北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯分离纯化及结构分析

目的:从北大西洋瓜参(Cucumaria frondosa)体壁中提取纯化得到一种北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯(CF-FUC),并对其结构特征进行研究。方法:利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化出CF-FUC组分,以高效凝胶过滤色谱法测定分子质量,以离子色谱法测定硫酸根含量,以柱前衍生高效液相色谱法测定单糖组成,并通过核磁共振技术推测其精细结构。结果:CF-FUC的分子质量为360kD,硫酸根含量为(29.8±3.2)%,单糖组成为岩藻糖、半乳糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖物质的量比为1:0.22:0.07:0.07,岩藻糖存在两位硫酸酯化α型吡喃岩藻糖及非硫酸酯化α型吡喃岩藻糖两种形式。结论:CF-FUC结构有别于其他海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)。     

阿里红中多糖的分离纯化及其组分分析

目的对阿里红中的多糖进行分离纯化,并对得到的两种多糖组分进行基础结构分析。方法阿里红经水提醇沉法除蛋白后,再经DEAE纤维素-52、Sepharose CL-6B和葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析分离纯化得到两种多糖组分FOPS-a和FOPS-b。采用凝胶过滤法分析其纯度和相对分子量,经气相色谱法分析其单糖组成,并对多糖组分进行部分酸水解,高碘酸氧化和Smith降解分析。结果分离纯化得到的阿里红多糖组分FOPS-a、FOPS-b的相对分子质量为199 kDa和87 kDa。单糖组成均为甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖。FOPS-a主链单糖残基为甘露糖,末端残基和分支单糖残基为阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和鼠李糖;FOPS-b主链单糖残基为甘露糖,末端残基和分支单糖残基为阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖。结论该研究可为阿里红多糖的开发与利用提供技术参考。     

黄酒多糖的分离纯化及理化性质研究

以绍兴黄酒为原料,采用乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到黄酒粗多糖,经DEAE-Sepharose FF色谱柱和葡聚糖凝胶G75色谱柱对黄酒粗多糖进行分离纯化,并采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对黄酒多糖的相对分子质量和纯度进行检测,进一步采用紫外光谱、红外光谱以及核磁共振波谱对黄酒多糖组分CRWP1的结构特征进行初步解析。结果表明:所得多糖组分为纯度较高的中性多糖组分,其重均相对分子质量为7 850;主要由主阿拉伯糖、葡萄糖和木糖组成,并含有少量岩藻糖、半乳糖和甘露糖;所得多糖组分CRWP1为在1,3糖苷键主链上连接有1,4糖苷键支链的杂多糖,含有α糖苷键构型,并且其单糖残基为吡喃型。     

碱提绞股蓝水溶性多糖的研究

对碱提绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum Makino）水溶性粗多糖进行研究,将绞股蓝进行预处理后干燥,水提取绞股蓝多糖后的残渣进行碱提液,经调pH值、除淀粉、透析、4倍体积无水乙醇醇沉与干燥后得到少量碱提水溶性粗多糖,再经过酶法-Sevage法联合脱蛋白分离纯化得AGM.采用葡聚糖凝胶（G-100）柱层析检测其糖分布情况,结果显示AGM可能由两种多糖组成,其中一种含有结合蛋白质.采用高效液相色谱法分析AGM的单糖组成,结果表明,AGM的单糖组成为：鼠李糖：木糖/岩藻糖（其中至少含有木糖或者岩藻糖中的一种）：阿拉伯糖：葡萄糖：半乳糖=2.43：1.00：3.02：2.59：3.46.     

莲子红衣多糖的分离纯化及结构表征

以莲子红衣为实验对象,将其中的多糖进行分离、纯化并表征结构。采用酶提醇析法提取莲子红衣粗多糖,选择DEAE-C阴离子交换树脂和Sephadex G-25凝胶柱层析,从莲子红衣粗多糖中分离纯化得到中性多糖和酸性多糖两种组分。经凝胶渗透色谱测定,中性和酸性多糖的重均分子质量分别为3.78×104 D和4.94×104 D,纯度分别为91.16%和90.24%。中性多糖组分由葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖4 种单糖组成;酸性多糖组分由葡萄糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、阿拉伯糖5 种单糖组成。红外光谱证明两种多糖中均含有糖类特征吸收峰,且为α构型的吡喃型多糖。核磁共振氢谱检测又进一步证实了两种多糖均为α构型。     

