食品中单核细胞增生性李斯特菌的快速分离鉴定

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,能引起人畜共患李斯杆菌病。本文采用两种不同的增菌分离方法从散装牛奶和猪肉中共分离得到8株单增李斯特菌。通过革兰氏染色、生化鉴定、PCR扩增hlyA基因、16SrDNA测序、血清分型等一系列实验对可疑菌株进行分析鉴定。综合实验结果和其他单增李斯特菌分离标准,探讨开发了一种快速分离鉴定单增李斯特菌的方法,该方法可在4～5d内完成单增李斯特菌的分离检测过程。     

改良LAMP检测鸡肉中单增李斯特氏菌的研究

本研究建立一种改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测鸡肉中单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L. monocytogenes)的方法。针对单增李斯特氏菌的溶血素基因(hlyA)设计LAMP引物,对单增李斯特氏菌进行特异性检测,通过荧光曲线和肉眼观察荧光颜色来判定检测结果。试验结果表明:改良LAMP方法检测单增李斯特氏菌具有良好的特异性,7株单增李斯特氏菌呈阳性结果,24株非单增李斯特氏菌呈阴性结果。与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法相比,改良LAMP方法具有灵敏度高(5.4×100 fg/μL)、检出限低(3.9×100 CFU/g)的特点,均是PCR结果的100倍。对66份鸡肉样品进行检测,得到改良LAMP方法的敏感性为100%,特异性为98.41%,符合率为98.48%。综上所述,改良LAMP方法能够快速、准确的检测单增李斯特氏菌,具有很好的应用前景。     

食品中单核细胞增生性李斯特菌的快速分离鉴定

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,能引起人畜共患李斯杆菌病。本文采用两种不同的增菌分离方法从散装牛奶和猪肉中共分离得到8株单增李斯特菌。通过革兰氏染色、生化鉴定、PCR扩增hlyA基因、16SrDNA测序、血清分型等一系列实验对可疑菌株进行分析鉴定。综合实验结果和其他单增李斯特菌分离标准,探讨开发了一种快速分离鉴定单增李斯特菌的方法,该方法可在4～5d内完成单增李斯特菌的分离检测过程。      

ERIC-PCR技术对单增李斯特菌的溯源分析

以质控菌株ATCC 19115为对照,采用ERIC-PCR方法对从三个市场猪肉样品分离到的17株单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)进行了基因分型,探讨了单增李斯特菌基因型与区域分布及流行性的关联性.结果表明,17株单增李斯特菌菌株可分为六个主要基因类群,其中Ⅳ型菌株最多,为主要污染类群,而这些菌株来自于市场三;市场一和市场二分离到的菌株主要分别为Ⅰ型和Ⅳ型.因此,ERIC-PCR方法适用于对单增李斯特菌的溯源分析和流行病学调查,具有简单、方便、快捷、准确的特点.     

单增李斯特菌检测技术研究进展

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种人畜共患食源性致病菌,可使人畜患脑膜炎、心肌炎、败血症、早产等疾病,危害较大。有效控制食品中的单增李斯特菌,是食品安全的重要课题之一。本文对单增李斯特菌的主要检测技术,如传统分离鉴定、免疫法、分子生物学法、全自动微生物分析系统、生物传感器检测作了简要叙述,为深入研究提供参考。并对我国单增李斯特菌的检测监控进行了展望。     

ERIC-PCR技术对单增李斯特菌的溯源分析

以质控菌株ATCC 19115为对照,采用ERIC-PCR方法对从三个市场猪肉样品分离到的17株单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）进行了基因分型,探讨了单增李斯特菌基因型与区域分布及流行性的关联性。结果表明,17株单增李斯特菌菌株可分为六个主要基因类群,其中Ⅳ型菌株最多,为主要污染类群,而这些菌株来自于市场三;市场一和市场二分离到的菌株主要分别为Ⅰ型和Ⅳ型。因此,ERIC-PCR方法适用于对单增李斯特菌的溯源分析和流行病学调查,具有简单、方便、快捷、准确的特点。      

