菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆

目的了解菲律宾蛤仔中过敏原的情况,对其主要过敏原进行鉴定和分子克隆。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹验证原肌球蛋白,双向电泳对蛋白等电点进一步确定。利用差示扫描量热法对蛋白的热性能测定以及蛋白克隆和测序来分析原肌球蛋白。结果菲律宾蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 k Da左右,等电点为5.1,热稳定性较强。原肌球蛋白的基因序列全长为855 bp,编码284个氨基酸,对序列进行同源对比,相似性较高。结论本实验证实了原肌球蛋白为菲律宾蛤仔的过敏原,为认识菲律宾蛤仔过敏原提供基础数据。     

日本沼虾原肌球蛋白线性表位预测研究

本文旨在预测日本沼虾原肌球蛋白的线性表位,为相关食物过敏的识别与检测提供依据,同时为基于抗原表位的致敏性消减提供靶标。采用DNAStar软件、SOPMA、BepiPred 1.0 Server及ABCpred在线网站预测日本沼虾原肌球蛋白的B细胞线性表位,应用SYFPEITHI、NetMHCII 2.3 Server与NetMHCIIpan 3.2 Server预测T细胞表位。综合分析以上预测结果,表明日本沼虾原肌球蛋白可能的B细胞线性表位有21RADTLEQQNKEANN34、37EKTEEEIRTTQKKMQQ52、71LEEKEKA77、99LERSEERLN107、119AADESER125、134SLSDEER140、158ADRKYDE164、177ERAEERAETG186、210SEEKANQREEAYKE223、262NEKEKYK268,可能的T细胞表位有82EGEVAALNRRIQLL95、105RLNTATTKLAEAS117、165VARKLAMVEADLE177、195EELRVVGNNLKSLE208、222KEQIKTLTNKLKAA235。该结果可为继续深入开展日本沼虾过敏原基础性研究提供更精准的靶标。     

菲律宾蛤仔过敏原的性质研究

文章以菲律宾蛤仔为对象,对其过敏原进行性质研究。采用丙酮沉淀、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热处理等方法纯化过敏原;采用SDS-PAGE和Western-blot鉴定该过敏原;通过p H稳定性试验、消化稳定性试验进一步分析其性质。结果显示菲律宾蛤仔中主要过敏原的分子量为35k Da,耐酸碱性良好,且具有较高的消化稳定性,其降解产物仍具有抗原性。研究验证了菲律宾蛤仔中的主要过敏原是原肌球蛋白(tropomyosin,TM),并对其性质进行了分析,为过敏原的安全控制提供了基础数据。     

美拉德反应对菲律宾蛤仔原肌球蛋白结构及免疫活性的影响

以菲律宾蛤仔原肌球蛋白为研究对象,探讨美拉德反应导致核糖糖化后对其结构及免疫原性的影响。利用酶联免疫及点印记技术分析核糖对原肌球蛋白IgE/IgG结合能力的影响。通过圆二色谱（circular dichroism,CD）、有效赖氨酸含量测定等分析蛋白二级结构及相关基团的变化。结果表明,以美拉德反应为基础的与核糖的糖化反应时间达到12 h后,产物的IgE结合能力下降76.2%,IgG结合能力下降了86.8%,α-螺旋含量下降了71.7%,蛋白表面疏水性增加了192%,有效赖氨酸含量降低了45.5%。实验表明,与核糖的糖基化反应时间达到4 h后能够有效地改变菲律宾蛤仔原肌球蛋白的结构,从而降低其免疫活性。     