金针菇锌多糖分离纯化及其结构特征

目的：以金针菇为原料,经过逐步分离纯化得到两个锌多糖组分并研究其理化性质、光谱学特性及结构特征。方法：金针菇锌多糖采用热水浸提的方法提取,经DEAE纤维素-52和Sephadex G-100凝胶色谱柱逐步分离纯化后通过火焰原子吸收法测定多糖中锌的含量,高效凝胶过滤色谱法鉴定组分的均一性,并测定其分子质量及单糖组成,采用紫外光谱、红外光谱和刚果红实验对锌多糖的结构特征进行相关研究。结果：通过分离纯化得到两个锌多糖组分CF1、CF2,纯品提取率分别为20.97%与12.25%,其中锌含量分别为191、429 μg/g,平均分子质量分别为890、1 244 kD。CF1组分由葡萄糖、半乳糖等6 种单糖组成;CF2组分主要由甘露糖、葡萄糖、岩藻糖等8 种单糖组成,且两个多糖组分均具有三股螺旋分子结构。     

不同分子质量马尾藻岩藻聚糖硫酸酯的制备和化学组成分析

研究H2SO4降解法制备不同分子质量岩藻聚糖硫酸酯的降解条件及其产物的化学组成。依次采用DEAE-52纤维素离子交换层析法、H2SO4降解法、Sephacryl S-200凝胶色谱,制备不同分子质量的岩藻聚糖硫酸酯。运用高效凝胶色谱测定其相对分子质量,并借助衍生化气相色谱和红外光谱对其单糖的组成和结构进行解析。结果表明:在60℃下,含有1%岩藻聚糖硫酸酯的0.05 mol/L H2SO4溶液反应4 h和8 h时后,可以有效可控地将围氏马尾藻岩藻聚糖硫酸酯降解,经纯化后得到MMWF1、MMWF2、LMWF1、LMWF2四组分,其分子质量分别为16.32、15.49、7.65和7.21 k D,总糖含量分别为57.89%、55.45%、56.18%和52.64%,硫酸基含量分别为18.89%、25.11%、14.42%和19.76%。另外,4组分均由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,但各组分的单糖含量不同,红外光谱测定结果显示其均含有多糖的特征吸收峰和硫酸基的吸收峰。     

仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化

目的：以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法：仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。结果：红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构,分子质量约为676kD,硫酸基含量为10.98%,取代度为0.285;硫酸酯化后硫酸基含量为17.43%,取代度为0.360;纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。结论：仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高,抗氧化活性逐渐增强。     

梭柄松苞菇多糖CVP-Ⅱ_2的理化性质及其结构研究

以梭柄松苞菇子实体为原料,采用超声辅助水提醇沉法,经脱色、脱蛋白、DEAE-52离子交换柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析分离纯化得到梭柄松苞菇多糖CVP-Ⅱ2,用高效凝胶渗透色谱(GPC)结合葡聚糖凝胶Sephadex G-100的分离结果鉴定其分子量分布及纯度,利用碘-碘化钾、苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝G-250法、硫酸-咔唑法对其淀粉含量、总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量进行测定;经紫外光谱分析、红外光谱分析、GC分析其官能团特征及单糖组成。结果表明,CVP-Ⅱ2为非淀粉白色絮状均一多糖,其总糖、蛋白质含量、糖醛酸含量分别为:总糖含量为86.76%,不含蛋白质,糖醛酸含量为12.93%;其重均相对分子量Mw为11252u;红外光谱显示CVP-Ⅱ2具有多糖的特征吸收峰且为吡喃型糖环构型;单糖组成结果显示CVP-Ⅱ2含岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其摩尔比为:甘露糖∶岩藻糖∶葡萄糖∶半乳糖=1∶1.63∶29.36∶5.02。     

酶法水解麦冬多糖及其产物的分离鉴定

采用生物酶法水解纯化后的麦冬多糖,并对其产物的成分进行分析。利用葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱对麦冬粗多糖进行分离纯化,得到相对分子质量为48 347的纯麦冬多糖。使用Absidiasp.O8 s菌产酶水解纯麦冬多糖,产物经Sephadex G-100和Sephadex G-50柱分离,得到OP-1、OP-2、OP-3三种组分,相对分子质量分别为32 452、9 231和1 354。通过高效液相色谱分析纯麦冬多糖及其水解产物的单糖组成,结果表明,纯麦冬多糖的单糖组成为葡萄糖和果糖,其水解产物OP-1、OP-2、OP-3三种组分的单糖组成分别为果糖、果糖、葡糖糖和果糖。     

仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

目的：探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性。方法：通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖（polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS）;通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用。结果：获得3 种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用。SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04%、99.4%。结论：从仿刺参卵中分离出3 种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

木瓜蛋白酶提取刺参消化道多糖

采用酶解法提取仿刺参消化道多糖并进行初步性质测定。方法：通过木瓜蛋白酶酶解获得粗多糖,并综合考虑酶解时间、温度、加酶量的影响,获得优化的酶解条件;采用三氯醋酸法除蛋白,Sephacryl S-400 凝胶柱层析进行纯化,并测定其相对分子质量和硫酸基含量。结果：酶解最佳条件为加酶量10400U/g,酶解温度55℃,酶解时间6h,多糖得率8.11‰;纯化多糖为组分单一的酸性多糖,分子质量约25kD,硫酸基含量约为9.29%。     

海参对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制的研究

目的：研究海参对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏的保护作用,并探讨其作用机制。方法： 采用一次性腹腔注射STZ的方法建立糖尿病大鼠模型,在长期高血糖环境下造成对肾脏的损伤。灌胃海参(800mg/(kg·d)8周后,分别检测大鼠空腹血糖值、尿糖含量、肾脏指数和尿总蛋白、微量白蛋白(mAlb)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)排泄率;采用RT-PCR方法测定大鼠肾脏中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA的表达水平。结果：海参能显著降低STZ诱导的糖尿病大鼠空腹血糖值、尿糖含量、肾脏指数以及尿总蛋白、mAlb和NAG排泄率(P＜0.05或P＜0.01),并且能显著上调糖尿病大鼠PPARγmRNA,下调TGF-β1和CTGF(P＜0.05) mRNA的表达。结论：海参对糖尿病大鼠具有良好的降血糖及改善肾脏滤过功能的作用,其机制可能与促进肾脏中PPARγmRNA的表达,抑制TGF-β1和CTGF mRNA的表达有关,最终实现对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

海参低聚肽的高通量HPLC-MS/MS分析鉴定和活性筛选

目的:海参低聚肽中肽段的分析鉴定及活性筛选。方法:采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析鉴定海参低聚肽中的肽段及来源蛋白质,利用在线数据库及构效关系进行降压肽的活性筛选。结果:海参低聚肽中共鉴定到88个小分子肽段,含有大量未经报道的小分子活性肽,来源于19种海参蛋白,主要为胶原蛋白、α-Ⅰ型胶原蛋白、富含甘氨酸的胶原蛋白、Ⅱ型胶原纤维及细胞外基质蛋白3等。经在线数据库活性筛选共获得9个潜在降高血压活性肽,进一步结合构效关系分析发现核心肽段KFPPPM、WEPPTFDGGRP、NPSPPF、FDGPEGPR和RPQYPQYPS具有潜在的降压活性,有望开发为降压肽。结论:该方法能简便快速、高通量、高效率的分析鉴定海参低聚肽中的多个肽段,实现复杂基质样品中多个肽段的快速检测及高效活性筛选,具有潜在的应用价值。     

新疆昆仑雪菊多糖的分离纯化及其结构的初步鉴定

以新疆昆仑雪菊为原料,采用超声波辅助法提取雪菊多糖（KSCP）,经脱蛋白、脱色、透析、DEAE-52层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱纯化后,获得两个多糖组分（KSCP1和KSCP2）;将分离纯化后的多糖组分经紫外光谱分析法、冻融分析法、SephadexG-100凝胶柱层析法对其纯度进行鉴定;采用凝胶渗透色谱法和气质联用法（GC-MS）对KSCP分子质量范围和单糖组成进行分析。结果表明,KSCP1和KSCP2均为单一组分;KSCP1是由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖4种单糖组成,其摩尔比为10.53∶5.02∶4.96∶1,分子质量范围为8 200～8 700 u;KSCP2主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖3种单糖组成,其摩尔比为1∶2.78∶5.07,分子质量范围为6 100～6 500 u。     