单核细胞增生李斯特菌生物被膜交叉污染评估进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）（以下简称单增李斯特菌）是一种引发李斯特菌病罹患者高住院率和高死亡率的食源性致病菌,其可在冷、热、干燥和消毒剂处理等不利条件下黏附于食品接触表面并进一步形成难以清除的生物被膜。交叉污染是单增李斯特菌传播的主要途径,生物被膜的形成提高了单增李斯特菌在工厂和厨房环境持续传播和污染的可能性,可引发相关食源性疾病暴发和食品召回等,从而造成健康和经济损失。本文首先介绍了单增李斯特菌生物被膜的胞外聚合物组分,并从外部生存环境和内部微生物自身因素两方面总结了影响单增李斯特菌生物被膜交叉污染转移的因素;进一步重点从研究类型和细菌收集两方面阐述了生物被膜交叉污染的相关研究进展;最后,归纳总结了针对单增李斯特菌生物被膜形成早期的防控策略,展望该领域的研究前景,以期为科学评估和早期精准防控单增李斯特菌生物被膜交叉污染的潜在风险提供理论依据。     

食品中亚致死损伤单增李斯特菌的研究进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一类人畜共患的食源性致病菌。食品加工过程中所产生的亚致死损伤单增李斯特菌是不容忽视的,在适宜的环境下,损伤菌会恢复至正常状态继续生长,对消费者的健康造成威胁,因此亚致死损伤菌的存在是食品安全的一大隐患。探究亚致死损伤菌的检测、修复是目前研究的热点之一,本文将综合相关研究对近年来食品中亚致死损伤单增李斯特菌的检测、修复方法以及发展趋势进行综述。     

食品中单核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes) 污染状况研究

目的:了解食品中单核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的污染状况,为单增李斯特茵病的监控、检测以及追踪污染源提供依据.方法:对采自保定市各大超市及农贸市场的生内、熟肉制品、海产品、速冻食品、水果、蔬菜、奶及奶制品、豆制品、腌制品等9大类食品426份样品进行单增李斯特茵的分离与鏊定.结果:检出了单增李斯特茵79株,英诺克李斯特茵7株,格氏李斯特茵32株,西尔李斯特茵2株,威尔斯李斯特茵1株,绵羊李斯特茼1株.默氏李斯特茵2株.李斯特茵的总检出率为29.1%,其中单增李斯特茵的检出率为18.5%.结论:保定市9大类食品中存在不同程度的单增李斯特茵污染,尤其在生内中该茵的污染率高达32.4%.海产品中的污染率31.0%.应引起高度重视.     

LAMP法检测单核细胞增生性李斯特菌的研究

单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌,属李斯特菌属,是食源性致病菌中的一种,它能够引起人畜共患病,在食源性细菌中毒中占主要地位。为了鉴定该菌,以单增李斯特菌的内化素基因(inlA)为靶基因,通过LAMP法对该基因扩增,并优化其反应条件。过夜培养的单增李斯特菌的菌液,取1 mL提取细菌基因组DNA,提取完成后测得其DNA含量为227 ng/μL,然后依次将其进行10倍梯度稀释,并以此作为LAMP实验模板,最终实验结果表明,LAMP检测单增李斯特菌纯菌培养物的检测限为2.27 fg/μL。     

免疫磁分离技术在食源性单增李斯特菌检测中应用的研究进展

食源性单增李斯特菌是李斯特菌属中的唯一能引起人类疾病的病原菌,致死率30%~70%,并严重威胁着人类健康。早期快速准确地检测出食品中可能污染的单增李斯特菌对于减少死亡率非常重要,因此亟需建立一些快速、灵敏和高特异性的检测方法。现有单增李斯特菌的检测方法对未经前增菌的食品样本检测灵敏度较低,限制了这些方法直接用于食品样本中单增李斯特菌的快速检测。免疫磁分离是一种可以短时间内高效富集样本中目的菌的技术,与常用的检测方法结合,可以缩短检测周期,提高检测灵敏度。本文综述了免疫磁分离技术在食源性单核细胞增生性李斯特检测中应用的研究进展。      

