鸡蛋致敏原溶菌酶的B细胞IgG线性表位定位

目的 探究鸡蛋致敏原溶菌酶的B细胞线性表位。方法 先使用DNAStar、Immunomedicine Group、BepiPred、Bcepred和ABCpred对其氨基酸序列分析,预测其潜在的B细胞线性表位,同时合成覆盖其完整氨基酸序列的重叠肽,然后利用斑点杂交法筛选出与抗溶菌酶兔血清IgG特异性结合的多肽片段,从而定位出溶菌酶的B细胞IgG线性表位。结果 通过生物信息学工具综合分析预测出了鸡蛋溶菌酶的4个B细胞线性表位,分别为AA18～21(DNYR)、AA39～51(NTQATNRNTDGST)、AA62～78(WWCNDGRTPGSRNLCNI)、AA109～117(VAWRNRCKG);利用dot-blot定位出5个鸡蛋溶菌酶的B细胞IgG线性表位,分别为AA1～15(KVFGRCELAAAMKRH)、AA28～30 (WVC)、AA70～78 (PGSRNLCNI)、AA103～117 (NGMNAWVAWRNRCKG)、AA124～126 (IRG)。研究结果表明,采用生物信息学工具预测的B细胞线性表位与已知的溶菌酶的B细胞IgE线性表位的重合率达75%,与用dot-bl...     

鸡蛋过敏人群中主要过敏原的反应性及卵类粘蛋白抗原表位的初步研究

目的分析年龄、性别对鸡蛋过敏人群中主要过敏原反应性的影响,初步探索我国鸡蛋过敏儿童卵类粘蛋白的主要抗原表位。方法以卵类粘蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白纯品为抗原,采用免疫斑点印迹,检测21例鸡蛋过敏儿童血清特异性免疫球蛋白E(SIgE)与蛋白反应性,分析年龄、性别因素对过敏原反应性的影响;应用DNAStar生物分析软件,预测并合成卵类粘蛋白抗原表位肽段,采用免疫斑点印迹检测抗原表位与鸡蛋过敏儿童血清的反应性。结果 A(≤1岁)组、B组(2~3岁包括3岁)、C组(3岁)的卵类粘蛋白反应率差异有统计学意义(P0.05),卵白蛋白、卵转铁蛋白反应率各组间均差异无统计学意义(P0.05);性别对各过敏原的反应率差异无统计学意义(P0.05);卵类粘蛋白抗原表位反应率较低。结论卵类粘蛋白sIgE在不同年龄段存在差别,卵白蛋白sIgE在21例患者均可检测出,卵转铁蛋白s Ig E在各年龄段无明显差别;应用DNAStar生物软件预测的卵类粘蛋白抗原表位,在天津地区反应性低,不是该地区主要抗原表位。     

花生过敏原Ara h 2.02 二级结构和B 细胞抗原表位预测

为预测花生过敏原Ara h 2.02 的二级结构和B 细胞抗原表位,通过Genbank 数据库搜索到Ara h 2.02 基因,并推导出其相应的氨基酸序列,采用SOPMA 和DNAStar 软件预测该蛋白质的二级结构以及通过Jameson-Wolf 法、Kyte-Doolittle 法、Emini 法和Karplus-Schulz 法分别预测其抗原指数、亲水性、表面可性、柔韧性等参数,并综合分析预测该蛋白的B 细胞抗原表位。结果表明：在序列28～31、56～73、76～90、92、148、156～158、168～169 区域最可能是Ara h 2.02 蛋白的B 细胞抗原表位的优势区域。该结果将为寻找Ara h 2.02 的最佳优势表位提供支持,同时为该蛋白单克隆抗体的制备等研究提供理论依据。     

日本沼虾原肌球蛋白线性表位预测研究

本文旨在预测日本沼虾原肌球蛋白的线性表位,为相关食物过敏的识别与检测提供依据,同时为基于抗原表位的致敏性消减提供靶标。采用DNAStar软件、SOPMA、BepiPred 1.0 Server及ABCpred在线网站预测日本沼虾原肌球蛋白的B细胞线性表位,应用SYFPEITHI、NetMHCII 2.3 Server与NetMHCIIpan 3.2 Server预测T细胞表位。综合分析以上预测结果,表明日本沼虾原肌球蛋白可能的B细胞线性表位有21RADTLEQQNKEANN34、37EKTEEEIRTTQKKMQQ52、71LEEKEKA77、99LERSEERLN107、119AADESER125、134SLSDEER140、158ADRKYDE164、177ERAEERAETG186、210SEEKANQREEAYKE223、262NEKEKYK268,可能的T细胞表位有82EGEVAALNRRIQLL95、105RLNTATTKLAEAS117、165VARKLAMVEADLE177、195EELRVVGNNLKSLE208、222KEQIKTLTNKLKAA235。该结果可为继续深入开展日本沼虾过敏原基础性研究提供更精准的靶标。     

