生乳中金黄色葡萄球菌产肠毒素特性及耐药性分析

了解生乳中金黄色葡萄球菌污染状况、产肠毒素特性及耐药性，为乳及乳制品的生产及制定HACCP以保证食品安全提供依据。采集省内20个奶牛场共209份生乳样品进行金黄色葡萄球菌的分离、产肠毒素（SEA—SEE）试验及耐药性试验。共检出金黄色葡萄球菌34株，检出率为16．27％，21株产肠毒素试验阳性，阳性率为61．76％，对青霉素、缸霉素、四环素、苯唑西林凝固酶阴性耐药性分别达88．24％、41．48％、35．29％、35．29％，并出现21种耐药谱。生乳中金黄色葡萄球菌的污染率及产肠毒素率较高，耐药性结果对人及畜的安全用药有指导性作用。控制生乳中金黄色葡萄球菌的污染对奶及奶制品食用安全有意义。     

近红外光谱建模法快速测定桔子精油中柠檬烯的含量

为了解日常检测分离株产肠毒素和耐药情况,探讨食源性金黄色葡萄球菌产毒素的类型及分布状况,研究其耐药特性,对本实验室2016年～2017年日常食品检测中的分离株,分别用全自动荧光酶联免疫法检测肠毒素总量和酶联免疫吸附法对肠毒素SEA～SEE进行分型,并用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药敏试验。结果表明,370份食品中分离到的29株金黄色葡萄球菌,产肠毒素的有16株,阳性率为55.2%,其中食物中毒分离株5株都为肠毒素阳性。产2种及以上肠毒素的菌株为12株,占41.4%。A型～E型常见肠毒素都有检出,其中产SEE的菌株最多,有12株,占41.4%,产SEA的菌株次之,为11株。29株食源性金黄色葡萄球菌对庆大霉素、妥布霉素、青霉素、安苄西林、苯唑西林、阿莫西林-克拉维酸、复方新诺名、克林霉素、红霉素、利福平、四环素均有不同程度的耐药,并出现多重耐药性,其中对青霉素和安苄西林的耐药率最高,均为82.8%,其次为红霉素44.8%。该研究的食品监测中分离到的金黄色葡萄球菌其产肠毒素率较高,主要的类型为SEE和SEA。而且分离得到的食源性金黄色葡萄球菌存在不同程度的耐药性和多重耐药现象,建议从各个环节加强监测,降低因耐药菌带来的食品安全风险。     

鲜湿米粉中金黄色葡萄球菌污染状况研究

监测市售鲜湿米粉中的金黄色葡萄球菌的污染情况,并进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA)鉴定和肠毒素分型,为预防湿米粉中金黄色葡萄球菌中毒及食品安全风险积累数据。监测结果为139份样品中有38个样品检出金黄色葡萄球菌。在分离出的38株分离株中,21株鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA),32株携带肠毒素基因。结果表明:湿米粉中金黄色葡萄球菌检出率高,菌株产肠毒素能力较强,存在的食品安全隐患不容忽视。     

食物中毒事件中致病菌肠毒素检测和分子分型研究

目的 对一起食物中毒事件样本进行检测,查明食物中毒原因,并对分离菌株进行相关性分析。方法 参照国家标准方法GB4789.10-2016,对采集样本进行细菌学检验。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测葡萄球菌肠毒素。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型,分析菌株之间的相关性。结果 食物中毒事件中5名患者洗胃液、食物、分离菌株,均检测出E型葡萄球菌肠毒素。3株分离菌株PFGE分子分型提示来源不同克隆株,除了产生E型葡萄球菌肠毒素外,还有B、C、D型。结论 该起食物中毒由不同PFGE型别的产毒金黄色葡萄球菌污染食物引起,菌株产葡萄球菌肠毒素的型别不完全相同。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒应关注多污染源及菌株肠毒素基因表达情况。     