鸡蛋致敏原溶菌酶的B细胞IgG线性表位定位

目的 探究鸡蛋致敏原溶菌酶的B细胞线性表位。方法 先使用生物信息学工具对其氨基酸序列分析，预测其潜在的B细胞线性表位，同时合成覆盖其完整氨基酸序列的重叠肽，然后利用斑点杂交法（dot-blot）筛选出与抗溶菌酶兔血清IgG特异性结合的多肽片段，从而定位出溶菌酶的B细胞IgG线性表位。结果 通过生物信息学工具综合分析预测出了鸡蛋溶菌酶的4个B细胞线性表位，分别为AA18-21（DNYR）、AA39-51（NTQATNRNTDGST）、AA62-78（WWCNDGRTPGSRNLCNI）、AA109-117（VAWRNRCKG）；利用dot-blot定位出5个鸡蛋溶菌酶的B细胞IgG线性表位，分别为AA1-15（KVFGRCELAAAMKRH）、AA28-30（WVC）、AA70-78（PGSRNLCNI）、AA103-117（NGMNAWVAWRNRCKG）、AA124-126（IRG）。研究结果表明，采用生物信息学工具预测的B细胞线性表位与已知的溶菌酶的B细胞IgE线性表位的重合率达75%，与用dot-blot定位的B细胞IgG线性表位的重合率达40%，一定程度上证实了利用生物信息学预测致敏原表位的可行性，但预测结果的准确性仍需进一步验证。结论 本研究确定的溶菌酶B细胞线性表位可为进一步开展溶菌酶的精准检测和低致敏食品等研发工作提供关键的结构信息。     

牡蛎过敏原Crag 1的结构与功能

Crag 1是牡蛎中主要过敏原,属于一种原肌球蛋白。原肌球蛋白是存在于肌肉和非肌肉细胞中高度保守的、分子量大约为34~38 kDa的一种结合蛋白。目前已经明确Crag 1的一级结构是由284个氨基酸构成,二级结构以α-螺旋为主,软体类主要过敏原原肌球蛋白均没有复杂的三、四级空间结构。Crag 1的过敏原性不是来自构象、非连续性表位而是来自于线性、连续性表位。Crag 1在92~105区段(IQLLEEDMERSEER)中具有IgE抗原结合表位,其他的IgE抗原结合表位有待进一步试验确认。Crag 1作为一种原肌球蛋白,对肌肉有一定的调节作用。不同物种原肌球蛋白的序列同源性较高并且存在一定的交叉反应。综述介绍了Crag 1的基本结构性质与功能,系统地描述了Crag 1,讨论了现阶段研究牡蛎过敏的意义及存在的问题,为以后治疗软体动物、甲壳类动物食品的过敏性疾病,尤其是治疗牡蛎引起的过敏疾病,提供一定的参考依据。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原B细胞线性表位的预测研究

为预测鸡蛋过敏原卵转铁蛋白的B细胞线性表位,以GenBank中提供的鸡蛋卵转铁蛋白氨基酸序列为基础,分别用Jameson-Wolf法、Kyte-Doolittle法、Emini法和Karplus-Schulz法对鸡蛋卵转铁蛋白的抗原指数、亲水性、蛋白表面可及性及柔韧性进行预测,并用Chou-Fasman法和Deleage-Roux法预测其二级结构,综合分析以上预测结果,得出鸡蛋卵转铁蛋白可能的B细胞线性表位区。结果表明鸡蛋卵转铁蛋白存在7个潜在表位区,包括蛋白第174～181、215～222、231～240、288～294、332～344、415～429、547～555位可能为B细胞线性表位优势区域。该结果将有助于鸡蛋卵转铁蛋白B细胞表位的进一步精确定位。     

水生动物原肌球蛋白致敏原研究进展

原肌球蛋白(tropomyosin,TM)是甲壳类动物中的一种常见的泛致敏原,同时部分鱼中TM致敏性已得到证实.其蛋白质结构保守、同源性高、致敏性强,且具有广泛的免疫交叉反应.原肌球蛋白致敏性及其消减方法、免疫交叉反应都与抗原表位有关.因此,表位研究是原肌球蛋白研究中的重点.本文中介绍了国内外水生动物原肌球蛋白的性质、...     

