北京市市售贝类、蔬菜、浆果、即食海产品中诺如病毒污染状况检测及检测方法探析

目的对北京市市售贝类(牡蛎、贻贝、扇贝、文蛤、毛蚶)、蔬菜(苗菜、生菜)、浆果(草莓、蓝莓)、即食海产品(三文鱼、即食虾)进行诺如病毒检测。方法贝类、蔬菜、浆果类样品参照ISO/TS 15216-1方法进行前处理,虾类检测参照贝类、三文鱼参照蔬菜的方法并进行改良。病毒RNA提取参照罗氏High pure viral RNA Kit试剂盒方法对样品前处理后的提取液进行提取。实时荧光逆转录聚合酶链反应(实时荧光RT-PCR)的检测使用罗氏Light Mixnoroviurus GI-GII于Lightcycler480 II进行检测,并进行GI-GII分型。诺如病毒阳性样品,参照SN/T2626—2010《国境口岸诺如病毒检测方法》,使用JV12、JV13进行扩增,将获得的DNA扩增片段进行测序并分型。结果经罗氏试剂盒检测贝类食品478份(40份阳性)、蔬菜62份(1份阳性)、浆果84份(0份阳性)和即食海产品51份(1份阳性)。有42份为GI-GII,其中37份为GII型,4份为GI型。在42份阳性样品中,有29份GII型阳性样品对RNA聚合酶区域扩增成功,通过序列分析,27份为GII.17,1份为GII.12,1份为Hawaii.calicivirus。结论通过对北京市市售食品样品中诺如病毒检测发现,贝类食品呈现较明显的季节分布,在冬季检出率较高,贝类食品是诺如病毒污染率最高的食品。     

2015~2016年河北省贝类水产品中诺如病毒污染状况研究

目的 对2015~2016年河北省6个设区市的市售牡蛎、海虹、血蚶样品中的诺如病毒进行连续一年的检测, 了解河北省贝类水产品中诺如病毒污染状况。方法 分离贝类水产品消化腺, 用蛋白酶K消化后进行前处理, 提取RNA, 用一步法实时荧光逆转录聚合酶链式反应法检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒。对河北省贝类水产品的诺如病毒污染状况进行分析。结果 共采集691份贝类样品进行检测, 其中仅检出GⅠ型阳性样品16份, 阳性率2.32%; 仅检出GⅡ型阳性样品22份, 阳性率3.18%; 同时检出GⅠ和GⅡ型的阳性样品4份, 阳性率0.58%; 总阳性率6.08%。2016年6~7月阳性率最高。沿海地区样品阳性率为内陆地区的2.35倍, 有统计学差异(χ2=8.58, P<0.01)。结论 河北省市售贝类水产品中部分存在诺如病毒污染, 需要加强对贝类水产品的诺如病毒污染检测和控制, 特别是沿海地区, 降低诺如病毒引起的食源性腹泻的疾病负担。     

2019年连云港市农贸市场双壳贝类中诺如病毒污染状况调查

目的了解连云港市农贸市场双壳贝类中诺如病毒污染状况。方法于2019年6、8和11月在连云港三县三区各采集10份双壳贝类食物,共180份,及时分离消化腺于-75℃保存,采用实时荧光定量PCR检测诺如病毒基因型。结果 5种双壳贝类中诺如病毒基因总检出率为26.67%(48/180),基因型分型中GⅠ型检出率为5.00%(9/180)、GⅡ型检出率为17.78%(32/180)、GⅠ+GⅡ型检出率为3.89%(7/180);诺如病毒基因检出率在采样月份、地区分布无差异;帘蛤科诺如病毒检出率最高。结论连云港市农贸市场双壳贝类诺如病毒携带形势严峻,分布特征具有特殊性,亟需明确本地的诺如病毒传播模式并采取相应防控措施。     

2018—2022年淄博市市售双壳贝类中诺如病毒检测分析

目的：分析淄博市市售双壳贝类中诺如病毒检测结果,了解其污染情况,为开展食品中诺如病毒风险评估及采取有效防控措施提供数据支持。方法：采集2018—2022年淄博市市售双壳贝类样本155份,提取病毒核酸并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应分别进行诺如病毒GI型和GII型检测。结果：2018—2022年采集市售双壳贝类155份,检出诺如病毒阳性29份,总阳性检出率为18.71%。GII型阳性检出率（10.97%）高于GI型阳性检出率（4.52%）,差异有统计学意义（P <0.05）,不同季度检出率差异有统计学意义（P <0.05）,第一季度检出率最高（50.00%）。结论：淄博市市售双壳贝类中存在诺如病毒污染现象,以GII型为主,第一季度检出率最高,需加强监测,开展相关风险评估,以降低诺如病毒引起的食源性疾病负担。     

