酶法提取林蛙卵黑色素的工艺及抗氧化活性研究

研究木瓜蛋白酶酶解法提取林蛙卵黑色素工艺,分析林蛙卵黑色素的抗氧化活性。以林蛙卵为原料,通过单因素试验和正交试验,分析木瓜蛋白酶的用量、料液比、酶解温度、酶解时间对黑色素提取率的影响,确定林蛙卵黑色素酶水解法的最佳提取工艺;应用DPPH法测定林蛙卵黑色素对DPPH·的清除能力。得出木瓜蛋白酶解法提取林蛙卵黑色素的最佳条件为:酶用量为30 mg,反应温度58℃,料液比1∶20(g/mL),反应时间4 h,林蛙卵中黑色素的提取率为13.23%。黑色素对DPPH·具有显著的清除作用,0.4 mg/mL的林蛙卵黑色素对DPPH·的清除率达52%。     

微生物酶水解林蛙肉蛋白质及产物抗氧化活性初探

研究了微生物碱性蛋白酶对林蛙肉蛋白质的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶浓度、水解温度、时间、pH值对林蛙肉蛋白质水解度的影响,同时用硫氰酸铁和改进的邻苯三酚法测定分析水解液的抗氧化活性.结果表明,酶解条件酶浓度为3%、温度为45℃、时间为2.5h、pH6.0时可以获得较高水解度,同时水解液对Fe3+和超氧阴离子自由基(O2·)具有较高清除率.     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe³⁺还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

影响林蛙卵油提取率工艺参数的研究

以林蛙卵为原料进行林蛙卵油提取的研究。对影响林蛙卵油提取率的因素,如提取溶剂的选择、提取温度、提取时间及提取料液比等条件进行研究,并进行了正交试验。确定了获得最大提取率的条件。即:以石油醚(60~90)作提取剂;提取温度65℃;提取时间为5h;提取料液比为1∶10。并对提制的林蛙卵粗油进行精制,得到透明浅黄棕色。     

酶解对乌骨鸡多肽抗氧化活性影响的研究

研究了不同的酶及酶解条件对乌骨鸡多肽抗氧化能力的影响,以得到最优的酶解条件及较高抗氧化能力的多肽。结果表明,在温度为50℃、酶用量[E/S]8000U/g、底物浓度为7%时,胰蛋白酶水解乌骨鸡多肽可以获得更高抗氧化能力的多肽;进一步对胰蛋白酶水解条件正交实验优化,结果表明,胰蛋白酶水解的最优条件为温度50℃、pH8.5、酶用量[E/S]6000U/g、反应时间6h及底物浓度9%,此时有最高的抗氧化能力,在33.3μg/mL乌骨鸡多肽浓度时能清除45.41%的羟自由基,比同一浓度条件下的VC的羟自由基清除率高了4%。      

酶解对乌骨鸡多肽抗氧化活性影响的研究

研究了不同的酶及酶解条件对乌骨鸡多肽抗氧化能力的影响,以得到最优的酶解条件及较高抗氧化能力的多肽。结果表明,在温度为50℃、酶用量[E/S]8000U/g、底物浓度为7%时,胰蛋白酶水解乌骨鸡多肽可以获得更高抗氧化能力的多肽;进一步对胰蛋白酶水解条件正交实验优化,结果表明,胰蛋白酶水解的最优条件为温度50℃、pH8.5、酶用量[E/S]6000U/g、反应时间6h及底物浓度9%,此时有最高的抗氧化能力,在33.3μg/mL乌骨鸡多肽浓度时能清除45.41%的羟自由基,比同一浓度条件下的VC的羟自由基清除率高了4%。     

糯米酶解工艺以及抗氧化活性研究

使用4种蛋白酶水解白糯米,以羟自由基清除率作为指标,选取中性蛋白酶作为水解用酶。考察了蛋白质底物浓度、酶添加量、酶解温度、初始pH 4种因素对于中性蛋白酶糯米酶解液羟自由基捕获能力的影响。在单因素实验基础之上,使用L9(34)正交优化试验设计,确定酶解液具有最高抗氧化能力的酶解工艺条件。优化后的工艺参数为底物浓度2%,酶添加量24 000 U/g(以蛋白质计),酶解温度55℃,pH8,作用时间0.5 h。在该条件下羟自由基清除率平均值可达56.05%。底物浓度、酶添加量、温度以及pH 4种因素对于羟自由基(.OH)清除率差异影响均极显著。糯米酶解液中的抗氧化肽等成分在60℃～100℃的温度范围内活性保持很好。     