分子对接技术筛选菲律宾蛤仔抗炎肽

基于分子对接技术筛选菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)来源的具有抗炎作用的活性肽。采用三氯乙酸-丙酮沉淀法提取菲律宾蛤仔蛋白质，通过双向凝胶电泳(2-dimensional electro phoresis, 2-DE)技术和液质联用(LC-MS/MS)技术分离和鉴定其蛋白质，借助BIOPEP-UWM在线工具对主要蛋白进行虚拟酶解，使用PeptideRanker和ToxinPred等程序对肽段进行评分和理化性质分析；利用Discovery studio 2019和AutoDock Vina软件进行分子对接筛选潜在抗炎肽片段，探讨人工合成抗炎肽对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的改善作用。结果表明，原肌球蛋白和组蛋白为肌肉组织的主要蛋白质。选用原肌球蛋白作为底物，通过虚拟酶解和分子对接筛选出8种潜在的新颖活性肽。其中DQTF与TLR2和TLR4分别存在7个氨基酸残基和8个氨基酸残基结合位点，而GYTR与TLR2分子中的10个氨基酸残基和TLR4分子中的7个氨基酸残基紧密结合(结合能均低于-5 kcal/mol),表明其是潜在的抗炎肽。活性验证结果表明，2条合...     

菲律宾蛤仔及其制品的Taqman荧光PCR鉴定方法

目的建立菲律宾蛤仔成分Taqman荧光PCR定性检测方法。方法根据菲律宾蛤仔线粒体细胞色素氧化酶CoxⅠ基因中的保守基因序列设计一对菲律宾蛤仔特异性引物,通过Taqman荧光PCR法进行PCR扩增反应,对菲律宾蛤仔成分进行特异性检测。结果该方法的引物对于菲律宾蛤仔成分的特异性良好;菲律宾蛤仔DNA检出限为0.04 ng/μL,可达菲律宾蛤仔肉粉质量分数的0.001%。通过对市售菲律宾蛤仔制品的检测,该方法可检测出制品中的菲律宾蛤仔成分。结论该检测方法特异性强,灵敏度高,能够用于食品中菲律宾蛤仔成分的真实性鉴别。     

Tropomyosins in gastropods and bivalves: Identification as major allergens and amino acid sequence features

Tropomyosin appears to be a major cross-reactive allergen of crustaceans and molluscs. In this study, four species of gastropods (disc abalone, turban shell, whelk and Middendorf’s buccinum) and seven species of bivalves (bloody cockle, Japanese oyster, Japanese cockle, surf clam, horse clam, razor clam and short-neck clam) were confirmed to be allergenic by ELISA and their major allergen identified as tropomyosin by immunoblotting. Inhibition immunoblotting data showed the cross-reactivity of gastropod and bivalve tropomyosins with one another and also with cephalopod and crustacean tropomyosins. Then, amino acid sequences of tropomyosins from 10 species except for Middendorf’s buccinum were elucidated by cDNA cloning. The known amino acid sequence data including our results reveal that molluscan tropomyosins share low sequence identities (about 60%) with crustacean tropomyosins and that they are highly homologous with one another within the same group (same family or same order) but not among the groups.     

花生过敏原Ara h7基因的克隆及序列分析

目的克隆花生Ara h7基因cDNA序列,并对其序列进行分析。方法采用Trizol法,从花生子叶中提取花生RNA,经反转录PCR,克隆花生Ara h7 cDNA序列;采用生物信息学软件对Ara h7序列进行分析,预测蛋白结构及功能。结果 Ara h7 cDNA序列有482 bp,编码160个氨基酸。生物信息学分析结果显示Ara h7蛋白是一种亲水性蛋白,分子量为18.881 kDa,具有9个潜在的磷酸化位点,5个不同的B细胞线性表位。结论本研究成功克隆了Ara h7 cDNA序列,并采用生物信息学软件分析了基因编码的蛋白的特征。     

基于耐消化肽的核桃主要过敏原Jug r 2的线性表位筛选

由于核桃Jug r 2是核桃中的主要过敏原,Jug r 2的线性表位是引发核桃过敏反应的关键因素,因此筛选Jug r 2线性表位工作是必要的.本研究利用免疫信息学中的DNAStar Protean系统和ABCpred在线工具预测Jug r 2中的B细胞线性表位.利用体外模拟胃肠消化和HPLC-MS/MS对抗消化肽段的一...     

