实时荧光PCR法测定婴幼儿辅助食品中过敏原鱼类成分

目的建立实时荧光PCR检法测定婴幼儿辅助食品中过敏原鱼类成分。方法通过改进的前处理方法,采用实时荧光PCR法,对45个样品进行检测,分别进行特异性、检出限以及适用性试验。结果用于特异性试验的18个样品中,只有鱼类出现特异性扩增;通过7个不同质量配比的鱼肉样品得出检出限低于0.01%;对市售20批样品进行检测,检测结果与样品标识相符。结论该方法快速、灵敏、准确,适用于婴幼儿辅助食品中过敏原鱼成分的检测。     

实时荧光PCR法测定婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分

目的建立实时荧光PCR法检测婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分的含量。方法样品加入淀粉酶液化后,采用试剂盒方法提取样品DNA,考察大麦Hordein基因、小麦Gliadin基因、黑麦Secl基因和燕麦Avenin基因检测方法的特异性、灵敏度和检出限,幵应用于检测实际样品。结果确定了实时荧光PCR反应体系条件,各个基因的检测方法具有特异性强且灵敏度高,检出限为0.1%。结论该方法操作简便,准确率高,适用于婴幼儿谷类辅助食品中麸质成分的检测。     

食品中马源性成分的实时荧光PCR检测

针对马线粒体DNA细胞色素b基因设计特异性引物和探针,建立食品中马源性成分实时荧光PCR检测方法,并经特异性和灵敏度试验验证其可行性。结果表明:该体系可扩增马DNA片段,长度为127 bp,其他常见畜、禽肉成分均无法正常扩增。该体系的检测灵敏度为1.25 pg马DNA和质量分数0.001%马肉粉。经市售食品的检测验证,表明所建立的马引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速、高效等优点,可用于对食品中马源性成分的掺假鉴别检测。     

环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分

目的 建立植物蛋白饮料中大豆成分环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplificantion,LAMP）快速检测技术方法。方法 根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光PCR方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果 本研究建立的LAMP方法特异性强,稳定性好,最低检出限为0.1%（以质量分数计）;通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论 本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。     

双重实时荧光PCR法测定食品中大豆、小麦过敏原

目的:为食品监管部门有效检测食品中大豆、小麦过敏原提供技术支撑。方法:分别依据小麦醇溶蛋白基因及大豆Lectin基因为模板设计并创建TaqMan探针双重荧光PCR方法,大豆Lectin基因检测采用FAM标记,小麦醇溶蛋白基因检测采用HEX标记,同时以真核生物18S rRNA作为内参基因确保检测体系的有效性。结果:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系对大豆、小麦过敏原之外的物种成分无荧光扩增;大豆、小麦混合样品的检出限均能达到0.01%(质量分数)。结论:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系针对大豆、小麦过敏原有高特异性,可用于食品中过敏原大豆、小麦成分的同步快速检测。     

恒温实时荧光法检测金黄色葡萄球菌

恒温实时荧光技术是目前最新颖的核酸扩增方法。本文创建了恒温实时荧光法快速检测微生物技术方法并应用于金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus倒嗍）的快速检测。本研究针对金葡茵特异序列nuc设计6条引物,选取常见病原菌标准株为对照品进行引物特异性检测;选取金葡茵标准菌株进行灵敏度检测;并且利用食品中分离的金葡菌,同时进行LAMP反应和荧光PCR实验,验证LAMP反应的检出率,结合ESEQuaattubescanner进行实时检测。结果显示：所建立的恒温荧光扩增法具有扩增效率高、特异性强、灵敏度高（灵敏度为102CFU／mL）等优点。对50食品中分离的金葡菌进行检测,恒温荧光法检测出50株,荧光PCR的方法检测出50株,两种方法的检出率都为100％。本文引入的ESEQuanttubescanrleT平台结合恒温实时荧光法检测金葡菌不仅操作简单,便于携带,同时实现检测过程的数据化及自动化,适合金葡菌的现场检测和大规模监控。     

菠萝成分的实时荧光PCR检测方法的建立

目的本文研究建立食品中菠萝成分的实时荧光PCR检测方法。方法根据菠萝rbcL基因设计菠萝物种特异性检测引物和荧光探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、灵敏度测试和实际应用检测。结果通过对供试的58种动植物材料进行检测,只有菠萝出现特异性扩增,其他物种材料无扩增;对不同浓度菠萝DNA样品和不同含量的菠萝粉样品进行灵敏度测试,该检测方法对菠萝成分的检测灵敏度分别为0.01 ng/μL菠萝DNA和0.1%菠萝粉;对市场销售的实际样品进行检测,能够满足于检测需求。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于食品中菠萝成分检测。     

EMA结合实时荧光PCR方法检测单核细胞增生李斯特氏菌

建立叠氮溴化乙锭（EMA）结合实时荧光PCR（qPCR）方法检测单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）活菌。以李斯特溶血素O（LLO）基因hly设计引物、TaqMan探针,用李斯特属典型菌、沙门氏菌等56株致病菌株验证特异性,不同质量浓度EMA处理进行qPCR检测。尝试脱氧胆酸钠溶液（SD）强化抑制效果,73份不同的人工污染食品、环境样本（卤鸡肉、牛奶、肉馅、垃圾渗滤液）测试实用性。结果表明,引物探针准确检测L. monocytogenes,对其他菌株无特异性扩增。EMA最适质量浓度2.5 μg/mL,经过15 min光激活与死菌DNA共价结合明显抑制了扩增,方法检出限为150 CFU/mL。SD处理L. monocytogenes活菌Ct值增加。与传统培养法比较,EMA-qPCR方法检测100 %准确,操作简单、省时高效,在食品、环境方面应用前景广阔。     