酶解条件对花生粕水解液的抗氧化活性影响研究

以花生粕为原料,经Alcalase碱性蛋白酶水解,研究不同加酶量、底物浓度、酶解温度、酶解时间和酶解pH对花生粕水解液抗氧化性的影响.在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对花生粕的酶解条件进行优化,以羟基自由基清除能力为考察指标,确定最佳的酶解条件为:加酶量11820U/g,底物浓度为7.52％,酶解温度为43.1℃,酶解时间为3.9h,酶解pH为8.47,羟基自由基清除能力为60.54％,在上述优化后的工艺条件下的验证实验测得羟基自由基清除能力为60.21％.     

东北林蛙卵蛋白酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性

研究复合蛋白酶对东北林蛙卵蛋白的酶解工艺及其酶解物的抗疲劳活性。分别考察pH值、加酶量、固液比、反应时间、反应温度对林蛙卵蛋白水解度的影响,并通过正交试验得到最佳酶解工艺条件：加酶量3000U/g pro、温度55℃、pH8.0、水解时间5h、固液比1:5.5(m/V)。以昆明小鼠为实验对象,通过测定小鼠的负重游泳时间、肝糖原及血乳酸含量,研究东北林蛙卵蛋白酶解物的抗疲劳活性,结果显示最佳优化条件下得到的林蛙卵蛋白酶解物具有较好的抗疲劳作用。     

酶解条件对花生粕水解液的抗氧化活性影响研究

以花生粕为原料,经Alcalase碱性蛋白酶水解,研究不同加酶量、底物浓度、酶解温度、酶解时间和酶解pH对花生粕水解液抗氧化性的影响。在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对花生粕的酶解条件进行优化,以羟基自由基清除能力为考察指标,确定最佳的酶解条件为:加酶量11820U/g,底物浓度为7.52%,酶解温度为43.1℃,酶解时间为3.9h,酶解pH为8.47,羟基自由基清除能力为60.54%,在上述优化后的工艺条件下的验证实验测得羟基自由基清除能力为60.21%。      

蛋清多肽体内外抗氧化活性的研究

本试验通过体外试验和动物试验两方面研究蛋清多肽(egg white polypeptide,EWP)的抗氧化能力,测定了1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基的清除能力和总还原能力以及小鼠血清、肝脏和心脏组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果表明,蛋清多肽浓度为5 mg/mL时,其对DPPH自由基清除率为69.2%,羟自由基清除率为68.5%,蛋清多肽对DPPH自由基和羟自由基均有较好的清除作用,并且清除率与浓度呈正相关。蛋清多肽可显著提高小鼠血清、肝脏和心脏组织中SOD活力和GSH含量(P<0.05),显著降低机体内MDA含量(P<0.05),且蛋清多肽灌胃剂量为150~900 mg/kg时,抗氧化能力与蛋清多肽浓度有一定量效关系,且高剂量组效果最佳。本研究为开发新型生物活性肽,提高农产品附加值提供理论基础与数据支持。     

微波辅助提取林蛙卵油的工艺优化及脂肪酸组成分析

以林蛙卵为原料,以无水乙醇为提取剂,研究微波法对林蛙卵油提取率的影响。在单因素试验的基础上,进行响应面优化试验,研究料液比、浸泡时间、微波功率对林蛙卵油提取的影响。结果表明,提取最佳工艺条件为料液比1∶9.82(g/mL)、浸泡时间3.33 h、微波时间30 min、微波功率600 W;林蛙卵油的提取率可达到(20±0.67)%。与其他林蛙卵油提取方法比较,微波法辅助提取林蛙卵油具有得率高的优点。对得到的林蛙卵油采用气相色谱-质谱分析检测出27种脂肪酸,不饱和脂肪酸质量分数54.98%,其中以亚油酸、二十碳二烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、亚麻酸、棕榈反油酸、二十二碳五烯酸含量较高。     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(3⁴)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