Reduced detectability of Listeria monocytogenes in the presence of Listeria innocua

Recent foodborne crises have demonstrated the importance of monitoring food safety. In terms of microbiological criteria, food safety requires the reliable detection of pathogens such as Listeria monocytogenes along the food chain by appropriate analytical methods. However, indications exist that accompanying Listeria innocua strains suppress the growth of L. monocytogenes during selective enrichment, which may cause reduced or even inhibited detection. To study these effects, the limit of detection of L. monocytogenes was investigated in the presence of L. innocua using the International Organization for Standardization standard method ISO 11290-1 and the VIDAS LDUO system, an automated method based on enzyme-linked fluorescence technology. The challenge was to provide low initial Listeria concentrations at sufficient precision to quantify the influence on the probability of detection of L. monocytogenes. The application of reference materials appropriate for quantitative test methods and a standardized dilution procedure were necessary to ensure accurate CFU levels of defined proportions of mixtures of both Listeria species. During selective enrichment, overgrowth of L. monocytogenes by L. innocua could be confirmed, leading to high rates of false-negative results. Moreover, with both methods, a significant decrease in the detectability of L. monocytogenes could be quantified at ratios of 2:1 at very low concentrations representative of natural contamination levels often found in foods and environments. It is concluded that there is a need to improve existing procedures with respect to selective enrichment, as well as the detection techniques.     

Rapid real-time PCR detection of Listeria monocytogenes in enriched food samples based on the ssrA gene, a novel diagnostic target

A real-time PCR assay was designed to detect a 162-bp fragment of the ssrA gene in Listeria monocytogenes. The specificity of the assay for L. monocytogenes was confirmed against a panel of 6 Listeria species and 26 other bacterial species. A detection limit of 1-10 genome equivalents was determined for the assay. Application of the assay in natural and artificially contaminated culture enriched foods, including soft cheese, meat, milk, vegetables and fish, enabled detection of 1-5 CFU L. monocytogenes per 25g/ml of food sample in 30h. The performance of the assay was compared with the Roche Diagnostics 'LightCycler foodproof Listeria monocytogenes Detection Kit'. Both methods detected L. monocytogenes in all artificially contaminated retail samples (n=27) and L. monocytogenes was not detected by either system in 27 natural retail food samples. The method developed in this study has the potential to enable the specific detection of L. monocytogenes in a variety of food types in a time-frame considerably faster than current standard methods. The potential of the ssrA gene as a nucleic acid diagnostic (NAD) target has been demonstrated in L. monocytogenes. We are currently developing NAD tests based on the ssrA gene for a range of common foodborne and clinically relevant bacterial pathogens.     

食品中单增李斯特菌快速检测技术研究进展

单核细胞增生性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)是一种广泛存在于自然界中可导致人畜共患病的病原菌, 同时也是一种常见的食源性致病菌。目前, 食品中单增李斯特菌的检测主要采用国标法, 传统检验方法虽然可操作性高, 但检验流程耗时过长。随着生活水平不断提高, 人们在饮食中摄入受单增李斯特菌污染的食品的风险增大, 如遇到食品安全突发事件, 传统检测不能及时得到检测结果, 无法保障人们的饮食安全。本文概述了基于分子生物学和免疫学发展起来的快速检测方法, 包括PCR法、实时荧光定量PCR法、环介导等温扩增法、酶联免疫吸附法、免疫层析试纸条, 其中环介导等温扩增法已经应用于食品致病菌的检测。通过分析对比以上快速检测方法, 为探索更灵敏高效且适用于基层食品检验的检测方法提供参考。     