生物信息学技术在食物过敏原表位预测中的应用

表位是过敏原与抗体结合的物质基础。基于生物信息学技术的表位预测包括线性表位预测和构象性表位预测。其中线性表位预测主要是基于过敏原蛋白的理化性质进行预测;构象性表位预测主要包括基于蛋白结构信息和结合噬菌体展示技术的两大类预测。利用生物信息学技术预测食物过敏原表位主要应用在牛乳、鸡蛋、鱼、甲壳类水产动物等动物性食物过敏原和花生、大豆、小麦、果蔬类等植物性食物过敏原方面。     

芝麻主要过敏原Ses i 6抗原表位预测及敏感人群分析

芝麻蛋白是一类营养全面的完全蛋白。Ses i 6作为芝麻蛋白质的主要成分同时也是主要过敏原。本研究旨在探明Ses i 6的致敏表位。经过生物信息学分析预测,B细胞线性表位为QTREPRLTQ、RTMERTEASEQQDRG、RSGEQEQQAR、QEHRGRQL,空间上共分布有10处B细胞构象表位,HLA-DQA10601-DQB10402基因携带者为主要的敏感人群。     

鸡蛋过敏原表位研究进展

鸡蛋过敏是一种常见的食物过敏反应,是人体对鸡蛋中蛋白质成分产生的一种变态反应。食物过敏反应的物质基础是抗原表位与抗体对位,解决食物过敏反应问题的关键一点即需要深入研究出过敏原的表位。本文介绍了鸡蛋中6种主要过敏原,简述了过敏原表位的定位方法,并详细综述了卵白蛋白、卵类粘蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶的过敏原表位研究进展。本文可为进一步鸡蛋过敏研究提供理论指导,也可为表位成分的定量检测以及无毒副作用鸡蛋过敏原疫苗的开发等方面提供一些参考。     

核桃中主要过敏原Jug r 1 B细胞线性表位中关键氨基酸的免疫信息学预测和识别

为确定影响Jug r 1线性表位致敏性的关键氨基酸,研究2 种免疫信息学方法预测Jug r 1线性表位关键氨基酸的准确率和效率,以进一步认识核桃主要过敏原Jug r 1的B细胞线性表位。本研究通过2 种免疫信息学的方法对Jug r 1中3 个线性表位上的关键氨基酸进行预测,采用丙氨酸扫描诱变法对关键氨基酸进行识别,采用固相合成技术合成Jug r 1系列突变多肽,以部分中国核桃过敏患者血清为探针,识别Jug r 1关键氨基酸。结果表明：表位1（4LVALLFVANAAA15）中的第4位亮氨酸、第7位亮氨酸、第8位亮氨酸和表位2（16FRTTITTMEIDEDID30）中的第20位异亮氨酸、第21位苏氨酸、第22位异亮氨酸以及表位3（125CGISSQRCEIRRSWF139）中的第127位异亮氨酸、第129位丝氨酸、第130位谷氨酰胺为关键氨基酸。使用两种免疫信息学结合预测的关键氨基酸准确率达到100%,但预测效率仅为11%。因此,使用2 种免疫信息学结合的方式预测表位关键氨基酸可提高准确性,但会忽略一些关键氨基酸。免疫信息学结合丙氨酸扫描诱变法是识别表位关键氨基酸的重要研究思路。     

基于表位预测的花生过敏原Ara h 6 免疫交叉反应性研究

为了探讨花生过敏原Ara h 6 与其他同源蛋白之间的交叉反应,通过各种生物信息数据库(Genbank,DiscoTope)以及网络工具及软件(BLAST,NPS@和Protean,Clustal x,PyMOL),开展基于表位预测的Ara h 6交叉免疫反应性研究。结果表明：肽段AA10～15、45～48、53～60、116～118 区域可能是Ara h 6 的线性表位优势区域;Ara h 6 的构象型表位优势区有4 个,它们存在的区域为AA1～13、35～51、53～59、89～105;基于线性表位预测的15 种蛋白质与Ara h 6 可能具有交叉反应性,其中4 种(Ara i 6,conglutin,Ara d 6 和conglutin 8)发生交叉反应的概率为100%;基于构象型表位预测的17 种蛋白质与Ara h 6 可能具有交叉反应性,其中4 种(Ara i 6,conglutin,Ara d 6 和conglutin 8)发生交叉反应的概率为100%。本结果对进一步了解Ara h 6 的过敏性以及指导开展食品中Ara h 6 的免疫学检测具有重要作用。     