Skeletal Muscle Connectin Primary Structures as Related to Animal Species and Muscle Type

Differences in molecular weights and partial amino acid sequences of connectin(titin) were determined for cattle, pig and chicken skeletal muscles. Peptide mapping analysis results differed according to animal species. Amino acid sequences deduced from partial nucleotide sequences of connectin also differed according to animal species at immunoglobulin-like (Ig) and fibronectin type 3 (FN3) domains. In chicken, the molecular weight of connectin from leg muscles was higher than that from pectoral muscles. Differences in meat texture and conditioning may relate to connectin and extent of its breakdown.     

Identification of Conformational Antigenic Epitopes and Dominant Amino Acids of Buffalo β‐Lactoglobulin

Major allergen β‐lactoglobulin exists in many mammalian types of milk except human breast. Buffalo milk also contains this major allergen but the detailed information on its epitopes is not available. The aim of this work was to map and characterize its conformational antigenic epitopes. Sixty mimotopes of buffalo β‐lactoglobulin were produced by biopanning of phage display peptide library and then 2 mimotopes, specific for sera from rabbit 1 and 2, respectively, were predicted to be conformational epitope candidates by the use of DNAStar and web tool of MIMOX. On the basis of bioinformation analysis, 5 conserved amino acid residues PL‐ENK were identified in 2 conformational epitope sequences and 7 conformational epitopes were derived from 2 mimotopes by molecular modeling. The result showed that these conformational epitopes were located in the 2 regions on buffalo β‐lactoglobulin and composed of 5 hydrophilic and 2 hydrophobic amino acids.     

小麦主要过敏原CM16线性B细胞表位的预测及初步鉴定

目的：探究小麦主要过敏原α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CM16的线性B细胞表位。方法：通过提取小麦蛋白粗提物,进行体外模拟胃肠道消化,发现小麦过敏原中具有消化抗性的α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CM16的片段;进一步通过生物信息学方法分析CM16的一级氨基酸序列、二级结构,并通过同源建模确定CM16的三级结构。结果：利用生物信息学法预测出CM16的4 条线性B细胞表位后,结合质谱得到的抗消化肽段信息进行比对分析,发现其中2 条肽段存在部分重合,也证明了生物信息学分析鉴定过敏原线性B细胞表位方法的可行性和应用性。结论：通过生物信息学预测小麦过敏原CM16线性B细胞表位有助于进一步认识小麦过敏原,对小麦过敏原的识别和检测具有重要的参考和借鉴作用。     

超高压结合胰蛋白酶消减虾原肌球蛋白致敏性及其抗原线性表位残留

比较常压下酶水解与超高压下酶水解虾原肌球蛋白（tropomyosin,TM）的致敏性差异及线性表位的残留,探讨超高压下酶水解TM增强致敏性消减效果的原因。采用间接酶联免疫吸附测定法检测TM致敏性,傅里叶变换红外光谱和荧光光谱法检测TM二级和三级结构;以致敏性（OD492 nm）为指标,确定常压和超高压下酶水解TM的条件;采用质谱法检测水解片段的氨基酸序列。结果表明,在40 ℃、200 MPa下,保压时间30 min有利于胰蛋白酶活力的提高;压力在100～600 MPa内,TM致敏性随压力升高而降低,其致敏性与二级结构中β-转角的相对含量及三级结构的变化有关;在常压下（40 ℃、酶添加量3 000 U/g、水解30 min）,TM水解产物的致敏性消减率为89%,水解产物中含8～16 个氨基酸残基的片段数量占76.8%,且线性表位的消减率为60.0%～66.7%;在超高压下（40 ℃、酶添加量3 000 U/g、200 MPa下水解30 min）,TM水解产物的致敏性消减率为98%,水解产物中含8～16 个氨基酸残基的片段数量占93.3%,且线性表位的消减率为88.9%～90.0%。因此,超高压可以促进酶水解TM,有利于线性表位的消除,从而降低水解产物的致敏性。     

牛乳乳清中主要过敏原的B细胞表位定位

采用噬菌体展示技术结合生物信息学定位牛乳α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的B细胞表位,分析不同类型表位之间的氨基酸组成和空间分布规律。结果表明,某些线性表位是构象性表位的组成部分,IgE与IgG表位存在共同区域。本研究得到的表位是牛乳过敏诊断和预后的候选生物标志物,也可用于指导于低致敏性乳制品的开发。