单环刺螠废弃内脏中粗多糖的提取工艺优化

利用热水浸提的方法进行单环刺螠（海肠）废弃内脏中多糖的提取。采用单因素试验和L₉（3⁴）正交试验设计,研究不同pH值、料液比、提取时间和提取温度对单环刺螠内脏多糖提取率的影响。并采用Fenton体系测定单环刺螠内脏多糖对羟自由基（·OH）的清除作用。单环刺螠内脏多糖提取的最佳工艺条件为pH10、料液比1:40（g/mL）、时间3h、温度60℃。单环刺螠内脏多糖在质量浓度为50μg/mL时,对羟自由基清除能力可达60%,且具有剂量效应。     

单环刺螠体壁胶原蛋白的提取及其理化性质

采用0.5mol/L醋酸提取,结合NaCl沉淀法从单环刺螠(Urechis unicinctus)的体壁中提取酸溶性胶原蛋白(ASC),并对其理化性质作初步研究。紫外光谱分析表明ASC的特征吸收波长位于228nm,初步推断所提取的蛋白为典型的胶原蛋白;氨基酸组成分析表明ASC为典型的Ⅰ型胶原蛋白;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明ASC有两条不同的α链(α1和α2链)、β链和γ链,其胶原蛋白中含有二硫键;傅里叶红外光谱(FTIR)分析表明其存在三螺旋结构;示差扫描量热仪(DSC)分析表明热变性温度(td)和热收缩温度(ts)分别为33.6℃和67.5℃。     

单环刺螠内脏多糖结构的分析及其对脂质过氧化物的清除作用

为开发单环刺螠内脏中活性多糖成分,利用两步酶解法提取单环刺螠多糖,对其单糖组成、分子质量和连接方式等理化性质和结构特征进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其活性进行初步评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠内脏多糖得率为6.2%。单环刺螠内脏多糖（viscera polysaccharide,VP）分子质量约为4.1×103 u,从单糖组成可以看出,VP为组成复杂的类糖胺聚糖,主要含有葡萄糖（Glc）,其次还含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成物质的量比为n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）＝1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。VP还含有少量的硫酸基,含量为8.9%。葡萄糖作为VP中最主要的单糖,其连接方式主要为Glcp(1→、→4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp(1→和→3,6)-Glcp(1→。甘露糖主要含有Manp(1→、→2)-Manp(1→和→6)-Manp(1→连接方式。半乳糖含有Galp(1→和→4)-Galp(1→连接方式。而岩藻糖主要含有→4)-Fucp(1→,另外还有Fucp(1→、→3)-Fucp(1→和→3,4)-Fucp(1→连接方式。类糖胺聚糖具有丰富的生物活性,对VP进行初步体外抗氧化活性研究表明,其具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为2.47 mg/mL。     

单环刺螠糖胺聚糖抗凝血机制初步研究

采用人乏AT-Ⅲ血浆、乏HCII血浆及两种肝素辅因子均缺乏的血浆,探讨单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血途径;通过纠正乏因子血浆所致的凝固时间延长的能力测定人血浆凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性,凝固法测定纤维蛋白原浓度;体外复钙凝血实验,研究糖胺聚糖对复钙凝血时间的影响;甲基百里酚蓝比色法测定大鼠和小鼠血清中钙离子浓度。结果表明:单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血酶作用主要呈AT-Ⅲ依赖性,并能够钝化肝素辅因子Ⅱ抑制凝血酶的活性;单环刺螠糖胺聚糖显著降低血浆凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的活性（p<0.05）;糖胺聚糖可通过屏蔽血液中Ca2+,延长大鼠血复钙凝血时间,极显著降低大鼠和小鼠血液中的钙离子浓度（p<0.01）,且其降低血液钙离子浓度的作用极显著优于肝素钠（p<0.01）。      

单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

菠萝蛋白酶工业化提取工艺的改良及酶学性质研究

以菠萝茎为原料,利用微滤除杂、超滤浓缩分离得菠萝蛋白酶浓缩液,再通过硫酸铵法进行沉淀,最后进行真空冷冻干燥制取菠萝蛋白粗酶;而为了验证其酶学性质,采用SephadexG-100柱层析和DEAE-52离子交换层析制得纯度较高的菠萝蛋白酶。结果表明:菠萝茎打浆后原液通过微滤除杂、超滤浓缩,再采用90%硫酸铵沉淀等工序后,纯化倍数达1.44,是目前工厂制酶的1.19倍,酶活收率与原液相比只降低9%,具有工业化生产的优越性;经SephadexG-100柱层析和DEAE-52柱层析后,达到电泳纯,可满足医药用酶所需,存在很好的市场应用价值;且该菠萝蛋白酶的酶学性质与有关报道基本一致,最适反应pH在5～6之间,最适温度60℃,重金属离子如Cu2+、Fe2+、Pb2+等对菠萝茎蛋白酶活抑制较大,而Na+、K+、Ca2+则表现出不同程度的激活作用。      