鸡肉生产中分离金黄色葡萄球菌的基因分型与耐药性分析

为探究鸡肉制品在加工过程中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因分布、分子分型和耐药性情况,本研究对某鸡肉制品加工厂的生产加工过程进行取样,通过DNA提取、PCR扩增nuc基因对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,然后分析肠毒素基因分布情况,对获得带有毒素基因的菌株进行多位点序列分型（MLST）和耐药性研究。结果表明,260份样本中分离到38株金黄色葡萄球菌（其中携带肠毒素基因的菌株有24株）,检出率为63.16%;共检测到7种毒素基因型,其中sed携带率最高（60.53%）,依次为seg（26.32%）、see（21.05%）、sei（18.42%）、sec（10.53%）、sea（7.89%）、seh（5.26%）,携带两种及以上肠毒素基因的菌株有14株（36.84%）。24株携带毒素基因的菌株MLST分型都为ST型,分为3种ST分型,16株为ST7序列型（66.67%）;5株为ST5序列型（20.83%）;3株为ST464序列型（12.5%）。耐药性分析实验结果表明,抑菌效果最好的抗生素是万古霉素,38株菌株都对其敏感（100%）;绝大多数菌株都对抗生素有耐药性,依次为青霉素G（86.84%）、环丙沙星（60.53%）、克林霉素（55.26%）、四环素（52.63%）;对3-6种抗生素耐药的金黄色葡萄球菌菌株分别占18.42%、15.79%、23.68%、7.89%。研究结果表明鸡肉产品中存在金黄色葡萄球菌污染的情况,并且其中存在携带多种类型肠毒素基因的菌株,也存在具有多重耐药性的菌株。     

一起食物中毒事件中产独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌病原学分析

目的对一起疑似为金黄色葡萄球菌所导致的食物中毒事件进行葡萄球菌肠毒素检测,结合金黄色葡萄球菌病原学分析,为明确食物中毒诊断提供依据。方法根据流行病学调查,采用ELISA方法对可疑食物进行葡萄球菌肠毒素检测,同时对可疑食物和患者呕吐物进行金黄色葡萄球菌分离,运用Vitek2 Compact全自动细菌鉴定仪和血浆凝固酶试验鉴定为金黄色葡萄球菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对病原菌进行同源性分析,以ELISA方法对检出的金黄色葡萄球菌菌株进行肠毒素检测,用PCR方法对肠毒素基因进行分型。结果食物和患者样品中分别分离出2和11株金黄色葡萄球菌,PCR方法及ELISA方法对肠毒素分型结果显示,其中12株同时存在SEA、SEB、SED、SEE 4种肠毒素及相关基因,PFGE聚类分析显示,其中12株产肠毒素金黄色葡萄球菌具有高度同源性。结论本起食物中毒事件为具有独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌导致,在金黄色葡萄球菌中毒实验室调查过程中,肠毒素检测结合病原菌溯源分析可以为相关公共卫生事件提供科学依据。     

现制饮品中金黄色葡萄球菌耐药及遗传特征研究

目的 探究我国现制饮品中金黄色葡萄球菌抗生素耐药及遗传特征。方法 采用微量肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌进行药敏测定,同时提取菌株基因组DNA进行全基因组测序,并使用生物信息学分析流程进行基因组特征数据挖掘。结果 现制饮品中43株金黄色葡萄球菌对10种抗生素的总体耐药率为88.4%,分属9种耐药谱,其中3株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）。多重耐药菌（Multidrug resistant,MDR）占比16.3%,主要为含乳现制饮品。耐受7类及以上抗生素金黄色葡萄球菌3株,其中1株为MRSA。全基因测序进化分析表明菌株耐药表型与基因型具有良好的相关性,MRSA及多重耐药株出现明显聚集。43株菌属于16种多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）,其中MRSA菌株包括1株ST45型和2株ST398型。多重耐药株ST型别为ST5、7、15、59、121和398型。多重耐药MRSA株为ST398型。金葡肠毒素基因整体携带率为34.9%,其中sea为主要基因型。MRSA菌株均不携带毒力基因,多重耐药株肠毒素基因携带率为42.9%。3株主要来自含水果类现制饮品的ST1型菌株同时携带6种肠毒素基因,但其仅对青霉素耐药或为敏感株。结论 我国现制饮品中金黄色葡萄球菌存在MRSA及多重耐药菌,且该类菌株在遗传进化中聚类明显,虽然MRSA菌株致病性相对较弱,然而MDR菌株肠毒素基因的高携带率提示耐药金黄色葡萄球菌的潜在危害不容忽视。因此,应加强现制饮品中金黄色葡萄球菌的耐药监测与防控。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因型分布研究

目的 采用PCR法扩增食源性金黄色葡萄球菌中肠毒素基因以了解该菌肠毒素基因携带情况,比较食物中毒和食品监测来源菌株中肠毒素基因检出率差异.方法 合成sea、seb、sec、sed和see五种肠毒素基因特异性引物,用常规PCR方法扩增食物中毒和食品监测来源菌株中各自肠毒素基因,同时采用mini-VIDAS检测食物中毒来源菌株中肠毒素.结果 110株菌株中有30株检出肠毒素基因,检出率为27.3％,肠毒素基因阳性菌株均只检出1种肠毒素基因.其中来自2起食物中毒的14株菌株均检出seb型肠毒素和相关基因,检出率为100％.来源于食品监测样本的96株菌株中有16株检出肠毒素基因,检出率为16.7％,包括sea型4株、seb型2株、sec型4株、sed型6株.结论 在宁波市食品监测中所分离的金黄色葡萄球菌所携带的肠毒素基因主要有sea、seb、sec和sed四型,而seb型肠毒素是引起金黄色葡萄球菌肠毒素所致食物中毒的主要因素.     

