上海地区生鲜乳中金黄色葡萄球菌分离及耐药性研究

为了解上海地区奶牛生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染状况及金黄色葡萄球菌对常见抗菌药物耐药性。2016-2018年期间采集548份生鲜乳样本进行金黄色葡萄球菌的分离培养与鉴定,采用微量肉汤稀释法检测菌株对18种常见抗菌药物的敏感性。本研究共分离到金黄色葡萄球菌256株,总分离率为46.2%。该批金黄色葡萄球菌对青霉素(96.9%)和磺胺异噁唑(94.1%)耐药率较高,对其余16种抗菌药物的耐药率均在30%以下。52.3%(134/256)的金黄色葡萄球菌同时耐3类及3类以上抗菌药物,多重耐药主要集中在3-4耐。分离出15株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。     

乳源性金黄色葡萄球菌的分离及耐药特性

为了解呼和浩特地区乳源金黄色葡萄球菌的耐药特性,采集该地区的生鲜牛乳样品进行常规的分离鉴定,用杯碟法对分离菌进行耐药初筛,筛选耐青霉素V、红霉素、头孢唑啉、氧氟沙星的菌株作为试验菌株,并对试验菌株进行特定抗生素耐受性试验。结果表明,筛选的6株金黄色葡萄球菌均有致病性。6株菌对红霉素、氧氟沙星、青霉素V、头孢唑啉、氨苄西林、链霉素都有较强的耐药性,对诺氟沙星、头孢噻肟、去甲万古霉素,因菌株不同,耐受性不同。     

耐甲氧西林葡萄球菌对17种抗生素的药敏试验

目的研究耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的耐药状况。方法用琼脂筛选法、酸测定法、琼脂稀释法,分别检出MRS、测定MRS的β-内酰胺酶及对17种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果466株菌中,金黄色葡萄球菌(SA)123株,其中53株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),占43.1%;血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)343株,其中188株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),占54.8%。β-内酰胺酶产生率MRS为77.4%,MRCNS为65.4%。MRS对青霉素、氨苄青霉素、苯唑青霉素、四环素、红霉素严重耐药,耐药率为87.8%到100%,对氯霉素、林可霉素、妥布霉素、氟哌酸、庆大霉素高度耐药,耐药率超过60%,对其他抗生素有不同程度的耐药,对磷霉素、利福平敏感性好(耐药率低于30%)。结论此研究资料表明,MRS对抗生素的耐药性非常严重,磷霉素、利福平可用于治疗由MRS所致的感染。     

酶法制备乳源抗菌肽的抗菌性研究

研究了乳源抗菌肽的抗菌效果,研究表明乳源抗菌肽提取物对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌皆有明显的抗菌活性,但对金黄色葡萄球菌的抗菌活性强于乙型溶血性链球菌,酶法制备的乳源抗菌肽,有较好的抑菌效果。     

牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性变迁及β内酰胺类药物耐药基因分析

采用肉汤微量稀释法,对203 株源于2006—2011年四川牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)进行10 种常用抗生素药敏性检测,多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,M-PCR)法对其耐甲氧西林基因(mecA)和β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ)进行分析,了解Sa耐药性变迁。结果表明:牛乳源Sa菌株对青霉素、氨苄西林耐药率一直居高不下;对阿莫西林/克拉维酸、红霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率有增强趋势;对林可霉素、四环素耐药率呈降低趋势;对环丙沙星耐药率不定;对苯唑西林和头孢噻呋敏感;Sa分离株多重耐药率介于72.1%～100.0%,显示出不尽相同的耐药谱,却呈现出不断增宽的趋势。M-PCR检测显示,2006—2011年分离Sa菌株未从基因水平扩增出mecA基因;不同年度分离株均不同程度携带blaZ基因,不同年度分离株blaZ+检出率介于49.1%～87.5%。药敏实验结果与相关耐药基因检测结果存在对应关系,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,推测还存在其他耐药机制。结论:四川地区牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性不容乐观。     

余甘子果实粗提物的抑菌活性研究

本实验研究并探讨了余甘子果实70%乙醇提取物的抗菌谱和抑菌特性,结果表明：70%的乙醇提取物对供试霉菌几乎没有抑菌活性;对啤酒酵母有一定的抑菌活性;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌有很强的抑菌活性,抑菌活性强弱顺序为：嗜热脂肪芽孢杆菌＞变形杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌＞枯草芽孢杆菌,其MIC值分别为：2.0%、2.0%、2.0%、4.0%、4.0%,啤酒酵母的MIC值为8.0%。     