餐饮服务单位及宾馆住宿场所环境和食品从业人员中诺如病毒感染状况研究

目的了解诺如病毒在餐饮服务单位和宾馆住宿场所环境中的分布及厨师隐性感染状况,并对其基因型别进行研究。方法共抽检北京市西城区40家餐饮服务单位和10家宾馆住宿场所,每家单位采集4份环境涂抹样品及2名厨师粪便标本。用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)对诺如病毒进行初步鉴定。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对诺如病毒开放读码框(opening reading frames,ORF)1区序列进行扩增,并对测序结果进行序列和进化分析。结果共采集环境表面涂抹样品200份,厨师粪便标本100份。其中,1份墩布池涂抹样品为诺如病毒阳性,环境样品诺如病毒阳性率为0.5%(1/200),3份厨师粪便中检出诺如病毒,隐性感染率为3.0%(3/100)。3名厨师粪便标本诺如病毒ORF1区序列经RT-PCR扩增,进化树显示,1名厨师为GII.17基因型,2名厨师为GI.3基因型。结论北京市西城区餐饮服务单位及宾馆住宿场所存在诺如病毒传播风险,应强化卫生管理,重视物体表面消毒及厨师健康教育,防止诺如病毒的进一步扩散。     

冷链食品中诺如病毒的检测方法研究以及污染状况分析

文章以冷链食品中的诺如病毒为研究对象,建立冷链食品中诺如病毒的高效提取方法。该方法设计特异性引物探针,应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检验冷链食品中诺如病毒,文章应用所构建的方法开展了冷链食品中诺如病毒污染状况的抽样调查。结果表明,应用RT-PCR成功扩增了诺如病毒特征性核酸,在后续使用该方法进行的冷链食品中病毒的抽样检测调查中发现诺如病毒总体检出率为7.0%(27/383),病毒分型发现检出的27株诺如病毒中有25份为诺如病毒GII型,2份为诺如病毒GI型。     

2017年北京市哨点医院腹泻病例诺如病毒感染状况流行病学特征分析

目的 了解2017年北京市食源性疾病监测哨点医院腹泻病例诺如病毒感染的流行病学特征,为诺如病毒的预防控制提供科学依据。方法 采用描述性流行病学方法对收集的北京市35家哨点医院腹泻病例(2 490例)的流行病学信息和诺如病毒检测结果进行统计分析。结果 2 490份病例标本中,诺如病毒的检出率为14.30%(356/2 490),以GⅡ基因组为主(87.08%,310/356)。第一季度和第二季度的诺如病毒检出率较高,分别为17.77%(99/557)和20.69%(149/720);不同性别腹泻病例诺如病毒检出率差异无统计学意义(P＞0.05);不同年龄组腹泻病例诺如病毒检出率差异有统计学意义(P＜0.05),且以15～24岁年龄组检出率最高(21.66%,81/374)。诺如感染者出现恶心(18.40%,188/1 022)和呕吐(22.87%,145/634)症状的比例要明显高于其他腹泻病例。结论 2017年北京市食源性疾病监测哨点医院腹泻病例诺如病毒感染以GⅡ基因组为主,散发感染的流行高峰出现在第一和第二季度,青年人群检出率较高。     

舟山市海产贝类和食源性腹泻病例中肠道腹泻病毒监测

目的了解肠道腹泻病毒在舟山市海产贝类的分布和食源性腹泻病例中的感染特征以及两者相关联系,为预防和控制食源性疾病提供有效的对策和措施。方法采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法对466份舟山市海产贝类和422份食源性腹泻标本中诺如病毒(NoV)GⅠ型/GⅡ型、轮状病毒(RV)、札如病毒(SPV)、星状病毒(AsV)和肠道腺病毒(AdV)5种主要肠道腹泻病毒核酸进行检测。结果 466份海产贝类样品病毒总阳性率为18.03%(84/466),其中NoV GⅡ型为4.08%(19/466),SPV为9.67%(45/466),AsV为2.79%(13/466),AdV为1.50%(7/466);春季和冬季病毒阳性率较高,农贸市场的牡蛎病毒阳性率最高(24.75%,25/101),养殖毛蚶病毒阳性率最低(10.12%,17/168),不同的病毒阳性率以及不同来源和不同季节贝类的病毒阳性率差异均有统计学意义(P0.05)。422例腹泻患者粪便标本总阳性率为15.64%(66/422),NoV为4.74%(20/422,以GⅡ为主),RV为4.74%(20/422),SPV为3.55%(15/422),NoV GⅡ型、RV和SPV的阳性率相对较高,春季和冬季病毒阳性率较高,不同病毒阳性率和不同季节病毒阳性率差异有统计学意义(P0.05)。结论舟山市海产贝类中肠道腹泻病毒的污染状况较为严重,与食源性腹泻病例中的病毒感染特征存在相关联系,其流行季节和优势病毒类型相同。     