牛奶过敏原表位研究进展

详细地综述了牛乳酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、牛血清白蛋白的过敏原B细胞表位以及T细胞表位的研究进展,介绍了牛乳过敏原之间构象性表位的相似形以及线性表位序列位置的特异性,同时也简述了牛乳过敏原表位定位的方法及表位定位的应用。     

超声辅助磷酸化修饰对卵转铁蛋白理化及乳化特性影响的研究

卵转铁蛋白(Ovotransferrin,OVT)是蛋清中一种重要的功能蛋白质,前期研究多聚焦于OVT在补铁和抗菌活性等方面,而对其乳化特性研究报道较少。为扩大其应用领域,以OVT为研究对象,研究探讨了超声辅助磷酸化修饰对OVT理化及乳化特性的影响。结果表明:超声时间对磷酸化程度有显著影响,随着超声时间增长,蛋白的磷酸化程度呈现上升趋势,在超声时间为10 min时的磷酸化程度较高,达到0.0686 mg/g。超声辅助磷酸化修饰蛋白的粒径减小,电位绝对值增大,热稳定性提高。傅里叶变换红外光谱表明,磷酸基团(P=O、P—O)已成功引入蛋清蛋白侧链中,导致蛋白结构发生改变。综合研究发现改性后的OVT表现出了良好的乳化活性和乳液稳定性,其乳化性、乳化稳定性与天然OVT相比均有所提升,其中超声处理10 min时达到最大值127.29 mL/g。该研究有效提高了OVT的乳化性,为其在食品、医药等领域应用拓展了空间。     

Effect of heat treatment on the potential allergenicity and conformational structure of egg allergen ovotransferrin

The aim of this research was to assess heat induced changes of the potential allergenicity and the structure of ovotransferrin (OVT). Changes in conformational structure of OVT were characterised by circular dichroism (CD) spectroscopy, ultraviolet (UV) absorption spectroscopy and fluorescence spectroscopy. A reversible unfolding structure was found at 55-60 °C, followed by the loss of secondary structure at 70-80 °C. Cleavage and rearrangements of disulphide bonds occurred when heated above 80 °C. The indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of heat-treated OVT with egg allergic patients’ sera and specific rabbit polyclonal antibodies against native OVT showed that the potential allergenicity of OVT correlated well with the structural changes. Allergenicity increased with the unfolding of its structure, and decreased with the cleavage of disulphide bonds and the rearrangements of disulphide bonds. The results suggested that conformational changes of OVT induced by heat treatment significantly influenced the allergenicity of OVT, and the potential allergenicity of heated OVT is related to individual patient characteristics.     

聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用

研究3 种pH值条件下4 种聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）对卵白蛋白（ovalbumin,OVA）、卵转 铁蛋白（ovotransferrin,OVT）与溶菌酶（lysozyme,LYZ）的沉淀效率,根据变化规律建立无需后续脱盐的OVA 分离新工艺。结果表明：PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ,沉淀率受PEG质量分 数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时,OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大,当pH值从7.5调至 5.5时,3 种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺：首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至 质量分数为12%,离心收集上清液,即得纯度88.1%的OVA,提取率为95.1%;再将所得上清液pH值调至5.5,离心 收集上清液,所得OVA纯度提高至99.7%,提取率为87.3%。该工艺简便易行,有利于OVA的大规模制备及在食品 及医药领域的应用。     

卵转铁蛋白体外免疫活性研究

研究卵转铁蛋白(OVT)的体外免疫活性。分别采用中性红吞噬法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;MTT法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬和脾淋巴细胞增殖作用的影响;双抗体夹心ELISA法测定卵转铁蛋白对脾淋巴细胞IL-2分泌水平的影响。结果表明,OVT能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对中性红吞噬能力(P<0.01),协同LPS促进腹腔巨噬细胞的增殖(P<0.05),并显著改善由CsA引起的对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活性的抑制作用(P<0.05);OVT能显著促进脾淋巴细胞的增殖(P<0.01),协同LPS和ConA促进小鼠脾淋巴细胞的增值(P<0.05),并能显著促进小鼠正常脾淋巴细胞IL-2的分泌(P<0.01)。在体外培养的条件下,卵转铁蛋白对正常小鼠免疫细胞的免疫能力有促进作用。     