上海市食源性金黄色葡萄球菌环丙沙星耐药性的形成与gyrA,grlA基因突变的相关性

目的:探讨食源性金黄色葡萄球环丙沙星耐药性的形成与gyr A和grl A基因突变的关系。方法:采用纸片扩散法和E-test法测定来源于上海市的135株食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的药物敏感性和最低抑菌浓度(MIC),采用PCR技术扩增gyr A和grl A基因并测序。运用同源比对方法分析敏感菌株和耐药菌株在这两个基因序列上的差异性。结果:135株食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的耐药率达36.30%,gyr A和grl A的携带率均为93.33%,gyr A和grl A的突变率分别为37.30%和53.97%。结论:食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的耐药性的形成与gyr A和grl A的突变密切相关,环丙沙星等喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶位点是拓扑异构酶IV。如果仅grl A发生突变,则导致该菌株低水平耐药性的形成;如果gyr A和grl A同时发生突变,就导致金黄色葡萄球菌高水平耐药性的形成。     

2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的 掌握北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药谱和耐药趋势。方法 收集2015?2018年北京市食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌103株, 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种常用抗生素的敏感性。结果 103株菌中有102株表现为对至少1种抗生素耐药, 耐药率排在前三位的是青霉素、红霉素和克林霉素, 其中对青霉素的耐药率最高, 为99.0%。检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌8株, 占7.8%, 未见万古霉素耐药株。45.6%(47/103)的菌株同时耐受3类和3类以上抗生素, 表现为多重耐药, 同时耐受抗生素种类最高为7类。共存在26种耐药谱, 优势耐药谱为青霉素、青霉素-红霉素-克林霉素-复方新诺明-庆大霉素和青霉素-红霉素。结论 2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌整体耐药水平较高, 且多重耐药情况严重, 并出现MRSA株, 应继续加强北京市食源性金黄色葡萄球菌的耐药性监测。     

心草水提液和醇提液抑菌作用初步研究

实验用水和70%乙醇从心草中提取其活性成分,探讨了其抑菌作用。结果表明,心草提取物对微生物有明显抑制作用,水提物的MIC值分别为大肠杆菌为5%,金黄色葡萄球菌、枯草杆菌为3%、苏云金杆菌、短小芽孢杆菌为1%。醇提物的MIC值分别为大肠杆菌为3%,金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、短小芽孢杆菌为0.5%,苏云金杆菌为0.25%。     

凝结芽孢杆菌13002的益生特性

以凝结芽孢杆菌13002为研究对象,测定了该菌株对高温、胆盐、酸的耐受性以及对有害菌的抗菌活性、对抗生素的耐药性五个方面的益生特性。结果表明:该菌株于80 ℃条件作用10 min存活率达72.3%;0.3%胆盐作用12 h存活率达69.8%;pH2.0条件下作用4 h存活率达40.0%;对有害菌株(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)具有一定抗菌活性,其抑菌圈直径分别达13.650和14.367 mm;对青霉素、链霉素、四环素三种抗生素具有不同程度的耐药性,其MIC值分别为0.781、0.391和0.039 mg/mL。凝结芽孢杆菌13002具有良好的益生特性。     

迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的抑菌机理初探

本文研究了迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对食品常见污染菌——金黄色葡萄球菌的抑菌作用,检测了两种抑菌成分对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)、抑菌圈、联合作用效果、抑菌动力学曲线、可溶性蛋白、还原糖外泄和菌表面蛋白SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)图谱的效果。结果表明:迷迭香酸和ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为4和0.1875 mg/mL,且抑菌浓度指数(FICI)为0.5,有较好的协同增效作用。1/4 MIC迷迭香酸和1/4 MIC ε-聚赖氨酸的复合有较强的抑菌活力,能损伤菌细胞膜,导致蛋白质和还原糖外泄,其蛋白图谱分析的菌体表面蛋白分子量变化,说明这两种抑菌成分促使金黄色葡萄球菌表面蛋白降解,抑制了金黄色葡萄球菌表面毒力因子的毒性。     

