HPLC法测定黑米矢车菊素-3-葡萄糖苷

建立水浴震荡提取-高效液相色谱法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)的方法。确定了HPLC法测定Cy-3-G的测定条件,通过响应面优化试验确定了水浴震荡提取黑米中Cy-3-G的最优提取条件。实验得HPLC法测定Cy-3-G的条件为:色谱柱(C18,150mm×4.6mm,5um),柱温30℃,进样体积10u L,检测波长520nm,流动相A(甲醇)-B(1%甲酸水溶液),流速1m L/min,梯度洗脱:0~3min,A∶B(20∶80);3~17min,A∶B(20∶80~30∶70);17~20min,A∶B(30∶70~20∶80)。最优提取条件为:溶剂是含0.8%盐酸的50%乙醇水溶液、料液比1∶20、提取次数2次、温度70℃、时间20min,Cy-3-G的得率为0.728%。结果表明水浴震荡提取法实现了黑米中Cy-3-G的高效提取,满足样品测定的前处理需求;建立的HPLC法测定黑米中Cy-3-G的方法操作简便、重复性好、测定结果精密度高。     

肉豆蔻酰矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在混合溶剂体系中的酶法合成

为了提高矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G,Cyanidin-3-O-glucoside)的稳定性及亲脂性,本研究用固定化脂肪酶Lipozyme 435催化肉豆蔻酸甲酯对C3G进行酰基化修饰.首先分别在单一有机溶剂和混合有机溶剂中进行酰基化反应,然后通过半制备液相色谱对C3G酰基化衍生物进行分离纯化,并通过液质联用和核...     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷进入巨噬细胞的荧光检测

利用荧光技术探索矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin 3-O-glucoside,C3G）在体外培养的巨噬细胞中的分布。首先采用荧光分光光度法扫描C3G的特异激发波长和发射波长,再利用激光共聚焦技术探讨C3G进入小鼠和人巨噬细胞的过程以及C3G在细胞中的定位,并分析C3G孵育时间对细胞内荧光强度变化的影响。结果表明：在488 nm和520 nm的激发波长下,C3G孵育15 min的细胞质内开始呈现绿色和红色荧光,并且随着孵育时间的变化,细胞内荧光强度逐渐增强,其中孵育60 min可观察到荧光布满细胞核,其荧光强度是孵育前的6.45 倍。研究表明采用特异波长的激光共聚焦断层扫描技术可示踪到花色苷在干预细胞内的分布,结果显示花色苷C3G可快速穿过巨噬细胞的细胞膜和核膜,直达细胞核。     

HPLC法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷含量的不确定度评定

评定HPLC法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷含量的不确定度。建立相应的数学模型,运用测量不确定度的基本方法,对模型中各影响因素的不确定度进行计算和评定。结果表明样品液中矢车菊素-3-葡萄糖苷浓度的不确定度是合成不确定度的主要来源,其中影响最大的是曲线拟合过程带来的不确定度,其次是标准样品配制带来的不确定度;按照JJF1059-2012《测量不确定度评定与表示》对各不确定度分量合成和扩展,当取置信概率95%,最终得到测量结果的扩展不确定度为0.058g/100g(k=2)。本方法对HPLC法测定矢车菊素-3-葡萄糖苷含量结果的不确定度评定具有参考作用。     

高效液相色谱法测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的:建立以HPLC-紫外检测器测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法。方法:分别采用水和1%盐酸水溶液为溶剂,使矢车菊素-3-O-葡萄糖苷分别呈中性醌式碱和烊阳离子构型,比较两种构型对测定波长、色谱峰分离度、供试品制备方法、响应因子和标准曲线,以及对含量测定结果的影响。结果:采用烊阳离子构型,即供试品和对照品用1%盐酸水溶液为溶剂,以DIKMA C₁₈(4.6 mm×250 mm×5 μm)柱为分析柱,乙腈-0.5%磷酸溶液(12:88,V/V)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为520 nm。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷烊阳离子构型在0.002419~0.077412 mg/mL范围呈线性关系,y=37029.5438x-7.6051(R²=0.9999),回收率为98.31%(RSD%=1.44%),3批阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量为0.1158~0.1663 mg/g。结论:采用矢车菊素-3-O-葡萄糖烊阳离子构型,以HPLC-紫外检测器测定阿萨伊冻干粉中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的方法操作简便、灵敏、结果准确、重复性好。     