贝类中诺如病毒的研究进展

从贝类中诺如病毒的污染现状、检测组织靶点、病毒浓缩方法及效率、检测方法有效性等多个方面评述贝类中诺如病毒的研究现状、进展、急需解决的问题和未来的发展方向,以期为制定诺如病毒检测技术标准及我国贝类进出口贸易提供参考。     

RT-PCR检测食品中诺如病毒检测研究进展

诺如病毒是一种通过食品传染进入人体导致人体急性肠胃炎的杯状病毒。诺如病毒的发病范围越来越广,造成的危害也越来越大。但由于诺如病毒富集及其核酸提取的困难,而且目前缺乏标准有效的诺如病毒检测方法,很难准确地检测到诺如病毒在食品中的存在。目前,荧光定量PCR由于其高灵敏度和特异性被广泛应用于食品中诺如病毒的检测,能有效预防食品中诺如病毒对人体的危害。因此,对诺如病毒的富集、核酸提取方法、诺如病毒的RT-PCR检测方法进行了综述,为控制食品中诺如病毒对人体的危害奠定基础。     

贻贝中诺如病毒荧光定量反转录PCR检测及北京市污染情况调查

目的监测北京市市售贻贝中诺如病毒(NoV)的污染率及污染浓度,为贝类样品中诺如病毒的风险评估提供基础数据。方法解剖并分离贻贝的内脏团,将内脏团研磨至均质,加入磷酸盐缓冲液振荡60 min,提取病毒颗粒。提取病毒RNA,荧光定量反转录PCR检测诺如病毒,并进行定量分析。结果共检测293份贻贝样品,总阳性率为9.22%(27/293),其中诺如病毒基因组Ⅰ(GGⅠ)占阳性样品数的37.04%(10/27),基因组Ⅱ(GGⅡ)占阳性样品数的62.96%(17/27),未检测到同时携带GGⅠ和GGⅡ的样品。阳性样品中诺如病毒浓度范围在6.20×10~3~3.15×10~5基因拷贝/g(内脏)之间。结论北京市市售贻贝中存在诺如病毒污染。     

广西养殖牡蛎中诺如病毒的污染状况及风险评估

目的研究广西养殖场、农贸市场及餐饮场所牡蛎中诺如病毒的污染状况,对广西养殖牡蛎中诺如病毒可能引发的发病风险进行评估。方法采用荧光逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法对广西养殖场、农贸市场、餐饮场所牡蛎样品中诺如病毒污染状况进行检测,采用Risk Ranger软件对牡蛎中诺如病毒进行半定量风险评估。结果 480份牡蛎样品中诺如病毒总检出率为11.04%(53/480),其中养殖场及农贸市场检出率分别为15.83%(38/240)、12.50%(15/120),餐饮场所牡蛎样品未检出诺如病毒;基因分型结果显示检出的诺如病毒均为GⅡ型。风险评估结果显示,加工后食用和生食的风险评分为44和67分,分别为中度和高度风险,预计食用者每人每天患病的可能性分别为3.29×10~(-6)和3.29×10~(-2),预计广西每年患病人数分别为3.10×10~3和3.10×10~7人。结论广西养殖场及农贸市场牡蛎中诺如病毒污染情况较为严重,污染的诺如病毒基因型均为GⅡ型,不生食牡蛎及食用前有效的加工处理是减少诺如病毒食源性疾病发生的有效方法。     

食品中诺如病毒检测技术研究进展

文章介绍了诺如病毒的富集纯化技术,并就目前国内外可用于食品中诺如病毒检测的技术:核酸检测、免疫学检测,以及生物传感器展开了综述,分析比较了各种方法的优缺点,最后对诺如病毒今后的研究方向进行了展望。     

秦皇岛市售生菜、草莓中诺如病毒监测分析

目的 调查秦皇岛市诺如病毒污染的高风险食品生菜和草莓中诺如病毒的污染状况。方法 2015年9月至2016年6月采集市售的生菜201份、草莓136份, 利用实时荧光RT-PCR法检测诺如病毒, 在样品中添加Mengo病毒进行过程控制, 并根据Mengo病毒标准曲线计算 诺如病毒回收率。结果 Mengo病毒回收率均达到了ISO/TS 15216-2-2013对 病毒回收率＞1%的要求。同时对201份生菜样品进行检测, 检出诺如病毒阳性标本9份, 总检出率为4.5%, 其中GⅠ型检出率为0.5%(1/201); GⅡ型检出率为3.5%(7/201); GⅠ型和GⅡ型同时检出率为0.5%(1/201)。136份草莓样品中检出阳性标本4份, 总检出率为2.9%, 其中GⅠ型检出率为0.7%(1/136); GⅡ型检出率为2.2%(3/136)。结论 秦皇岛市售蔬菜、浆果中部分存在诺如病毒污染, 诺如病毒检出率在不同采样环节以及时间分布比较差异无统计学意义, 需要进一步加强日常监测。     