葡萄籽和苹果原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究苹果原花青素和葡萄籽原花青素对变形链球菌(Streptococcus mutans)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用,采用试管液体稀释法和琼脂稀释法抑菌实验测定其最低抑菌质量浓度(MIC)和质量最低杀菌质量浓度(MBC),并通过测定培养基pH值的变化,研究葡萄籽原花青素对变形链球菌产酸能力的影响。结果表明：苹果原花青素、葡萄籽原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌生长都有抑制作用;苹果原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.25、4.00mg/mL,葡萄籽原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.75、2.00mg/mL;苹果原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为4.00、9.00mg/mL,葡萄籽原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为2.00、6.50mg/mL。葡萄籽原花青素质量浓度大于1.00mg/mL对变形链球菌的产酸能力有显著抑制效果。     

桑叶活性成分的抑菌作用及稳定性研究

以桑叶为原料,提取多糖、黄酮、生物碱三种活性成分,采用牛津杯法测定活性成分抑菌效果,并研究桑叶黄酮对供试菌的最小抑制浓度（MIC）及抑菌稳定性。结果表明,桑叶多糖对供试菌无抑制作用;桑叶生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有抑制作用,抑菌圈直径分别为9.8 mm、13.7 mm;桑叶黄酮对供试菌的抑制效果较好,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、灰葡萄孢和扩展青霉的最小抑菌浓度分别为5.09 mg/mL、10.18 mg/mL、20.35 mg/mL、20.35 mg/mL;桑叶黄酮在热（40～100 ℃）、紫外照射及酸性（pH 5～7）条件下均有良好的抑菌稳定性。     

复合生物保鲜剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

研究了壳聚糖、溶菌酶与茶多酚配制而成的复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。采用琼脂平板打孔法确定复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),结合抑菌率、抑菌活力、细菌生长曲线、膜完整性、AKP活性与细菌超微结构,综合评价复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的影响。结果得出,复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的MIC与MBC分别为0.8 mg/mL与1.6 mg/mL,随着作用时间的延长,复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的生长抑制明显,菌体的细胞壁与细胞膜完整性受到破坏,菌体细胞中的AKP量增多,影响菌体细胞的代谢循环,菌体内部的核酸与蛋白质外泄,抑制其正常生长。由细菌超微结构观察发现,菌体细胞经复合保鲜剂处理后,造成菌体扭曲变形,细胞壁破裂,细胞质外渗。表明复合保鲜剂可破坏菌体的细胞壁,影响胞膜稳定性与胞内环境,最终导致菌体死亡。     

Effect of lactoferrin in combination with penicillin on the morphology and the physiology of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis

The objective of the present study was to evaluate the therapeutic potential of bovine lactoferrin or lactoferricin in combination with penicillin G against Staphylococcus aureus. Minimal inhibitory concentrations of lactoferrin, lactoferricin, penicillin, and combinations of lactoferrin or lactoferricin with penicillin were determined for 15 S. aureus strains including several strains resistant to beta-lactam antibiotics. The fractional inhibitory concentration index indicated a synergistic effect between lactoferrin and penicillin. Combination of lactoferrin with penicillin increased the inhibitory activity of penicillin by two- to fourfold and reduced the growth rate in S. aureus strains tested, whereas the increase in the inhibitory activity of lactoferrin by penicillin was 16- to 64-fold. The addition of iron to the medium containing a combination of penicillin and lactoferrin had no effect on growth inhibition. Electron microscopy revealed that concentration below the minimal inhibitory concentrations of penicillin induced important ultrastructure alterations, which were further enhanced by the presence of lactoferrin. When S. aureus cells were grown in the presence of a combination of penicillin and lactoferrin, changes in the protein profile of the bacteria, including the disappearance of several protein bands due to the presence of lactoferrin, were observed. These data suggest that bovine lactoferrin or lactoferricin in combination with beta-lactam antibiotics can increase the antibacterial activity of these antibiotics against S. aureus resistant to antibiotics.     