黑米矢车菊素-3-O-葡萄糖苷及其月桂酸酰化物对小鼠肠道免疫功能的影响

目的 本文研究了黑米矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（Cyanidin-3-O-glucoside, C3G）及其与月桂酸的酰化产物（cyanidin-3-glucoside lauryl ester, L-C3G）对小鼠肠道免疫功能的影响。方法 首先,以小鼠为试验动物,经过低、中及高剂量的C3G和L-C3G灌胃28 d后,测定小鼠的体重、肠道消化酶活性（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶）、肠道pH、肠道组织形态及免疫细胞数量等指标,对C3G和L-C3G的肠道免疫作用进行评价。结果 与空白对照组相比,C3G和L-C3G能够降低小鼠的体重和小鼠肠道pH;提高淀粉酶和蛋白酶活性,降低脂肪酶活性;提高小鼠肠腔绒毛高度,降低隐窝深度,提高消化能力;提高肠道免疫细胞（T细胞、肥大细胞、杯状细胞）的数量。此外,与C3G相比,L-C3G有更强的免疫促进作用。结论 C3G和L-C3G有较好的肠道免疫促进作用。     

比色法测定不同产地黑豆皮中花青素含量

利用紫外分光光度法测定不同产地的黑豆皮中花青素含量。以飞燕草素为对照品,以1%盐酸甲醇为显色系统,采用紫外分光光度法在520 nm处建立黑豆皮中花青素含量的测定方法。标准曲线:A=0.094 3x,r=0.999 6(n=5),该标准曲线在浓度为1.7 g/mL~8.5 g/mL的范围内线性良好,平均回收率为98.3%。测试结果显示不同区域所产黑豆皮中花青素含量差异较大,以安徽、内蒙所产黑豆皮中花青素含量较高。本方法简便,快速,结果准确,可靠,适于黑豆皮中花青素成分的质量控制。     

比色法测定不同产地黑豆皮中总黄酮的含量

目的:建立黑豆皮中总黄酮的含量测定方法,测定八个不同产地黑豆皮中总黄酮的含量.方法:以芦丁为对照品,采用硝酸铝显色,比色法在510nm处测定不同产地的黑豆皮中总黄酮的含量,并考察了黑豆皮中总黄酮的最佳处理方法,保证测定结果的准确性.结果:芦丁在0.003～0.057mg/mL范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,标准曲线回归方程为:Y=12X-0.0009(R2=0.9999),平均回收率为104.6％.不同产地黑豆皮中总黄酮的含量在6.873％～17.017％之间.结论:所用方法简便、准确,结果显示:不同产地的黑豆皮中总黄酮含量差异较大,山西和安徽的四种黑豆皮中含量较高.     

比色法测定不同产地黑豆皮中总黄酮的含量

目的:建立黑豆皮中总黄酮的含量测定方法,测定八个不同产地黑豆皮中总黄酮的含量。方法:以芦丁为对照品,采用硝酸铝显色,比色法在510nm处测定不同产地的黑豆皮中总黄酮的含量,并考察了黑豆皮中总黄酮的最佳处理方法,保证测定结果的准确性。结果:芦丁在0.003～0.057mg/mL范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,标准曲线回归方程为:Y=12X-0.0009（R2=0.9999）,平均回收率为104.6%。不同产地黑豆皮中总黄酮的含量在6.873%～17.017%之间。结论:所用方法简便、准确,结果显示:不同产地的黑豆皮中总黄酮含量差异较大,山西和安徽的四种黑豆皮中含量较高。      

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside,C3G）对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力以及一氧化氮（nitric oxide,NO）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G（6.25～25.00 μmol/L）能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低（P＜0.05）。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放（P＜0.05）,显著增加SOD和GSH-Px活力（P＜0.05）。此外,与空白对照相比,400 μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调（P＜0.05）,而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调（P＜0.05）;而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论：C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。     

高效液相色谱法同时测定工夫红茶中10种内含物成分

建立高效液相色谱法同时测定工夫红茶中咖啡碱、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3’-没食子酸酯、茶黄素双没食子酸酯10 种内含物成分含量的方法。通过色谱条件优化,确定出工夫红茶中10 种内含物成分含量测定的最佳色谱条件为：色谱柱为Whatman Partisphere C18液相色谱柱（4.6 mm×125 mm,5 μm）、柱温32 ℃、流动相为0.035%三氟乙酸-5%乙腈溶液和0.025%三氟乙酸-50%乙腈溶液、流速1 mL/min、进样量10 μL、检测波长205 nm。在此条件下,上述10 种内含物成分得到很好的分离和测定。各种内含物的线性范围为0.05～500 μg/mL,标准曲线相关系数均在0.999 8以上,精密度检测相对标准偏差为0.72%～3.32%（n=5）,重复性检测相对标准偏差为1.87%～4.43%（n=5）,回收率在94.73%～102.38%之间。该方法简单、快捷、准确、重复性好,可应用于工夫红茶中10 种内含物质的同时快速测定。     