甘肃省兰州地区贝类海鲜、蔬菜水果中诺如病毒污染监测分析

目的:掌握甘肃省兰州地区海鲜贝类、蔬菜水果等诺如病毒的污染状况,发现食品安全隐患。方法:于2017年6月—2018年3月间,在兰州地区批发市场、零售市场、超市随机抽取120个贝类、蔬菜、水果样品,基于Taq Man探针法原理,通过特异性引物、探针结合,采用实时荧光RT-PCR技术对样品进行了GI和GII基因型诺如病毒的检测。结果:诺如病毒总阳性率为4.17%,其中GI型诺如病毒基因不存在,均为GII型。结论:该研究对了解兰州地区贝类海鲜、蔬菜水果中诺如病毒污染状况,加强诺如病毒预防控制提供了科学依据。     

2014—2016年济南市哨点医院食源性诺如病毒感染病例流行病学特征分析

目的 了解济南市哨点医院食源性散发腹泻病例中诺如病毒感染类型以及流行病学状况和临床特征。方法 采集2014年1月—2016年12月济南市2家食源性疾病主动监测哨点医院的腹泻病例粪便标本,并收集病例的临床症状资料和流行病学资料。结果 共收集1 292份病例标本,诺如病毒阳性率为18.58%(240/1 292),其中GII基因型占75.42%(181/240)。不同性别的诺如病毒感染病例以及GI和GII基因型病例阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);2种基因型各年龄段阳性率差异有统计学意义(χ²=27.912,P<0.001;χ²=42.285,P<0.001)。第一和第四季度诺如病毒阳性率高于其他季度,具有季节性分布特点。240例诺如病毒阳性病例中以单纯腹泻症状为主(54.17%,130/240),其次为腹泻+呕吐症状(18.75%,45/240);腹泻强度以中度腹泻为主(38.75%,93/240),平均腹泻频次为5.82次/d,粪便性状均以水样便为主(93.75%,225/240)。诺如病毒阳性病例出现呕吐症状的比例为30.00%(72/240),呕吐频次以1～2次/d居多。可疑暴露食物种类以肉与肉制品所占比例最高,其次为水产动物及其制品和乳及乳制品,占比分别为20.00%(48/240)、18.33%(44/240)和15.00%(36/240)。结论 济南市食源性散发腹泻病例诺如病毒感染类型以GII基因型为主,全年流行且具有明显的季节性,婴幼儿为易感人群。应针对诺如病毒感染的季节性特点,以及暴露人群易感程度的差异和暴露食品种类不同的特点,加强食源性散发腹泻病例的监测、识别和防控。     

2015年甘肃省白银市食源性腹泻患者诺如病毒检测结果分析

目的 分析2015年甘肃省白银市食源性疾病监测人群诺如病毒检测结果,为科学制定诺如病毒引起食源性疾病的预测、预警及防控提供参考依据。方法 对在医院就诊的344例食源性疾病监测病例进行问卷调查,采集粪便标本,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(荧光定量RT-PCR)方法检测诺如病毒GI和GII基因组。结果 2015年白银市报告的344例食源性疾病病例中,检出诺如病毒阳性病例78例,检出率为22.7%(78/344),其中诺如病毒GI基因组阳性5例,GII基因组阳性71例,GI/GII基因组混合感染2例;男性46例,女性32例;阳性患者中年龄最大者83岁,最小者仅3个月,平均年龄为20.3岁。结论 2015年白银市食源性疾病病例中,诺如病毒检出率较高,全年均流行,但流行季节主要在秋冬季,诺如病毒GII基因组为优势组,应加强公众科普宣传教育,提高诺如病毒监测检测能力,完善风险管理措施。     

秦皇岛市部分腹泻患者粪便样本中诺如病毒监测

目的监测秦皇岛市部分诺如病毒引起病毒性腹泻情况,并对阳性样本进行分型。方法收集哨点医院病腹泻患者粪便标本共200份,采用实时荧光定量PCR方法 (real-timeRT-PCR)检测病毒核酸,Mengo病毒作为过程控制和扩增控制,检测诺如病毒回收率和抑制率。结果 Mengo病毒回收率均1%,PCR抑制率≤2%,符合检测要求。检测出病毒阳性15例,其中诺如病毒GⅠ型2例, GⅡ型13例。结论本次采集的样本中诺如病毒流行型分别为GⅠ和GⅡ型,其中以GⅡ组毒株流行为主,诺如病毒阳性率与性别、年龄无关。