Antimicrobial drug susceptibility of Staphylococcus aureus strains isolated from bovine and ovine mammary glands

The activity of selected antimicrobial agents against Staphylococcus aureus was determined with the agar disk diffusion test to determine the diameter of the zone of inhibition and the E-test for determination of the minimal inhibitory concentration (MIC). The 92 S. aureus strains used in this study were isolated from bovine (n = 76) and ovine (n = 16) intramammary infections. Four antibiotics, which are frequently used in mastitis therapy were chosen: penicillin-G, ampicillin, kanamycin, and cephalexine. The fifth compound (oxacillin) was used to detect methicillin-resistant S. aureus, but no such strains could be found. According to the evaluation criteria, 65.2 (penicillin) to 93.5% (kanamycin, cephalexine) S. aureus strains were susceptible to the antibiotics tested. Ovine S. aureus strains reveal a lower resistance rate than bovine isolates. Comparison of the results of the two methods of susceptibility testing shows, with exception of penicillin and ampicillin, satisfactory agreement. Analyzing the results of the MIC endpoints and the zone diameter values, very major errors, according to the error rate bounded method of Metzler and DeHaan, occurred at an error rate of 3.3% for penicillin and 3.8% for ampicillin.     

湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其稳定性

目的:研究湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性及其稳定性.方法:采用牛津杯法和微量肉汤稀释法测定湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),并进一步探讨温度、pH、紫外线照射和金属离子对其抑菌活性稳定性的影响.结果:湄潭白茶多糖...     

藜麦皂苷与纳米银配合物的制备及其协同抗菌性的研究

以藜麦皂苷和硝酸银为原料,通过生物还原法制备藜麦皂苷与纳米银配合物,并研究配合物的抑菌活性。利用紫外可见分光光度计（UV-vis光谱仪）、透射电子显微镜（TEM）对藜麦皂苷与纳米银配合物进行表征分析;通过抑菌圈实验、最低抑菌浓度（MIC）实验、最小杀菌浓度（MBC）实验等研究藜麦皂苷与纳米银配合物的协同抗菌性。结果表明,藜麦皂苷与纳米银配合物为球形,粒子直径大部分集中在10 nm附近,单分散性好;在420 nm处出现特征吸收峰。藜麦皂苷与纳米银配合物对食源性微生物有较好的抑制作用和协同抑制作用,其中对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果最好,抑菌直径分别为（11.33±0.58）、（10.67±1.15） mm,对正常胃黏膜上皮细胞（GES）及胃癌细胞（SGC）毒性较低。藜麦皂苷作为生物还原剂使纳米银的溶解性与分散性增强,保留了纳米银本身的广谱抗菌特性,并相互协同使纳米银抗菌活性增强。     

甜橙精油纳米乳液的制备及其抑菌作用研究

采用相转变点法制备甜橙精油纳米乳液和D-柠檬烯纳米乳液,采用抑菌圈法和最低抑菌浓度法研究甜橙精油纳米乳液及其主要成分D-柠檬烯纳米乳液对大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和桔霉菌(Penicillium citrinum)的抑菌作用。结果表明,甜橙精油纳米乳液和D-柠檬烯纳米乳液均有较好的抑菌效果,且同等浓度的D-柠檬烯纳米乳抑菌效果比甜橙精油的抑菌效果好,14%甜橙精油纳米乳液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和桔青霉的抑菌圈直径直径分别为11.7、14.0、9.7和9.0 mm,而D-柠檬烯纳米乳液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和桔青霉的抑菌圈直径直径分别为19.0、23.7、13.0和12.0 mm。甜橙精油纳米乳液对枯草芽孢杆菌的抑菌作用最强,其最低抑菌浓度(MIC)约为7.7%,对金黄色葡萄球菌和桔青霉的抑菌作用较弱,其对这两种微生物的MIC均约为11%,对大肠杆菌的MIC介于7.7%~11%之间。甜橙精油和D-柠檬烯制成纳米乳液后均具有良好的抑菌作用,为纳米乳液在食品中的抑菌应用提供了理论依据。     

5味收涩药对奶牛乳腺炎病原菌体外抗菌活性的比较

采用琼脂平板二倍稀释法测定了诃子等5味收涩药对15个种属33种120株奶牛乳腺炎病原菌的最低抑菌浓度,统计分析了它们对葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和单胞菌等共11个种属的MIC50和MIC90,并采用SPSS17.0软件中单因素方差分析法比较分析了5味收涩药分别对葡萄球菌、鲁氏不动杆菌和芽孢杆菌等11个种属菌株押菌活性的强弱.结果表明,5味收涩药对受试菌均有较强的抗菌活性,总体以诃子的抗菌活性最强,其次为乌梅和石榴皮,再次为五味子,活性最差为山茱萸;且5味收涩药对革兰氏阳性菌的抗菌活性较对革兰氏阴性菌的活性强.