高效液相色谱法测定大豆制品中异黄酮含量

研究了用高效液相色谱法测定大豆制品中2种异黄酮成分染料木黄酮Genistein和大豆黄素Daidzein含量的色谱条件。结果表明:样品先用正己烷在超过90℃脱脂10h,然后用80%甲醇在80℃加热回流提取。色谱柱采用日本岛津公司的BDSHypersilC18柱(250×4.6×5),流动相为甲醇:(0.5%)乙酸水溶液,采用浓度梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为35℃,检测波长为260nm。     

HPLC法测定不同品种苹果中原花青素B2的含量

目的：建立苹果中原花青素B2含量的测定方法,测定5个不同品种苹果果皮和果肉中原花青素B2的含量。方法：采用HPLC法测定苹果果皮和果肉中原花青素B2的含量,色谱柱为Phenomenex Luna C18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流动相：A相：0.5%磷酸溶液,B相：水-乙腈(50:50,V/V);流速：1.0mL/min;柱温：30℃;检测波长：280nm。结果：原花青素B2进样量在2.399～9.596μg范围内与峰面积线性关系良好(R2＝0.9998),回收率97.72%,RSD=1.98%。经测定几种苹果果皮和果肉中原花青素B2的含量分别在275.24～548.42μg/g和90.19～247.06μg/g范围中。结论：本法简便、易行,可用于苹果质量控制。     

HPLC法测定不同产地黑豆皮中表儿茶素的含量

建立黑豆皮中表儿茶素的含量测定方法,测定5个不同产地黑豆皮中表儿茶素的含量。采用HPLC法测定黑豆皮中表儿茶素的含量,色谱柱:Phenomenex Luna Su C18柱(250×4.60 mm,5μm);流动相:A相为体积比为1.0%磷酸水溶液,B相为乙腈∶水(体积比为80∶20),进行梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:30℃;进样量:10μL。结果得出,表儿茶素标准曲线回归方程为:Y=6×106X-14 292(r=0.999 8),在0.154 95μg~1.549 5μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为96.7%、100.2%、103.9%,不同产地黑豆皮中表儿茶素含量范围为1.27 mg/g～4.18 mg/g。所用方法简便、准确,可用于不同产地黑豆皮的质量控制。     

高效液相色谱法测定3 种蛹虫草中虫草素及比较分析

对3 种蛹虫草中虫草素含量进行高效液相色谱法测定并比较,以查看不同地区来源的蛹虫草中虫草素含量
的区别,为选育高含量虫草素蛹虫草菌种及改变其培养条件指明方向。首先采用正交试验研究虫草素的提取条件,
获得最适提取工艺,即料液比1∶80、提取时间5 h、提取温度70 ℃,在此条件下虫草素的得率达0.604%（以湖北地区
的蛹虫草作为原料）。然后在此条件下分别对湖北地区（A）、云南地区（B）和本实验室培养（C）的蛹虫草中提
取虫草素并进行测定,结果表明：样品C的虫草素含量远高于A（6.041 mg/g）和B（7.606 mg/g）,为26.071 mg/g。
结果显示,不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,这可能与培养蛹虫草所用的菌种和培养条件差异有关。本
研究筛选出来的菌种以及获得的培养方法,对后续研究补硒栽培对蛹虫草中的活性成分虫草素含量的影响提供了技
术基础。     

高效液相色谱法测定牛奶中的胆固醇

目的：建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定牛奶中胆固醇的方法。方法：色谱柱为Shimadzu C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈,流速为1.0mL/min,检测波长为203nm,柱温为30℃。结果：胆固醇的线性范围为3.58～358μg/mL(r＝0.9999),平均回收率为101.8%(n＝6),相对标准偏差为1.14%。结论：该方法测定结果准确、重现性好,可作为测定牛奶中胆固醇含量的方法。     

高效液相色谱法测定小麦中的杂色曲霉毒素

目的:建立小麦中杂色曲霉毒素的高效液相色谱检测方法。方法:样品中的杂色曲霉毒素经正己烷提取后,经硅胶柱固相萃取去除脂肪等杂质,运用高效液相色谱法测定,色谱柱为Nova-Pak C18柱,以甲醇-水(70:30,V/V)为流动相,流速0.7mL/min,检测波长为246nm进行检测。结果:该方法在0.08～4.00μg/mL范围内线性良好(R2=0.9996),平均回收率为86.59%,相对标准偏差(RSD)为4.7%,最低检出量为0.017μg/kg。结论:本方法简便、快速、准确,可用于小麦中杂色曲霉毒素的测定。