福建海参内源微生物多样性分析及益生菌抑菌机理初探

为探明福建吊笼养殖海参内源微生物群落结构及抑菌作用机理,采用16S rDNA序列同源性比对手段对分离自海参肠道中的优势菌株进行多样性分析,测定其中益生菌及其代谢产物脂肽类化合物的抑菌能力,并采用薄层色谱(TLC)初步确定其抑菌成分。结果表明,福建吊笼养殖海参肠道中共分离出95株优势菌株,包括31株潜在益生菌、37株潜在致病菌及27株普通肠道菌。微生物群落结构分析发现,高丰度假交替单胞菌属和不动杆菌属以及低丰度芽孢杆菌属是福建海参体表产生病灶的可能原因之一。以其中8株典型致病菌为指示菌,筛选出两株抑菌谱广且抑菌能力较强的益生菌菌株-解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)YD1及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YK5,其脂肽类代谢产物的抑菌作用明显,初步确定其中的抑菌成分均为含有亲水性成分的环脂肽类化合物。本研究为开发新型微生态制剂和功能性益生菌提供了重要的理论支持。     

桑叶酸性蛋白多糖(APFM)的分离纯化及其结构与部分理化性质的研究

本实验主要研究湖桑(Morus alba L.Husang)的粗老桑叶中酸性蛋白多糖的提取、分离、纯化及结构鉴定。水煎法提取桑叶粗多糖,D-101大孔树脂柱层析,脱蛋白,脱色,再上DEAE纤维素(DE-32)柱及Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱对产物进行分离纯化,得HPLC单一峰的桑叶多糖纯品。通过单糖组成分析、酸性基团含量、IR、UV、HPLC及氨基酸组分测定等方法解析其结构及理化性质。实验结果显示:该多糖分子量达50万,多糖主链主要为α-型吡喃糖连接,由D-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成,摩尔比为8.91:2.71:1.00:3.75:6.04;该多糖糖醛酸含量为5.33%,硫酸根含量为8.03%;其蛋白质部分占多糖总量的0.83%;含17种氨基酸,其中7种为人体必需氨基酸。表明该多糖为酸性蛋白多糖(acid proteoglycan from Folium mori,APFM)。     

大蒜多糖的体外抗凝血作用及结构分析

采用碱提法和DEAE-52纤维素柱层析法,从大蒜中分离纯化出3种多糖组分(GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ);采用体外抗凝血活性试验分析了大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ的抗凝血作用;采用SephadexG-100凝胶层析法和冻融分析法鉴定GPⅠ的纯度,采用气相色谱分析了GPⅠ的单糖组成,首次采用凝胶渗透色谱与多角度光散射仪及示差检测器连用系统测定了GPⅠ的分子结构。结果表明:GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ分别为大蒜多糖总量的75.2%、15.5%、9.3%;大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ能显著延长人体血浆的APTT值,通过影响内源性凝血系统发挥抗凝血作用;GPⅠ由鼠李糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖及1种未知单糖组成,构成比例为1.5∶1.1∶3.3∶1∶5.1∶3.5,分子质量为5.2×104～5.6×104u,分子旋转半径为31.5～32.9nm,分布宽度指数为1.039和1.084,分子呈球形。     

刺参中过氧化物还原酶peroxiredoxin4的抗氧化活性分析

目的 研究刺参中的抗氧化活性物质Peroxiredoxin4。方法 利用生物信息学方法对刺参Peroxiredoxin4一级结构进行分析,克隆并表达重组刺参Peroxiredoxin4蛋白,构建DTT/Fe3+/O2混合功能氧化酶体系,确定重组刺参Peroxiredoxin4蛋白功能。结果 刺参Peroxiredoxin4氨基酸序列含有活性Cys,且活性Cys位于Prx4保守基序FYPLDFTFVCPTEI和HGEVCPAGW中,克隆得到的重组刺参Peroxiredoxin4蛋白能够保护DNA免遭氧化剂损伤。结论 重组刺参Peroxiredoxin4蛋白具有抗氧化生物学活性。     

玉米须多糖纯化工艺的研究

水提醇沉玉米须得到的粗多糖类物质,经脱蛋白脱色及凝胶色谱纯化后分别经液相色谱和气相色谱测定,研究中分别考察了Sevag法和TCA法脱蛋白效果,交联葡聚糖凝胶色谱G-75和G-100对玉米须多糖的分离效果.结果表明,玉米须多糖经过反胶束溶液脱色,脱色率达到91.43%,多糖回收率达到77.59%.SephadexG-100对玉米须多糖分离效果较好.玉米须多糖通过高效液相色谱鉴定玉米须多糖的纯度,无单一对称峰出现,表明多糖类物质不纯.通过气相色谱测定了玉米须多糖的单糖组成为甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和果糖五种单糖.