温度和接种量对搅打奶油中金黄色葡萄球菌生长及产肠毒素的影响

目的：研究金黄色葡萄球菌在搅打奶油中的生长以及产毒特性。方法：将不同浓度的初始接种量的产A型肠毒素金黄色葡萄球菌菌液接种到奶油中并搅打成型,低接种量控制在2～3（lg（CFU/g））,高接种量控制在4（lg（CFU/g））以上。定时测量不同贮存温度条件下奶油中的金黄色葡萄球菌的菌落总数以及产毒状况。结果：36 ℃条件下生长速率最快,其他温度条件下依次降低;低初接种量水平下,只有36 ℃条件下于27 h检测到产生毒素,其他温度条件下未检测到毒素产生;高初接种量水平条件下,在36 ℃于12 h、25 ℃于24 h、15 ℃于66 h检测到产生毒素,5 ℃条件下金黄色葡萄球菌既不生长,又不产毒。结论：随着温度的升高,金黄色葡萄球菌的生长速率随之升高,产肠毒素的时间也随之缩短,高初始接种量水平肠毒素产生的时间短于低初始接种量水平,肠毒素的产生时间为一般在对数期的中后期,此时金黄色葡萄球菌菌落总数≥6（lg（CFU/g））。     

辣椒制品金黄色葡萄球菌污染及肠毒素污染研究

了解辣椒制品金黄色葡萄球菌的污染状况,检测辣椒制品中金黄色葡萄球菌携带肠毒素的情况,为开展辣椒制品安全风险评估,企业及产品分类管理提供必要的依据.方法:参照GB 4789.10-2010对样品进行金黄色葡萄球菌分离、培养,用VITEK 2 compact全自动微生物鉴定分析系统进行生化鉴定,同时用全自动荧光酶标免疫测试系统(VIDAS 30)检测分离菌株携带肠毒素SEA-SEE情况.结果:从705份样品中共检出金黄色葡萄球菌21株,总检出率为2.98％.其中干辣椒制品未检出金黄色葡萄球菌、油辣椒检出率为3.34％,发酵辣椒制品检出率为5.63％,其他辣椒制品检出率为1.32％.21株金黄色葡萄球菌中11株葡萄球菌肠毒素阳性,总检出率为52.38％.其中油辣椒葡萄球菌肠毒素阳性率为46.67％,发酵辣椒制品葡萄球菌肠毒素阳性率为75.00％,其他辣椒制品葡萄球菌肠毒素阳性率为50.00％.辣椒制品样品产地涉及15个省(区、市),从4个省(区)产的辣椒样品中检出金黄色葡萄球菌并携带肠毒素.结论:不同类型辣椒制品污染程度存在差异,不同产地辣椒制品污染程度存在差异,辣椒制品存在金黄色葡萄球菌污染风险,并且产肠毒素的金黄色葡萄球菌占一定的比例.     

植物乳杆菌、戊糖片球菌对产肠毒素金黄色葡萄球菌生长的影响

研究食盐含量、pH值、温度对产肠毒素金黄色葡萄球菌的生长的影响,并主要研究植物乳杆菌和戊糖片球菌对产肠毒素和不产肠毒素金黄色葡萄球菌生长的影响以及之间的差别.结果表明:植物乳杆菌和戊糖片球菌均能抑制金黄色葡萄球菌的生长,植物乳杆菌的抑菌活性显著高于戊糖片球菌(P＜0.05),植物乳干菌和戊糖片球菌对不产肠毒素金黄色葡萄球菌的抑菌效果显著高于产肠毒素金黄色葡萄球菌(P＜0.05).     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒事件的病原检测和溯源分析

