酶解,研究比较不同组分蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:组分蛋白中基质蛋白酶解产物的蛋白回收率最高,为89.8%,肌原纤维蛋白酶解产物的水解度最高,为10.1%,肌浆蛋白酶解产物的抗氧化活性最好,羟自由基和DPPH自由基的IC50值分别为12.352mg/m L和3.554mg/m L。      

小黄鱼蛋白酶解液抗氧化活性研究

本文以小黄花鱼为原料,利用蛋白酶解技术对小黄鱼蛋白进行酶解,分别选取4组水解度不同的蛋白酶解液,测定其对羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除能力,以评定其抗氧化效果。结果表明:小黄鱼蛋白酶解液对羟自由基、DPPH自由基的清除效果比较明显,对超氧阴离子也有一定的清除效果。由此可知小黄鱼酶解液是一种比较好的抗氧化剂,在功能性食品中作为添加剂具有较好的应用前景。     

沙虫蛋白酶解产物抗氧化与免疫调节活性的研究

采用复合蛋白酶对沙虫(Sipunculus nudu)进行酶解,得到沙虫蛋白酶解产物(SNPH),并对其氨基酸组成进行了分析。采用高效液相凝胶色谱法对SNPH的相对分子质量分布进行了测定。采用紫外分光光度法测定SNPH对DPPH自由基,羟基自由基、超氧阴离子的清除能力及其还原能力。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SNPH在对刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响。结果显示SNPH中必需氨基酸和疏水氨基酸含量较高,小分子肽含量较高,相对分子质量在120~1800之间的物质占85.11%。抗氧化活性实验显示SNPH对DPPH自由基,羟基自由基和超氧阴离子具有较强的清除效果,且清除率与浓度存在一定的量效关系。免疫调节活性试验表明SNPH对Con A和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖具有协同刺激作用。SNPH具有较好的抗氧化和免疫调节活性。     

牡蛎蛋白酶解物的制备及其抗氧化活性研究

选用中性蛋白酶,研究了前处理方法、E/S、pH、温度和时间对酶解牡蛎蛋白效果的影响,制备牡蛎蛋白酶解物,分析其游离氨基酸含量及分子量分布,体外实验测定其抗氧化活性。结果表明,酶解前100℃热处理10min能够提高酶解物中蛋白肽的含量,E/S为2.0%、pH7.0、温度50℃、时间3.0h为酶解的适宜条件,其DH达到14.95%;所制备的EHOP的主要成分为小分子肽类物质,分子量主要集中在500～3091u,EHOP的还原性较强,且对羟基自由基和超氧阴离子均有较好的清除能力,EHOP浓度为25mg/mL时,其还原力A700为0.44,超氧自由基清除率和·OH清除率分别为68.86%和21.20%。      

鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析对鹅肉蛋白酶解工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、pH值、固液比、酶添加量对鹅肉蛋白水解度和抗氧化活性的影响。结果表明:鹅肉蛋白最佳酶解条件为酶解温度53℃、酶解液pH10.5、固液比1:3(m/V)、酶解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下,酶解液对Fe3+还原力为0.402,水解度可达34.74%。     

南瓜籽蛋白酶解液的超滤分离及其抗氧化活性研究

采用超滤技术分离南瓜籽蛋白酶解液,通过研究操作压力、料液浓度、pH和时间四个因素对膜通量和膜效能的影响,依次得到截留分子量分别为10、4ku两次超滤的最佳工艺条件,并比较超滤前后酶解液的抗氧化活性。结果表明,截留分子量为10ku的超滤膜的操作压力为0.25MPa、料液浓度为3.0%、料液pH为7,操作时间为60min;截留分子量为4ku的超滤膜的操作压力为0.20MPa、料液浓度为2.0%、料液pH为7,操作时间为60min。经过超滤以后分子量小于4ku的组分具有更强的清除自由基的能力,其中清除50%DPPH自由基所需的多肽浓度即半抑制浓度IC50值为2.76mg/mL、清除羟基自由基（·OH）的IC50值为2.91mg/mL、清除超氧阴离子自由基（O2-·）的IC50值为23.58mg/mL,同时对铁离子还具有显著的还原能力,吸光度为0.5时所需的多肽浓度为9.43mg/mL。      

