泰山灰树花液体深层发酵培养基的优化及海藻糖的提取

本文对泰山灰树花液体发酵培养基的配方进行了优化,并对灰树花中海藻糖的测定条件和提取工艺进行了初步研究.结果表明,优化的发酵培养基组成为:马铃薯200g/葡萄糖40g,麸皮25g,板粟壳150g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,水1L,茵丝体生物量为15.1 g/L.用0.2%蒽酮-硫酸溶液(料液比1∶4)测定茵体中海藻糖含量的条件:吸收波长625 nm,加热时间2 min.海藻糖提取的工艺参数是:冰水浴,0.5mol/L三氯乙酸20mL,提取次数为3次,每次提取时间20 min,共从1.0g湿茵丝中提取到14.522mg海藻糖.     

灰树花深层发酵菌丝体多糖的酶法提取及其抗肿瘤作用

对灰树花深层发酵菌丝体多糖的酶法提取工艺及其抗肿瘤作用进行了研究 .结果表明 :利用复合酶法处理并结合热水浸提 ,缩短了提取时间 ,且能显著提高多糖的提取率 ,多糖提取率达7.4 % ,效果优于其他浸提方法 .动物体内实验证明 ,腹腔注射菌丝体多糖对小鼠移植性肿瘤S180有明显的抑制作用 ,抑制率达 57.6 %～ 6 6 .7% .     

种子深层培养对灰树花生长的影响

灰树花是食药两用真菌中的极品,其中灰树花多糖具有抗辐射、抗氧化、抑制肿瘤、激活免疫等功能.研究种子深层培养对灰树花生长的影响.结果显示:灰树花最佳种子培养基为马铃薯-葡萄糖-蛋白胨培养基;种子培养基初始pH为6.0;种子培养温度为25℃,最佳接种时间为108 h;接种量为10%.在此条件下进行深层发酵,灰树花菌丝体干重和胞外粗多糖的含量分别为5.325g/L和0.53g/L.     

灰树花发酵动力学研究

对灰树花真菌发酵过程和发酵动力学进行了研究。基于Logitic方程和Luedeking-Piret方程,得到了描述发酵过程的动力学数学模型和模型参数,同时对实验数据与模型进行了验证比较。模型计算与实验结果拟合良好,模型正确地反应了灰树花真菌的发酵过程及其动力学机制。     

灰树花深层发酵培养基优化研究

灰树花是药食两用真菌，富含多糖，氨基酸和矿物元素，可用液体深层发酵大规模生产。本试验研究分析了文献报导的营养因子对灰树花发酵的影响，并选择得到各因子及水平。以菌丝干重作为试验指标，通过四因素四水平的正交试验得到优化培养基的组成为：马铃薯250g／葡萄糖30g，麸皮20－35g，酵母膏1.0-2.5g，磷酸二氢钾取2－5g，硫酸镁取0.5-2g，水1L，菌丝生物量干重为19．7g／L。方差分析表明混合碳源的浓度比对试验指标有显著影响。与文献结论进行了对比，得到不同结论。     

灰树花液态深层发酵条件研究

以菌丝体生物量和多糖含量为评价指标,通过单因素试验研究了灰树花的液态深层发酵条件,并考察不同发酵罐类型对灰 树花生长的影响,在此基础上利用50 L发酵罐进行了扩大培养。 结果表明,利用7 L搅拌式发酵罐,灰树花的最优液体深层发酵条件为培 养温度23 ℃,搅拌速度120 r/min,通气量3 L/min。 在此优化条件下,菌丝体生物量和发酵液中多糖含量分别为11.659 g/L和3.658 g/L, 且高于气升式发酵罐。 在50 L搅拌式发酵罐中成功实现了扩大培养,其菌丝体生物量和多糖含量分别为13.238 g/L和3.178 g/L。     

灰树花真菌发酵条件优化研究

通过单因素试验及L9(34)正交试验,研究灰树花液体发酵培养过程中接种量、转速、装液量对灰树花真菌菌体及多糖产量的影响.结果表明,三者均有不同程度的影响.接种量的影响显著,适宜于灰树花真菌发酵培养的条件为:接种量10%,摇瓶转速200 r/min,装液量100 mL.     