目的 对上海市浦东新区一起食物中毒事件进行病原检测和溯源分析,为此类事件的处置和判定提供依据。方法 对病例和从业人员肛拭子以及留样食品样品进行病原分离和鉴定;对分离株进行肠毒素检测、药物敏感性试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分子分型和溯源。结果 从9份病例肛拭子、1份从业人员肛拭子及3份留样食品样品中分离到13株金黄色葡萄球菌。10株人源分离株产A型和E型肠毒素,3株食源分离株产A型、D型和E型肠毒素。13株分离株均对青霉素耐药,PFGE条带相似度为100%,MLST分型均为ST6型。结论 本起事件是由金黄色葡萄球菌污染引起的食物中毒事件,需要进一步加强对食品加工企业、食堂等的宣传教育和管理,防止类似事件的发生。     

一起由生化异常的金葡菌产生的肠毒素引起的食物中毒

９５年１１月我站接到顺义县防疫站送来的食物中毒样品美式炸鸡一件,据介绍中毒者为一家五口人,症状为头痛、呕吐、颈项强直,神志不清,经实验室检测出样品每１００ｇ含金葡菌肠毒素１０μｇ,并检出一株色素及生化不典型的金黄色葡萄球菌,检测出该菌产生ＡＤ型肠毒素。     

2015年江苏省网店自制食品中食源性致病菌的 监测分析

目的 监测江苏省网店自制食品食源性致病菌的污染状况。了解金黄色葡萄球菌产毒及耐药特点。方法 GB4789《食品安全国家标准 食品微生物学检验》方法,选取无锡、常州、盐城等3个监测点,采集我省范围内的网店自制食品共214份,进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌的检验。对分离得到的金黄色葡萄球菌进行葡萄球菌肠毒素检验和药物敏感性试验。结果 共检出食源性致病菌13株,总检出率为6.1%。其中金黄色葡萄球菌9株单增李斯特菌4株,未检出沙门菌。3份样品金黄色葡萄球菌污染超出国家食品限量值。9株金黄色葡萄球菌中6株产生葡萄球菌肠毒素。结论 江苏地区网店自制食品存在食源性致病菌污染状况。其中金黄色葡萄球菌污染比较严重,产肠毒素比例高,且对多种抗生素耐药,对青霉素产生普遍耐药, 对四环素、万古霉素和利福平耐药率较高, 对苯唑西林、环丙沙星、奎奴普丁/达福普汀和呋喃妥英等耐药率相对较低;对耐莫西沙星、利奈唑胺、替加环素和甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑有较好的敏感性。     

金黄色葡萄球菌在蘑菇罐头中生长繁殖与产毒规律的研究

本试验通过对临床分离的金黄色葡萄球菌，经培养筛选出产毒菌株，接种于蘑菇罐中，研究其生长和产毒规律。试验结果表明：金黄色葡萄球菌在蘑菇罐头中生长良好，培养１２小时后即进入对数生长期，培养３０小时后达到生长繁殖高峰，然后进入衰老和死亡期。当菌数达到１０＾７／ｍｌ时即可检测出肠毒素，随后大量积累，培养１８小时及以后各阶段肠毒素检测结果均为强阳性，说明随着金黄色葡萄球菌的不断生长和繁殖，不断产生肠毒素。     

一起由葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒

一起由葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒王本利李玉华顾海萍程力青岛市卫生防疫站（２６６００３）１９９５年５月２５日本市某小学因饮用课间奶引起食物中毒，经流行病学、卫生学调查及实验室检验证实为葡萄球菌肠毒素Ａ＋Ｃ型引起，现报告如下。１流行病学调查５月２５日某...     

广州市白云口岸航空食品中金黄色葡萄球菌凝固酶基因分型及肠毒素基因研究

目的对2013—2015年从广州市白云口岸航空食品中分离的金黄色葡萄球菌进行基因分型研究,为食源性金黄色葡萄球菌分子溯源提供基础数据。方法以血浆凝固酶和肠毒素为目标基因,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对9株金黄色葡萄球菌进行基因分型,其中6株为航空食品分离株,1株为配餐车间大门手拭分离株,2株为标准菌株。肠毒素基因检测包括5种传统肠毒素基因(sea、seb、sec、sed、see)和6种新型肠毒素基因(ser、seg、seh、sei、sej、sep)。结果 6株航空食品分离株的血浆凝固酶基因扩增分型结果为2个PCR型,酶切后得3种亚型;肠毒素基因检测结果显示有2株航空食品分离株含有肠毒素基因,检出率为33.3%(2/6),检出的基因为2种传统肠毒素基因(sec、sed)和4种新型肠毒素基因(ser、seg、sei、sej),均同时携带2种以上肠毒素基因。结论血浆凝固酶基因扩增分型结果显示,不同时间、不同采集地点存在相同的基因型,提示金黄色葡萄球菌存在交叉污染的可能性;航空食品分离株共检出6种肠毒素基因,提示金黄色葡萄球菌基因型多样性,应加强其他新型肠毒素基因检测。     