贻贝蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性研究

比较了6种不同的蛋白酶(胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶)对贻贝粗蛋白的酶解效果,确定碱性蛋白酶为最适用酶。用此酶制备不同水解度(DH 6%、DH 11.5%、DH16%、DH 20%、DH 25%)的贻贝蛋白酶解物,考察不同DH酶解产物的抗氧化活性。试验结果表明:贻贝酶解产物具有较强的抗氧化活性,并呈一定的量效关系;当DH为25%时,贻贝酶解物对DPPH自由基、超氧自由基、羟基自由基的清除率最高,分别为77.4%、75.2%、43.4%,同时具有最强的金属螯合率(64.7%);而DH为16%时,酶解物对亚油酸的过氧化抑制作用较还原型谷胱甘肽强,达65.6%。DH对酶解产物的抗氧化活性有一定的影响,但在不同的抗氧化体系中,影响趋势不一致。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

鸡肉蛋白的酶解及其抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析法对酶解鸡肉蛋白制备抗氧化肽的工艺进行优化。在单因素试验的基础上,以还原能力和超氧阴离子自由基清除率为指标,研究酶解时间、加酶量、温度对木瓜蛋白酶酶解鸡肉蛋白的酶解液抗氧化性的影响。结果表明,酶解鸡肉蛋白制备抗氧化肽的工艺条件为pH6.0、液固比2:1(mL/g)、酶解时间6.15h、加酶量1200U/g、温度51.2℃,此时还原能力达到0.802,超氧阴离子自由基清除率达到73.9%。     

茶渣蛋白的提取、有限酶解及抗氧化性质研究

目的:茶渣含有丰富的蛋白质,本研究旨在利用废弃茶渣,开发一种新型、绿色、天然的抗氧化剂。方法:利用碱溶酸沉法提取茶渣蛋白,酶法水解后对茶渣蛋白多肽复合物的体外抗氧化性进行研究,并与传统的合成抗氧化剂VC、BHT进行抗氧化效果的比较。结果:茶渣蛋白提取的最佳工艺为固液比1:40(W/V),提取时间60min,碱浓度0.1mol/L,提取温度90℃,最佳提取次数1次,最佳沉淀pH范围3.0～4.0,在以上条件下茶渣蛋白的提取率达76%;复合蛋白酶水解茶渣蛋白的最佳酶解工艺条件为:酶解温度50℃、最适pH7.0、酶/底物6000U/g、底物质量分数1.5%、水解时间20min;有限酶解所得酶解度为9%。0.1mg/mL多肽复合物DPPH·自由基清除率为90.30%,1.0mg/mL多肽复合物羟自由基(·OH)清除率为65.18%。在亚油酸体系中,多肽复合物的抗氧化性高于维生素C,略低于BHT。结论:茶渣蛋白多肽复合物具有较高的安全性及抗氧化性,有取代合成抗氧化剂的潜力。     

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明：采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5 和压力0.25MPa 条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D 及1000D 以下的组分分别从11.38% 和12.64% 提高到32.83% 和 45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。     

双酶法制备豌豆肽及其抗氧化活性

研究豌豆蛋白双酶水解的最佳工艺条件及产物的抗氧化活性。以豌豆蛋白粉为原料,通过单因素试验和正交试验优化出双酶分段水解豌豆蛋白的工艺条件,并初步研究豌豆肽的抗氧化活性。结果表明,双酶法制备豌豆肽的最佳工艺条件为:底物浓度10%,复合蛋白酶加酶量3.0%,pH 9.0,温度55℃,酶解3.5 h;用碱性蛋白酶酶解,加酶量3.0%,pH 9.5,温度50℃,酶解4.0 h。由此酶解得到水解物的水解度为39.61%。水解液蛋白浓度0.125 mg/mL时,其对Fe2+螯合能力为83.22%。试验表明和单酶水解相比,双酶水解工艺可提高豌豆蛋白的水解度和抗氧化活性。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

高压酶解大米蛋白抗氧化活性及其分子质量分布

以大米蛋白为原料,经不同压力(0.1、300、500 MPa)处理后,用Alcalase酶水解.以酶解物的还原力为指标,通过正交试验方法分别优化了3种压力条件下的酶解条件;用高效液相色谱分析了主要酶解产物的分子质量分布.结果表明,3种预处理蛋白在各自优化条件下制备的酶解物在1.0 mg/mL时的最大还原力分别为0.125、0.149、0.158.常压(即0.1MPa)对照组中10～15 ku、1～10 ku和1 ku以下等3段分子质量组分所占比例分别为26.6％、46.9％、26.5％;300 MPa和500 MPa组中的含量分别依次为16.5％、39.3％、44.2％和11.8％、33.1％、55.1％;可见,酶解物还原力大小与其分子质量的分布之间有一定的关联性.