白灵菇液体深层发酵多糖的提取

本文对白灵菇菌株液体深层发酵液中胞内、胞外多糖的提取工艺进行了研究。通过单因子试验和正交试验结果得到胞内多糖的提取工艺参数:温度60℃,提取时间2h,提取次数为2次,加水倍量为35倍。胞外多糖的提取工艺参数:浓缩比为1/2、浓缩温度60℃、醇沉终浓度75%、pH6.0。     

天麻影响灰树花深层发酵产胞外多糖的动力学模型及应用

灰树花多糖是灰树花中最具生物活性的成分之一,通过在灰树花发酵体系中添加一定量的天麻,可以提高灰树花胞外多糖（exopolysaccharides,EPS）的产量。基于Logistic和Luedeking-Piret方程,采用MATLAB软件分别得到了天麻醇提液浓度为7%（v/v）时,灰树花菌体生长、EPS合成、基质消耗的动力学模型和模型参数。结果表明模型与实验数据能较好地拟合,基本上反映了天麻醇提液浓度为7%（v/v）时,灰树花发酵产胞外多糖过程的动力学特征。     

天麻对灰树花液体深层发酵的影响

研究中药天麻对灰树花液体深层发酵的影响,应用Minitab15软件设计了Plackett-Burman筛选实验,筛选出葡萄糖浓度、蛋白胨浓度、天麻浓度、无机盐配比4个显著性影响因素,通过正交实验对其进行优化,结果表明天麻对灰树花液体深层发酵的最佳工艺条件为:葡萄糖质量浓度30g/L,蛋白胨质量浓度5.5g/L,天麻质量浓度7g/L,KH2PO4质量浓度1.5g/L,MgSO4质量浓度0.75g/L。每升发酵液中可得到灰树花胞外多糖为3.91g,与不添加天麻的对照组相比,胞外多糖产量提高了3.4%。     

液体培养灰树花菌丝生产海藻糖

探索了灰树花(Grifola frondosa)GIM5.164深层培养中海藻糖积累的规律.结果表明,以培养基组分玉米粉4% 麸皮浸汁2% 葡萄糖1%,pH3.5及转速为130 r/min为适宜灰树花积累海藻糖的培养条件.海藻糖积累于快速生长期之后的稳定期,培养时间到第11天时,菌体内的海藻糖含量最高,达到1.20mg/mL,百分含量为11.48%;将已培养11d的灰树花菌体用37.5℃处理6 h后可使海藻糖的含量显著增加,达到1.59 mg/mL,百分含量为15.20%;在发酵培养基中添加0.1%～0.2%的花生油作为消泡剂可提高菌体的海藻糖含量;产物海藻糖为浅黄色的晶体.     

莲花菌菌株Sd的液态发酵特性研究

莲花菌是一种珍贵的药、食两用真菌。目前,国内外对于莲花菌的研究多以固态栽培及其多糖的提取为主,而不受自然气候等条件限制的可大规模工业化生产的莲花菌液态深层发酵技术国内外还未见有成功的报道。本研究采用固态栽培上广泛使用的莲花菌菌株Sd,用8L全自动机械通风搅拌发酵罐探讨其液态深层培养特性,并结合发酵生产实际施行了中间补料动态调控,通过观测和综合分析其pH、残糖浓度、溶氧及菌丝量的动态变化过程,可以确定菌株Sd的发酵前40h为发酵的适应期对数生长期在接种后94～104h之间,104～200h之间为稳定期;200h后菌丝开始自溶,处于衰落期,应该放罐。此结果对于指导莲花菌菌株Sd的发酵生产具有重要意义,也将为莲花菌的生理生化及遗传特性的研究奠定基础。     