实时荧光聚合酶链式反应法检测食品中猫源性成分

根据猫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化还原酶亚基1（ND1）基因中的保守序列设计猫特异性引物和TaqMan探针,建立食品中猫源性成分的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法。通过实时荧光PCR反复验证,结果表明,引物和TaqMan探针对猫源性成分的特异性良好,检测灵敏度可达1 pg,适用于食品中猫源性成分的快速鉴定。通过对随机抽取的市售肉制品的检测,尚未发现掺有猫源性成分的行为。     

免疫磁珠-PCR试纸条快速检测食品中牛源成分方法的建立

建立食品中牛成分快速检测的免疫磁珠-PCR试纸条方法。免疫磁珠提取食品中核酸,设计牛特异性引物,建立牛成分快速检测的PCR-试纸条方法。验证方法的特异性、灵敏度和稳定性。该方法检测灵敏度0.01%,能够从食品中扩增出561 bp特异性DNA片段。建立的食品中牛成分检测的免疫磁珠-PCR试纸条法特异性好,灵敏度高,简便,快速,是食品中牛成分检测的有效方法。     

小麦成分环介导等温扩增现场快速检测方法的建立和应用

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法现场快速检测小麦过敏原成分的分析方法,有助于食品安全突发事件现场和食品企业生产过程中的样品检测小麦成分。方法运用LAMP建立食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法,采用实时浊度仪和显色法进行结果判断,并进行反应条件优化。结果本方法特异性强,对35个对照样品无交叉反应;方法的灵敏度高,检测限可达到0.01%小麦;方法稳定性好,对0.1%和0.01%小麦样品重复检测结果稳定。通过对市场采集70份样品检测结果显示,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果一致。结论本方法操作简单,检测时限短,结果判断准确,可用于过敏原小麦成分的快速检测。     

Determination of Some Endocrine-Disrupting Metals and Organochlorinated Pesticide Residues in Baby Food and Infant Formula in Turkish Markets

There is a paucity of data in respect of the nutritional quality of complementary foods for infants and young children aged between 6 and 12 months. In this study, we developed and validated an analytical method for determination of the endocrine-disrupting organochlorine pesticides (OCPs) and elements (As, Cd, and Pb) in infant formula and baby foods. Therefore, it found out the contamination level of the both OCPs and some trace metals (As, Cd, and Pb) in widely consumed infant formula and baby food in Turkey. Metal concentrations in baby foods and infant formula were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry. Samples were digested with nitric acid and hydrogen peroxide in a microwave oven. Determination of 24 organochlorine pesticide residues in baby foods and infant formula was completed by using gas chromatography double mass spectrometry. QuEChERS extraction method was carried out in the sample preparation part. The analytical performance of the entire procedure, such as linearity, the detection of limit, limit of quantification, specificity/selectivity, recovery (%), and precision, were assessed. The recoveries ranged from 93% (As) to 100% (Pb) for elements 78–98% for organochlorine pesticide residues (OCPs) at 100 ng mL^?1. According to the results, lead, cadmium, and pesticides were not detected in any of the samples, while arsenic was detected in 16 samples.     

环介导等温扩增方法在食品中沙门菌检测的应用和评价

将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法 针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果 本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×10²cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2cfu/25g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论 本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。     

环介导等温扩增技术检测不同乳制品常见食源性致病菌

目的 验证环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)试剂和仪器在不同乳制品常见食源性致病菌检测中的应用效果.方法 针对不同乳制品中常见食源性致病菌,运用LAMP建立便捷、快速、高效地检测方法,并以实验室储备菌株及人工污染乳制品样品评价LAMP检测引物试剂...     

环介导等温扩增技术快速检测奶粉中的单增李斯特菌

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下特异、灵敏、快速的新型基因扩增技术。试验以单增李斯特菌为研究对象,根据其特有的hlyA基因设计了一套特异性引物,进行LAMP扩增。结果表明,LAMP检测单增李斯特菌的灵敏度为2.45×101cfu/mL,其对人工感染奶粉样品的检出限为7.32×101cfu/mL。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带,特异性强。表明LAMP法适合于食品中污染单增李斯特菌的快速检测。     

3种常见食源性致病菌多重重组酶聚合酶扩增检测方法研究

目的建立了食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和蜡样芽胞杆菌多重重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）快速检测方法。方法选择沙门菌invA基因、单增李斯特菌hlyA基因和蜡样芽孢杆菌16S RNA序列为目标基因进行扩增,建立并优化多重RPA扩增体系和扩增条件;评价反应体系的特异性和灵敏度,并对人工污染食品样品和实际样品进行检测。结果多重RPA反应体系能够在20 min完成三种目标基因的扩增,特异性强;对沙门菌、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的灵敏度分别为2.70×105、1.30×105、1.44×104 CFU/mL;能够用于人工污染样品和实际样品的检测。结论本研究建立的多重RPA等温扩增方法特异性强,操作快速、简单,为食源性致病菌的快速检测提供新方向     

食品过敏原澳洲坚果环介导等温扩增检测方法的建立与应用

根据澳洲坚果豌豆蛋白AMP2基因序列,利用设计软件Primer Explorer Version 4设计并筛选了食品过敏原澳洲坚果的环介导等温扩增引物,对反应体系和反应条件进行优化,建立澳洲坚果的环介导等温扩增检测方法,结果判断可采用实时荧光法和荧光染料终点显色法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性评价,结果显示：该方法能够特异性、灵敏、稳定地检测食品中的澳洲坚果成分,检测低限为0.5%。此外,对7 种市售食品样品的检测结果表明,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0,在市售食品的过敏原成分检测上较商业化快速检测试纸条更加稳定可靠。