沙丁胺醇免疫层析试纸条的应用研究

用胶体金和纳米金-聚苯胺-纳米金微球(GPG)分别标记制备的沙丁胺醇多克隆抗体,喷涂在玻璃纤维垫上,将包被抗原和羊抗兔二抗分别固定到硝酸纤维素膜上作为检测线(T-Line)和质控线(C-Line),干燥后组装试纸条,建立免疫层析分析方法。考查检测试纸条的灵敏度和稳定性,并应用于动物源性食品(猪肉、牛肉、羊肉和猪肝)中沙丁胺醇残留的可视化检测。实验结果可以看出,沙丁胺醇胶体金标记免疫层析分析方法的样品检出限为5μg/L,沙丁胺醇GPG标记免疫层析分析方法的样品检出限为10μg/L。     

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测磺胺嘧啶残留

本实验用胶体金标记磺胺嘧啶多克隆抗体包被在胺体金垫上,磺胺嘧啶与牛血清白蛋白偶联物和羊抗兔二抗抗体分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线),制成免疫层析快速检测试剂条,用于快速检测组织等样品中的磺胺嘧啶残留量.T线与待测样品中所含磺胺嘧啶竞争结合胶体金标记的磺胺嘧啶多克隆抗体,并通过胶体金显色直接观察检测结果.检测猪肉等组织试样时,灵敏度最低值可达到20 ng/mL,只需3～5 min.本试剂条具有较高的灵敏度及特异性,操作简单,快速,结果稳定可靠,可作为磺胺嘧啶残留现场监控的有效筛检手段.     

胶体金免疫层析法快速检测组织样品中喹诺酮类药物残留

为建立用于快速检测组织样品中喹诺酮类药物残留的胶体金免疫层析试剂,采用免疫竞争法,将抗喹诺酮类单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的喹诺酮类抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中相应喹诺酮类药物竞争结合胶体金标记的抗喹诺酮类单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的定性结果.检测肉、鱼、虾等组织试样时,灵敏度最低值可达到10ng/mL,只需3 min～5 min,与类似物无交叉反应.     

赭曲霉毒素A胶体金快速检测试剂条的研制

为建立一种快速检测饲料中赭曲霉毒素A的检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种饲料中赭曲霉毒素A的免疫胶体金快速检测试剂条.将羊抗鼠IgG、特异性结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条.试剂条的最低检测限为25μg/kg,与其他霉菌毒素的交叉反应率小于1％.该试剂条可用于饲料中赭曲霉毒素A的快速检测.     

基于PAMAM树枝状大分子的纳米免疫传感器法快速测定肉类中沙丁胺醇

采用聚酰胺-胺(PAMAM)树枝状大分子材料、羧基化多壁碳纳米管(MC-COOH)和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合材料修饰玻碳电极,包埋固定沙丁胺醇抗体制备免疫传感器,建立一种新型免疫传感器法快速检测肉类中沙丁胺醇(SAL)。以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法对该纳米传感器进行电化学表征,优化免疫传感器法测定沙丁胺醇的试验条件,结果:电解质溶液p H 7.0,孵育温度37℃,孵育时间30 min。该传感器的免疫响应电流与电解质溶液中沙丁胺醇的质量浓度在0.1~25 ng/m L范围呈线性关系,其线性方程为IP=-0.2878CSAL+45.865,相关系数R2=0.9946,最低检出限为0.04 ng/m L(S/N=3),加标回收率为95.40%~103.90%;利用该法与高效液相色谱法检测市售猪肉、羊肉中的沙丁胺醇,其检测结果与HPLC法基本一致,该法具有简便快捷、准确等优点,可用于肉类及肉制品中沙丁胺醇的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中土霉素残留

目的 建立用于快速检测动物源性食品中土霉素残留的胶体金免疫层析试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金粒径选用20 nm,将经鉴定制备成功的胶体金溶液与土霉素多克隆抗体结合得到金标抗体.优化金标抗体的制备条件,将包被抗原(1.0 mg/mL)和羊抗鼠二抗(0.75 mg/mL)分别作为检测线和质控线包被在硝...     

胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留

为建立用于快速检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析试纸条，采用免疫竞争法，将抗氯霉素单克隆抗体一胶体金复合物包被在胶体金结合垫上，并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线（T线），其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体，并能以颜色直观显示检测的定性结果。检测虾肉等组织试样时，灵敏度最低值可达到1ng／ml，只需5—10min，与类似物无交叉反应。试纸条具有较高的灵敏度及特异性，操作便捷．稳定可靠，可作为氯霉素残留现场监控的有效筛检手段。     

沙丁胺醇ELISA方法的建立及应用

为建立1种快速检测沙丁胺醇的ELISA方法,以制备的抗沙丁胺醇(salbutamol,SAL)高亲和力单克隆抗体为基础,从影响ELISA检测结果的因素出发,优化间接竞争ELISA条件。通过添加标准沙丁胺醇溶液进行验证。试验结果表明:ELISA反应的最佳反应条件:包被温度37℃,包被时间1 h,竞争时间0.5 h,包被质量浓度1μg/mL,抗体稀释度1∶32 000。在此条件下建立标准曲线。该方法对沙丁胺醇的检测线性范围为0.1~128μg/L,IC50为1.35μg/L,最低检测限(LOD)为0.2μg/L,添加回收率83.8%~89.7%,变异系数均小于11%。采用该方法检测喂药动物尿液中的沙丁胺醇残留,特异性高,适用于猪尿中沙丁胺醇残留的初步筛选。     

玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研制

目的 应用胶体金免疫层析技术, 研制一种玉米等谷物中玉米赤霉烯酮残留免疫胶体金快速检测试剂板。方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化, 以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上。包被后的硝酸纤维素膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条。结果 该试剂板的最低检测限为100 μg/kg, 整个检测过程仅15 min, 与其他霉菌毒素无交叉反应。结论 该试剂板可用于玉米赤霉烯酮残留快速检测。     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的 建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法.方法 采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条.样品经磷酸盐处理...     