金鲳鱼内脏酸性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

以金鲳鱼内脏为原料,依次采用p H7.0的磷酸钠缓冲液浸提,0⁵5%硫酸铵沉淀,Sephadex G-100和Sephadex G-50凝胶过滤法得到纯化的酸性蛋白酶,并研究了其酶学性质。结果表明,纯化酶的分子量为18.5 ku,最适p H为4.0,最适温度为35℃,具有较好的酸稳定性和耐盐能力;以血红蛋白为底物时,该蛋白酶的米氏常数Km为10.13 g/L;胃蛋白酶抑制剂（pepstatin A）对该酶活性有抑制作用,而乙二胺四乙酸（EDTA）、反-环氧丁二酰基-L-亮氨酰胺基（4-胍基）丁烷（E-64）和苯甲基磺酰氟（PMSF）对此酶活性基本无影响,据此推断该蛋白酶是一种天冬氨酸蛋白酶;此酶对罗非鱼鱼皮明胶的酶解能力强于猪胃蛋白酶,与木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的能力相近。      

冷冻干燥和热风干燥单环刺螠产品品质分析

比较冷冻干燥法和热风干燥法制备的单环刺螠干制品的感官品质、氨基酸组成及一些无机元素含量。两种方法制得的干制品中氨基酸含量分别达到57.83%和55.28%,其中呈味氨基酸含量分别达到32.44%和30.81%,必需氨基酸含量和比值与人体模式接近;干制品中钙和锌含量较高,且都含有铁和硒,冷冻干燥制品中铁含量明显高于热风干燥制品。结果表明,冷冻干燥法制得的干制品的感官品质、氨基酸组成及无机元素含量均优于热风干燥制品。      

壳聚糖对无水保活单环刺螠品质的影响

目的:降低单环刺螠运输成本,减少单环刺螠营养损失。方法:采用壳聚糖对单环刺螠进行前处理,测定无水保活前、后及复水后3种状态下单环刺螠的主要营养及生理指标变化。结果:壳聚糖保活单环刺螠的较适质量浓度为3 g/L,经壳聚糖前处理后,无水保活64 h后存活率为67%,壳聚糖处理后的试验组其存活率、肌糖原、持水力、水分、乳酸含量均显著性高于对照组(P＜0.05);与未复水相比,复水后,试验组和对照组蛋白质、乳酸、脂肪、水分含量均极显著下降(P＜0.01)。结论:壳聚糖处理提高了无水保活单环刺螠的存活率及品质。     

单环刺螠体壁肌酶解工艺参数的研究——动物蛋白水解酶

烟台海肠即单环刺螠,为国家地理标志农产品,以其体壁肌为原料进行酶解工艺参数研究.采用动物蛋白水解酶进行酶解,研究发现酶的添加量、pH、酶解时间、酶解温度对氮收率和水解度均具有极显著影响,此酶的适宜添加量为2％,pH为7.0,酶解时间为4h,酶解温度为50℃.在此适宜条件下,单环刺螠体壁肌的氮收率和水解度分别达到94.45％和48.17％,体壁肌中的蛋白质几乎被完全水解到水解液中.     

响应面法优化开发单环刺螠罐头食品

为开发一种新型、营养的单环刺螠加工产品,该研究利用响应面法对单环刺螠罐头食品的加工工艺进行优化,在单因素试验基础上,采用三因素三水平的响应面分析法,以感官评分为响应值,研究杀菌温度、酱汁浓度、单环刺螠寸段长度对单环刺螠罐头感官品质的影响。结果表明,单环刺螠罐头的最佳工艺条件为杀菌温度116℃、酱汁浓度56.5%、单环刺螠寸段3.7 cm,在此条件下的感官评分为83.1。     

单环刺螠体壁肌酶解产物的营养评价及溶解性分析

通过测定单环刺螠体壁肌水解液的氨基酸组成、NSI、TCA-NSI,计算AAS和EAAI值,分析水解液的营养品质和溶解性。结果表明,水解液中18种氨基酸种类齐全,鲜味氨基酸含量丰富,其中Glu含量最高,为218.263mg/100mL,其次为Gly和Ala,再次为Asp,水解液具有浓郁的鲜美味,是良好的海鲜调味料基料。必需氨基酸评分为96~141,Leu和Ile是两种限制性氨基酸,lys含量丰富,EAAI达到86.50,EAA含量丰富,营养价值高。pH为4.5~8.0时,水解液的NSI达到97%以上,pH为7.0时NSI最高,为99.65%,且TCA-NSI也高达99.60%,水解液具有高溶解性能。     

单环刺螠体壁多糖的组成分析及基于MCM-41的吸附富集研究

本文通过胃蛋白酶酶解法提取了单环刺螠体壁多糖,进行了组成分析,并从吸附动力学、吸附热力学的角度,研究了介孔材料MCM-41对多糖的吸附.组成分析结果显示,多糖中总糖含量为(78.82％±1.40％),蛋白含量为(10.5％±1.07％),硫酸根含量为(0.52％±0.06％);单糖组成分析结果显示,多糖主要由葡萄糖、甘...     