2015年吉林市食品安全风险监测结果分析

摘 要：目的 分析吉林市食源性致病菌污染情况,为预防和控制食源性疾病提供依据。方法 按照《2014年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册方法》对食源性致病菌进行监测。结果 2015年吉林市共监测10类240份食品样本,检出19株致病菌,总检出率7.92%,其中检出7株蜡样芽孢杆菌,8株单核细胞增生李斯特氏菌,3株金黄色葡萄球菌,1株沙门氏菌;3类食品样本监测到食源性致病菌：流动早餐检出率57.14%,肉与肉制品检出率50%,调味品检出率2%;依据散装和预包装不同包装类型的食品样本中食源性致病菌的检出率差异有统计学意义。结论 吉林市流动早餐和肉与肉制品两类食品样本中检出食源性致病菌为金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特菌,检出率均较高,相关部门需要加强对此类食品的监管。     

肉及肉制品中单核细胞增生李斯特菌交叉污染的研究进展

单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）是一种引起细菌性食物中毒的重要食源性病原菌,常因污染肉品而引发食物中毒事件,其中交叉污染是引起单增李斯特菌污染并导致食源性疾病的主要途径。本文综述了国内外肉及肉制品污染单增李斯特菌引发的流行病学情况、家庭厨房和肉品加工厂的交叉污染情况、交叉污染模型构建、交叉污染的预防与控制等,为维护家庭食品安全以及保障工厂食品加工卫生安全提供理论依据。     

数字PCR在食源性致病微生物检测中的 应用研究进展

大多数食源性疾病由食源性致病微生物引发,研究和建立食源性致病微生物的快速有效检测方法对于食品安全风险监控及保障人们的身体健康具有重要意义。相对于传统PCR,数字PCR具有较好的准确度和重现性,可实现绝对定量分析,为快速准确地进行食品安全检测提供了一种崭新的技术平台。本文主要介绍了数字PCR中微滴式数字PCR和芯片式数字PCR的基本原理、种类、应用及其研究进展,深入探讨了数字PCR技术在沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、阴沟杆菌和金黄色葡萄球菌等食源性致病微生物检测中的应用。数字PCR技术目前在转基因成分和动物源性成分定量检测中都得到了较好的应用,在食源性致病微生物中的应用技术还有待更好的发展。     

2010~2016年云南省熟肉制品和餐饮食品中单增李斯特菌污染情况调查分析

目的 了解2010～2016年云南省市售熟肉制品和餐饮食品中单增李斯特菌污染情况调查分析。方法 在全省16个州市县中选取超市、农贸市场、零售及餐饮环节等为采样点, 随机采取熟肉制品1465份和餐饮食品3674份, 按照GB 4789.30-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》及《全国食源性致病菌监测工作手册》进行检测和鉴定。结果 1465份熟肉制品中单增李斯特菌检出率为2.18%(32/1465), 3674份餐饮食品中单增李斯特菌阳性率为1.44%(53/3674)。在不同流通环节中, 熟肉制品和餐饮制品中检出率最高的分别为便利店和超市, 分别为9.09%(5/55)和1.67%(3/180)。在不同的监测地区, 熟肉制品和餐饮制品检出率最高均为昭通地区, 分别为7.8%(11/141)和7.17%(18/251)。结论 单增李斯特菌在熟肉制品及餐饮食品中均有检出, 说明云南省的食品中存在一定的单增李斯特菌污染, 对消费者的安全有潜在风险, 相关监管部门应持续加强监管, 预防食源性疾病的发生。     

Use of PCR primers derived from a putative transcriptional regulator gene for species-specific determination of Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is an opportunistic bacterial pathogen that has accounted for an important portion of human foodborne diseases worldwide. In this study, through comparative analysis of L. innocua and L. monocytogenes genomic sequences, we selected a L. monocytogenes specific gene (lmo0733) that has the potential for specific detection of L. monocytogenes. Using PCR primers (lmo0733F and lmo0733R) derived from this gene, a specific fragment of 453 bp was amplified only from genomic DNA of L. monocytogenes strains. PCR products from other Listeria species as well as other Gram-positive and -negative species were not detectable, confirming the specificity of this assay. Thus, the PCR test employing primers lmo0733F and lmo0733R represents an additional tool in the diagnostic arsenal for rapid, sensitive and specific detection and identification of human infections due to L. monocytogenes.