中国林蛙蛙皮肽抗菌性质及其机理的研究

本实验对从中国林蛙的皮肤中提取的蛙皮肽的抗菌性质及其机理进行了研究。结果表明,该蛙皮肽抗菌谱较广,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌都有较好的抗菌效果,其抗菌活性具有很强的热稳定性,且在酸性条件下抗菌活性强,当pH 值大于8 时丧失抗菌活性。对经蛙皮肽处理的枯草杆菌作电镜扫描检查,发现细菌细胞壁出现破损或穿孔,而对照组细菌壁结构完整,表明该蛙皮肽的抗菌机制是通过破坏细菌细胞壁,使细胞质外流而致菌体死亡。     

中国林蛙皮抗菌肽的提取纯化及抑菌活性检测

采用酸化甲醇法提取中国林蛙皮肤中的抗菌肽,并采用凝胶色谱的方法对提取物进行纯化。结果表明：采用Sephadex G-50 和Sephadex G-25 串联凝胶层析法获取的F2 组分,即纯化后的抗菌肽的抑菌率可达90% 以上。抗菌肽对革兰氏阴性菌和阳性菌以及真菌均有一定抑制效果。对各受试菌株的最小抑菌浓度(MIC)分别为：金黄色葡萄球菌和链球菌为0.2mg/mL;枯草芽孢杆菌和大肠杆菌为0.4mg/mL;蜡样芽孢杆菌为0.8mg/mL;白色念珠菌为1.2mg/mL;酿酒酵母和毛霉为1.5mg/mL;根霉为2.0mg/mL。     

响应面法优化林蛙皮中透明质酸的提取工艺

以中国林蛙皮为原料,用透明质酸提取得率作为衡量提取工艺的指标。在单因素实验的基础上,在料液比1∶40（g/m L）的条件下,利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法探索了双酶（碱性蛋白酶+胰蛋白酶）水解的酶解温度、酶解时间(h_{碱性蛋白酶}=h_胰蛋白酶)、加酶量（碱性蛋白酶∶胰蛋白酶=1∶1）3个因素作为自变量及其交互作用对响应值透明质酸得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定最佳提取工艺条件为加酶量55000 U/g、酶解时间14 h、酶解温度50℃,在此条件下,平均透明质酸提取得率为27.6839 mg/g,葡萄糖醛酸的含量为13.8420 mg/g,转化成百分含量为42.2%。说明响应面优化双酶法提取林蛙皮透明质酸条件准确可行。      

林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响

研究林蛙油对冷应激小鼠抗氧化能力的影响,为林蛙油的合理开发和利用提供依据。本实验将40 只雄性昆明品系小鼠随机分为4 组：对照组、冷应激组、林蛙油5 倍剂量组和25 倍剂量组,每组10 只。对照组和冷应激组灌胃生理盐水,5 倍剂量组和25 倍剂量组灌不同剂量的林蛙油,每组连续灌胃28d。灌胃到第15 天,每天除对照组灌胃后置室温外,其他各组灌胃30min 后,置－ 10℃冰箱30min,连续14d,杀鼠,测血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,林蛙油可以增加小鼠血和脑组织中SOD 活性(p ＜ 0.01),降低MDA 含量(p ＜ 0.01),在低温条件下林蛙油能增强小鼠抗氧化能力。     

林蛙卵雌二醇的超临界CO_2萃取及酶联免疫分析

以长白山林蛙卵为原料,研究超临界CO2萃取林蛙卵中的雌二醇的工艺条件。探讨萃取压力、萃取温度、CO2流量和萃取时间对雌二醇萃取率的影响,并采用酶联免疫分析法检测林蛙卵雌二醇的含量。结果表明最佳萃取条件为萃取压力30 MPa,萃取温度47℃,CO2流量为12 kg/h,萃取时间为90 min。酶联免疫分析得到林蛙卵中雌二醇的含量为38.11 ng/L。     

高压脉冲电场提取中国林蛙多糖的研究

通过单因素考察及正交试验优化了用高压脉冲电场提取中国林蛙多糖的试验条件，并与碱提取法、酶提取法以及复合酶提取法进行了比较。结果显示用0．5％KOH提取液，在电场强度为20kv／cm和脉冲数为6μs的条件下用高压脉冲电场提取林蛙多糖的提取率最大为55．59％。比较高压脉冲电场提取法与碱法、酶法以及复合酶法在林蛙多糖提取率、总糖含量方面的差异，高压脉冲电场提取的林蛙多糖提取率和总糖含量均高于其他三种方法，其提取率是复合酶法的1．77倍，总糖含量高于复合酶法6．34％，且提取物中杂质少。因此，高压脉冲电场提取多糖是一种很有希望的多糖提取新方法。