海参体壁粗蛋白酶的提取及酶学性质研究

研究了海参体壁粗蛋白酶的提取方法和酶学性质，最佳提取条件为紫外线下照射30min，硫酸铵饱和度梯度为40％～60％。粗蛋白酶的最适pH值为5．0，最适反应温度为50℃，酶在50℃以下稳定性良好。在pH1．0-7．0范围内，Ca^2＋对酶有激活作用，Mn^2＋、Cu^2＋对酶有抑制作用。提取的海参体壁蛋白酶是一种含有巯基的，类似胰蛋白酶的酶类。     

鱿鱼内脏蛋白酶的提取工艺研究

本文以鱿鱼内脏为原料提取蛋白酶.考察了各因素对提取效果的影响,包括用于提取的NaCl溶液浓度、内脏和提取液的固液比、提取温度、提取时间等.此外,根据蛋白质等电点沉淀原理,调粗酶液的pH值去除杂蛋白;并进一步比较了各种絮凝剂去除粗酶提取液中杂蛋白的效果.结果表明:NaCl溶液浓度为0.5％,固液比为1.0∶1.5,常温下提取60 min可达到较好的提取效果,蛋白酶的回收率达到96.06％,比酶活达到1.33 U/mg.调粗酶液的pH值为4.5左右,杂蛋白去除效果较好;Fe2(SO4)3是较好的絮凝剂,向粗酶液中添加1％ Fe2(SO4)3溶液,当添加比为4:1(V/V,粗酶液Fe2(SO4)3溶液)时,进一步去除杂蛋白的效果较好,蛋白酶的回收率达80.33％,比酶活达到9.37 U/mg.     

酶解法提取小黄鱼内脏鱼油工艺的研究

以小黄鱼内脏为原料,对碱性蛋白酶的水解工艺条件进行优化,确定了最佳水解工艺条件为每克原料1 100 U酶用量,酶解温度50℃,酶解时间2.5 h,液固比5∶1(mL/g),最大提油率为72.71%;同时对所提取的鱼油的理化指标进行评定,符合二级鱼油的标准。     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化,获得接近电泳纯蛋白.通过SDS PAGE测得相对分子质量为24500.木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白,含有质量分数20.24%的糖.O 糖基化能增加木聚糖酶的活性,O 和N 糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性.5min反应,草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高.在此条件下,该酶的Km值为3.87mg/mL,Vmax为1250IU/mg.纯酶的稳定pH值为6.54,57℃时半衰期为1h.     

单环刺螠内脏蛋白酶的分离纯化与酶学性质研究

以单环刺螠内脏为原料,对提取的蛋白酶的分离纯化条件及酶学性质进行研究。经硫酸铵纯化、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE-52阴离子交换层析得到单环刺螠内脏蛋白酶LPN2。SDS-PAGE电泳及高效液相色谱(HPLC)显示该酶纯度较高,分子质量约59 ku。其最适温度为50℃,最适p H范围6~8。丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF)、金属蛋白酶抑制剂(EDTA)、Ca2+、Zn2+和Ba2+抑制蛋白酶LNP2的酶活,Fe2+在低浓度下对该酶有激活作用。根据水解度、风味感官分析、酶解前后游离氨基酸、分子质量分布结果,蛋白酶LPN2与中性蛋白酶作用方式相似,推断蛋白酶LPN2具有内肽酶的特性。     

细菌木聚糖酶粗酶的提取及性质的研究

在 2 0℃条件下 ,采用相对饱和度为 50 %的 (NH4) 2 SO4一步盐析并经 4 5～ 50℃烘干 1 0h得到木聚糖酶粗酶粉 .初步研究了该酶的一些基本性质 ,结果表明 ,该酶在 55℃下 ,pH值为 4 .6～1 0 .5之间较稳定 .最适作用温度与 pH值分别为 50℃和 7.6.该粗酶产品适合造纸工业的纸浆处理 .     

章鱼肠道产蛋白酶菌的筛选、产酶条件及酶学性质

采用检测水解透明圈和测定蛋白酶活力的方法,从章鱼肠道中分离筛选出一株高产蛋白酶的菌株QDV-3,并对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明:QDV-3菌株在以果糖为碳源,蛋白胨为氮源,培养基初始pH8.0,培养温度30℃的条件下振荡培养3.5d时,所产蛋白酶活力最高,Mn2+和Ba2+对菌株产蛋白酶有促进作用。所产蛋白酶在SDS-PAGE电泳上显示至少有5种蛋白酶,分子质量范围为32.4～124.2kD,蛋白酶的最适作用温度为50～60℃,最适作用pH值为9～11,在50℃条件下保温1h,剩余酶活力为95%,热稳定性较好。