灰树花富锗培养研究

对食药用真菌灰树花的耐锗和富锗特性进行了研究 .结果表明 ,灰树花的耐锗能力和富锗能力都很强 .在锗质量分数为 1 0 0～ 3 0 0 0mg/kg的固体培养基上 ,菌丝均能生长 ,当锗质量分数超过 2 50 0mg/kg时 ,菌丝生长受到一定影响 .采用液体深层培养 ,在锗质量分数为 1 0 0～ 1 50 0mg/kg范围内 ,菌丝体富集锗的范围为 2 96～ 3 74 6mg/kg(以干菌丝计 ) ,当锗质量分数为 50 0mg/kg时 ,菌丝体对锗的吸收率最高 ,达 3 .58% .适当的锗还能促进菌丝体对培养液中还原糖的利用并提高菌丝干收率及胞外多糖分泌量 ,但对发酵液 pH值、发酵周期及菌丝体胞内多糖产量没有明显影响 .     

硫酸酯化灰树花多糖的制备与分析

利用碱提酸沉淀法从灰树花(Grifola frondosa)发酵菌丝体中获得碱提水不溶性多糖GAP,氯磺酸-吡啶法对GAP进行硫酸化修饰后,即制得能溶于水的硫酸化灰树花多糖.通过DEAE-Sepharose F.F.离子交换柱层析精制为一种相对分子量为2.8×10~4,硫酸基质量分数为16.4％的硫酸酯化灰树花多糖(S-GAP).琼脂糖电泳显示,S-GAP可被甲苯胺蓝染色且着色较深.S-GAP的紫外光谱和红外光谱分析表明,在波长208,264,268,286 nm以及波数1 230 cm-1、810 cm-1处有硫酸酯键的特征吸收峰.     

蒽酮－硫酸法测定泰山灰树花中海藻糖含量的研究

对蒽酮-硫酸法测定灰树花菌体海藻糖含量的条件进行了研究。结果表明,样液与蒽酮-硫酸试剂加入量的体积比为1:2,加热显色5min,625nm比色,测定灰树花菌体中海藻糖含量为3.88mg/ml,平均回收率为106.5%,稳定性和重复性较好。该方法简便、快速、准确,适用于菌体海藻糖含量的测定。     

对羟基苯甲醇对灰树花产胞外多糖的影响及其发酵动力学

通过向灰树花发酵液中添加不同质量浓度梯度的对羟基苯甲醇,分析其对灰树花菌体生长和胞外多糖合成的影响,并且进一步研究了添加对羟基苯甲醇后发酵液中菌丝体生长、残糖（还原糖）含量、胞外多糖产量、pH值、对羟基苯甲醇和天麻素含量的变化情况,并做动力学分析。结果表明：当对羟基苯甲醇添加量为200 mg/L时效果最佳,相比于空白组（未添加对羟基苯甲醇）使菌丝体生物量提高了22.73%,胞外多糖产量提高了10.24%,均显著高于空白组（P＜0.05）。动力学研究结果表明：在整个发酵过程中,灰树花生长从第8天趋于稳定,葡萄糖作为碳源不断被消耗并且胞外多糖逐渐合成,到第10天二者趋于稳定。此外,对羟基苯甲醇含量减少,部分转化为天麻素。     

灰树花液体培养过程中底物利用与菌丝超微结构的变化

研究了灰树花深层发酵过程中底物利用与菌丝超微结构的关系。发酵的不同时期菌丝利用的底物不同,菌丝的超微结构也呈现出相应的变化。发酵早期的菌丝主要利用碳水化合物,结构上表现为线粒体丰富,液泡化程度低。发酵中期,菌丝开始分化,液泡增多增大,并通过内吞作用积累了一些脂质物质。这一时期超微结构上最大的特征是菌丝分化出顶囊以及膜边体,细胞内的膜系统分化出圆球体、初级溶酶体、次级溶酶体等结构,其中溶酶体内的各种水解酶负责水解蛋白质、脂肪等大分子;发酵后期菌丝高度液泡化,积累并利用脂质体,主要通过脂类分解代谢维持生命活动。