Impact of food processing on the structural and allergenic properties of egg white

BackgroundEgg is one of the most nutritious foods that is easily available and it has become a favorite source of major nutrients like lipids and proteins around the world. However, eggs can trigger severe allergic reactions, especially in infants and children. The reactions are mostly IgE-mediated with a range of symptoms related to nose and throat and further can lead to life-threatening anaphylaxis. A total of ten allergens have been recognized to date and researchers are actively working on understanding their structure-function relationship which could help reduce the allergy incidences. Major egg allergens are abundant in egg white which include ovalbumin (OA), ovomucoid (OVM), ovotransferrin (OVT) and lysozyme (Lys). In addition to allergens, avidin present in egg white is also extensively studied due to its anti-nutritional properties. Avidin is known to form a complex with biotin which makes it unavailable for absorption.Scope and approachThis review focuses on the effects of thermal and non-thermal processing methods on the structure and functional properties of various egg proteins including a wide range of allergens and anti-nutrients.Key findings and conclusionsNovel processing techniques including various non-thermal techniques show promising results in reducing the allergic reactions of egg. Anti-nutrients like avidin can be partly inactivated under combined high-pressure processing and heat treatment.     

卵转铁蛋白对免疫低下小鼠Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:研究卵转铁蛋白(OVT)对免疫低下模型小鼠的免疫平衡恢复作用。方法:将健康小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及OVT高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组10只。OVT高、中、低剂量组分别以10、1、0.1mg/mL的OVT溶液每天灌胃,灌胃量为20mL/(kg.d)(以体质量计)。模型组对照组和正常对照组灌胃生理盐水20mL/(kg.d)。连续灌胃15d,于第15天灌胃后注射环磷酰胺(正常对照组除外),继续灌胃至第19天(由模型决定)进行检测。测定血清中IFN-γ和IL-4含量、IFN-γ/IL-4比值以及脾脏和胸腺指数。结果:模型对照组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值与正常对照组相比明显降低(P<0.01);高剂量组小鼠血清IFN-γ的浓度和IFN-γ/IL-4比值显著高于模型对照组(P<0.01),与正常对照组比较,无显著性差异;高剂量组的脾脏指数和胸腺指数与模型对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:OVT能修复由环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠的体液和细胞免疫失衡,增强免疫低下小鼠的免疫功能。     

Development of high internal phase Pickering emulsions stabilised by ovotransferrin–gum arabic particles as curcumin delivery vehicles

This study explored feasibility of preparing high internal phase Pickering emulsions (HIPEs) as curcumin delivery vehicles. Particles assembled from ovotransferrin (OVT) and gum arabic (GA) could stabilise HIPEs successfully, and OVT–GA particle-stabilised HIPEs with extremely high oil fraction of 0.90 were stable. Droplet size and rheological properties of OVT–GA particle-stabilised HIPEs were dependent on both particle concentration and oil fraction. Either increasing particle concentration or decreasing oil fraction resulted in a decrease of droplet size. Increase in storage modulus and viscosity of HIPEs could be achieved by increasing particle concentration or oil fraction. Food structures with controlled shape could be constructed by OVT–GA particle-stabilised HIPEs. When compared with bulk MCT oil, OVT–GA particle-stabilised HIPEs improved both extent of lipolysis and curcumin bioaccessibility significantly. These findings provided novel insight into potential application of HIPEs with extremely high oil fractions in nutraceutical delivery systems.     

小麦主要过敏原CM16线性B细胞表位的预测及初步鉴定

目的：探究小麦主要过敏原α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CM16的线性B细胞表位。方法：通过提取小麦蛋白粗提物,进行体外模拟胃肠道消化,发现小麦过敏原中具有消化抗性的α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂CM16的片段;进一步通过生物信息学方法分析CM16的一级氨基酸序列、二级结构,并通过同源建模确定CM16的三级结构。结果：利用生物信息学法预测出CM16的4 条线性B细胞表位后,结合质谱得到的抗消化肽段信息进行比对分析,发现其中2 条肽段存在部分重合,也证明了生物信息学分析鉴定过敏原线性B细胞表位方法的可行性和应用性。结论：通过生物信息学预测小麦过敏原CM16线性B细胞表位有助于进一步认识小麦过敏原,对小麦过敏原的识别和检测具有重要的参考和借鉴作用。