VFDB注释法在食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型分析中的应用

目的 应用VFDB注释法对食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行分型并评价其准确性。方法 分别使用VFDB注释法和特异引物PCR方法对2009—2016年从北京地区食品中分离的53株金黄色葡萄球菌的18种肠毒素基因（包括传统肠毒素基因sea~see,新型肠毒素基因seg~sej和类肠毒素基因sek~seu）携带情况进行分析。将VFDB注释法所得肠毒素基因序列上传至NCBI,使用BLASTX程序和refseq_protein数据库对注释结果进一步核对。结果 VFDB注释法和PCR方法都检测出53株金黄色葡萄球菌分离株中有45株携带1种或多种肠毒素基因,有8株未携带肠毒素基因,肠毒素基因的总携带率为84.91%（45/53）,经典肠毒素基因的携带率为58.49%（31/53）。45株携带肠毒素基因的分离株中,16株菌（35.56%,16/45）肠毒素基因VFDB分型结果与PCR一致,29株菌（64.44%,29/45）的肠毒素基因VFDB分型结果与PCR不一致。经BLASTX核对,VFDB注释法可能误判的基因型包括sea/sed、sea/sej、sea/sep、sea/ser、seg/ser和sek/sei（VFDB注释/BLASTX核对）。结论 VFDB注释法可对食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行分型分析,但是对注释为sea、seg和sek的序列建议采用BLASTX程序和refseq_protein数据库进一步核对,以提高基因分型的准确性。     

六类食品中致病性细菌检测

为了解昌平区细菌对食品污染的特点，2004年采集6类305件食品，按照GB／T4789－2003食品微生物检验标准进行沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生性李斯特菌、0157：H7大肠杆菌5种致病菌检测。菌株鉴定应用API细菌鉴定系统，肠毒素检测用minVIDAS测试系统，单核细胞增生性李斯特菌毒力基因测定采用聚合酶链反应（PCR）。金黄色葡萄球菌检出率为16．07％，其中生肉、生牛奶、生食水产品检出率比较高，分别为25％、16．98％、27．27％；散装熟肉制品、乳制品也有检出，分别为4.29％、5％。在检出的49株金黄色葡萄球菌菌株中有31株产生肠毒素，占63．26％，其中生、熟肉类肠毒素阳性25株；从奶类、生食水产品中各检出3株。单核细胞增生性李斯特菌检出34株，检出率为11．15％，其中生肉检出率高达20％，其次为散装熟肉制品（8．57％）；另外从淡水鱼中检出4株单核细胞增生性李斯特菌。28株单核细胞增生性李斯特菌毒力基因（hly、iap、prfA）检测全部阳性。生肉中检出一株肠炎沙门菌。未检出O157：H7大肠杆菌、副溶血性弧菌。昌平地区金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特菌对食物的污染比较严重，生食品与加工后食品的检出率差异有显著性。     

校园周边熟食中金黄色葡萄球的分离及肠毒素基因检测

了解校园周边熟食中金黄色葡萄球菌的污染及其肠毒素基因的分布情况。采集校园周边农贸市场及其路边小摊的熟食样品89份,采用国家标准GB4789.10-2016和PCR方法进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌株进行21种肠毒素基因检测。结果表明共分离出71株金黄色葡萄球菌,样品中金黄色葡萄球菌的污染率为79.78%,其中,农贸市场和路边小摊的熟食污染率分别为80.70%(46/57)和78.12%(25/32);检测的21种肠毒素基因中,sec、see、seh、sel、sep和ses未检出,其他15种基因型被检出,包括3种传统肠毒素基因和12种新型肠毒素基因。71株金黄色葡萄球菌中,46株菌株检出携带肠毒素基因,检出率为64.78%(46/71)。46株携带肠毒素菌株中,sex检出率最高为86.96%(40/46),sei和sem为32.61%(15/46),sen和seo为30.43%(14/46),set为21.74%,seg为13.04%,sea、seb和ser为10.87%,sej和seu为6.52%,sek和seq为4.34%,sed为2.17%。通过本研究发现校园周边农贸市场及路边小摊的熟食中金黄色葡萄球菌污染率和肠毒素基因携带率均较高,新型肠毒素基因检测率高于传统肠毒素基因型,研究结果为金黄色葡萄球菌食品安全提供参考依据。