苯甲酸免疫胶体金快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,制备苯甲酸胶体金免疫层析快速检测试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为17nm的胶体金,将苯甲酸金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫,将包被抗原和二抗羊抗兔分别结合于硝酸纤维膜作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成胶体金免疫层析试纸条并进行灵敏度测试。结果显示,胶体金试纸条检测限为100μg/L,可在5～7min内完成测试,与苯酚、甲苯、苯乙酸、苯丙氨酸等药物均无交叉反应,检测结果与酶联免疫吸附法完全一致。该方法具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作,具有广泛的商业开发应用前景。      

双甲脒胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在蜂蜜中的应用

目的 基于胶体金免疫层析原理研制双甲脒快速检测试纸条,评价其在蜂蜜检测中的应用效果。方法 使用双甲脒-BSA偶联物作为人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体,制备胶体金微孔试剂,使用双甲脒-OVA偶联物和羊抗鼠IgG抗体分别作为试纸条的检测线和控制线,并对蜂蜜样品进行添加检测。结果研制的试纸条可以定性检测蜂蜜中双甲脒的残留,对蜂蜜中双甲脒的检测限为0.2mg/kg,检测用时约25min,,与双甲脒功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。结论 本试验研制的试纸条适用于蜂场现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,为蜂蜜中抗生素残留控制提供有效监管手段。     

胶体金标免疫固相膜检测动物性食品中氟甲喹

氟甲喹(flumequine,FLU)是动物专用的抗生素,滥用或超标使用会造成动物性食品中的残留问题,对人类健康造成危害。以活泼酯法制备氟甲喹完全抗原,免疫新西兰大耳白兔获得抗血清,通过间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗血清的效价和亲和性,效价为1∶12 800,纯化后抗体的IC50达到0.055 ng/mL。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用于标记FLU多克隆抗体制备免疫金。以硝酸纤维素膜为固相载体,包被上包被原和酶标二抗作为检测线和控制线,优化检测条件:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗稀释40倍、包被量1.0μg、免疫金稀释度1∶5(体积比)、金标抗体与待测溶液混合比例1∶5(体积比)。在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫固相膜,最低检出限达40μg/L。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法适于大量样品的快速定性筛查。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮单克隆抗体的制备、鉴定与胶体金免疫层析试纸条的研制

目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮（AMOZ）单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法。方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原。免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对CP-AMOZ半抑制浓度（IC50）和最低检测限（LOD）,并检测抗体的特异性。胶体金与单抗偶联,同时在NC膜上包被完全抗原、兔抗鼠多抗分别作为检测线和质控线,制备免疫层析试纸条,测定试纸条的灵敏度与特异性。结果:成功制备CP-AMOZ-BSA、CP-AMOZ-OVA完全抗原及抗CP-AMOZ的单抗,抗体效价为1∶1.6×105,对CP-AMOZ IC50为0.86μg/L,LOD0.07μg/L,与其他硝基呋喃类药物代谢物及其衍生物均无交叉反应。制备的胶体金试纸条灵敏度5μg/L。结论:成功合成了CP-AMOZ的完全抗原,免疫小鼠后制备了特异性强的单抗,并以此为基础研制出敏感、特异的胶体金快速检测试纸条。      

新霉素半定量胶体金试纸条的研制

建立了一种快速、简单的检测牛乳中新霉素残留量的胶体金免疫层析法。将不同浓度的新霉素人工合成完 全抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线（T1、T2线）,与待测牛乳样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体- 胶体金标记物,通过两条T1、T2线显色情况使传统新霉素胶体金试纸条由定性检测准确到半定量检测。试纸条对 牛乳样品的半定量检测限分别为200 μg/kg和400 μg/kg,该检测限满足欧盟及国家对新霉素检测的需求,且检测牛 乳样品能够满足现场快速检测的要求,为现场快速检测牛乳中新霉素残留提供了更精确的参考依据。     

Immumochromatographic assay for determination of hexoestrol residues

One-step membrane-based competitive colloidal gold-based immunoassays in lateral-flow formats for the rapid detection of hexoestrol (HES) were developed. Nitrocellulose membrane strip was separately coated with goat anti-rabbit IgG (control line) and HES hapten–OVA conjugate (test line). Anti-HES polyclonal antibody labelled with colloidal gold particles was firstly incubated with HES. A positive reaction as a result of the remaining antibody–gold conjugate combining with antigen coated on the membrane was obvious by visual detection, with detection limits for lateral flow of 10 μg/kg for detecting HES standard solution, and the limit of detection was 20 μg/kg for detecting the HES spiked in swine urine and liver. The assay time for test was less than 5 min, suitable for rapid testing on-site.     

胶体金免疫层析法检测食品中的磺胺类药物残留

建立了一种用于快速检测动物源性食品中五种磺胺类药物,磺胺异噁唑(SIZ)、磺胺噻唑(STZ)、磺胺对甲氧嘧啶(SME),磺胺甲二唑(SMT)、磺胺氯哒嗪(SCPA)残留的胶体金免疫层析方法.采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nm的胶体金,将对磺胺类药物具有广谱特异性的多克隆抗体-肢体金复合物喷涂在玻璃纤维上,并将人工合...