青钱柳悬浮细胞的培养及其基质消耗的规律

青钱柳为我国特有的胡桃科青钱柳属单种属珍稀植物,也是国家重点保护的濒危植物之一,青钱柳叶含三萜、黄酮、多糖及微量元素等活性成分,具有降糖、调脂、增强免疫等多种生理活性和药理功能,是很好的天然保健食品资源。本文建立青钱柳细胞悬浮培养体系,测定悬浮培养细胞的生长曲线,并研究了培养代数、接种量、装液量、pH值和激素组合对青钱柳悬浮体系建立的影响,同时研究了悬浮培养青钱柳细胞对培养液中主要基质的消耗规律。结果表明:适合青钱柳悬浮培养的培养基为:MS+0.1 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA+1 mg/L KT+30 g/L蔗糖,接种量为8%,摇瓶装液量的体积分数为40%,初始pH 5。青钱柳细胞生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系,在培养8 d,糖和PO43-基本消耗完毕;在氮源的吸收上,NH4+优于NO3-,NH4+的吸收基本上是呈直线下降。     

Ca2+、Mg2+及食盐对浸酸铬鞣的影响

研究了水中Ca2+、Mg2+和NaCl的含量对猪皮浸酸铬鞣的影响.通过正交试验和扩大试验研究发现,Ca2+、Mg2+和NaCl对浸酸铬鞣的影响趋势为Mg2+＞NaCl＞Ca2+.当水中Ca2+、Mg2+含量分别达到质量浓度为80 mg/L和30 mg/L时,铬吸收率大于95%,坯革的Ts均达到100℃以上.坯革粒面平细、染色均匀,物理机械性能达到同类产品指标.NaCl质量浓度高于65 g/L时,不利于铬的吸收和结合.试验结果表明水中Ca2+、Mg2+含量分别达到质量浓度为80 mg/L和30 mg/L时,对猪皮浸酸铬鞣无不良影响.     

基于正交试验的蔗糖酶酶学特性研究

蔗糖酶是一类由酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)合成并分泌到胞外的果糖基转移酶。为了进一步提高蔗糖酶活性,对该酶进行单因素试验及正交试验优化。通过单因素试验优化得到一定范围内酶活随p H升高而降低,最适温度为60℃,Mn2+对酶活促进作用最强,Ca2+浓度为0.3 mmol/L时,促进作用最强。通过对各类因素的正交试验,确定蔗糖酶活性最高的条件为:p H 4.2,65℃,Ca2+浓度为0.2 mmol/L,Mn2+浓度为0.2 mmol/L。此时蔗糖酶的单位转化率达到18.06%/(m L酶·min),酶活为2.709 U/m L酶。     

杨树桑黄胞外多糖发酵条件优化及形态学研究

采用单因素试验和正交试验优化了杨树桑黄摇瓶产胞外多糖(EPS)的培养条件,并研究了优化培养基中菌丝体的形态变化。单因素试验结果表明,杨树桑黄产EPS的最适生长周期为8 d,最佳碳源、氮源和无机盐分别为蔗糖、玉米粉和KH_2PO_4,最适环境条件为温度28℃,pH 7。在此基础上,选用碳源、氮源和无机盐3个因素,应用正交试验优化出杨黄产EPS的最佳培养基配方为:40 g/L蔗糖,4 g/L玉米粉,4 mmol/L KH_2PO_4。在优化培养条件下,胞外多糖产量为0.352 g/L。优化培养基的形态学结果表明,随着发酵时间的延长,菌丝球逐渐增大,平均直径、紧密度均逐渐增加,圆度先增加后急剧减小,粗糙度与圆度呈负相关,表现为先减小后增加的趋势。     

金属离子促进Gluconobacter oxydans高效合成2-酮基-L-古龙酸

根据Gluconobacter oxydans合成2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)代谢途径采用单因素实验研究了6种金属离子对细胞生长和2-KLG的影响,在此基础上,对促进细胞生长或产酸的Mg2+、Mn2+、Fe3+建立多元二次方程模型,得到上述3种金属元素的最佳浓度为Fe3+0.21 mmol/L,Mn2+9.98 mmol/L和Mg2+4.23 mmol/L。在这一最优组合下,2-KLG产量达到65.1 g/L,与优化前比较,提高了144.4%。     

芽胞杆菌B-09产胞外多糖培养基优化及多糖黏度性质

对1株海洋芽孢杆菌B-09产胞外多糖的较佳培养基及多糖黏度性质进行了初步研究。结果表明,菌株B-09产胞外多糖较佳培养基是:蔗糖60g/L,酵母膏5g/L,玉米浆10g/L,海水添加量0.8L,培养基初始pH值为8.0。在此条件下,多糖产量为4.59g/L。多糖溶液浓度与比浓黏度呈线性相关,特性黏度为0.28dL/g。多糖黏度具有较好的pH稳定性和耐热性,对Na+、Ca2+、K+电解质有较好的稳定性,Mg2+电解质对多糖液的黏度有较大的影响。     

一株产白藜芦醇真菌的培养及调控研究

在虎杖组织培养过程中分离出1株真菌,对其发酵液提取物进行TLC和HPLC分析证明能产生白藜芦醇,并对其培养条件及白藜芦醇积累特性进行了初步研究,通过正交优化试验得到最佳培养条件为:20g/L蔗糖、2g/L硝酸铵、自然pH值（6．8～7．0）、温度为28℃,转速100r/min。3mmol/L苯丙氨酸前体物、Mg2+、Zn2+能促进真菌B-39的生长及白藜芦醇的积累,其白藜芦醇含量能达8．6617μg/100ml。     

金属离子对红发夫酵母的生长、细胞形态及虾青素合成的影响

主要研究了Mn2+、Mg2+和Ca2+三种金属离子对红发夫酵母(Phaffiarhodozyma)的生长、细胞形态及虾青素生物合成的影响。结果表明,在种子培养基中添加Mn2+能明显提高红发夫酵母的β-D-葡萄糖苷酶的活性并改变细胞的形态;在发酵培养基中添加0.1g/LMn2+,能明显促进细胞生长及虾青素合成;用正交试验法优化得到发酵培养基中的金属离子浓度为:0.1g/LMn2+、0.7g/LMg2+、0.2g/LCa2+,在优化后的培养基中,细胞生长速度快,摇瓶发酵57h的虾青素产量达2.95mg/L,是不加金属离子情况下发酵产虾青素最大量(发酵72h)的1.31倍。     

重组蔗糖磷酸化酶表达培养基的优化及化学试剂对酶活的影响

为了提高重组蔗糖磷酸化酶的表达水平,本研究通过单因素实验,研究了不同的碳源、氮源、稳定剂和金属离子对重组蔗糖磷酸化酶在大肠杆菌中表达的影响,并通过正交试验确定了最优的重组蔗糖磷酸化酶表达培养基的成分。另外,本研究也考察了不同的化学试剂和金属离子对重组蔗糖磷酸化酶的活性影响。结果表明,维生素C和FeCl₂显著（P<0.01）抑制了蛋白的表达,Cu2+和Zn2+完全抑制了菌体的生长,而淀粉、K+和Mg2+对重组蔗糖磷酸化酶的表达具有一定的促进作用,且三者的协同作用可以极大的提高重组蔗糖磷酸化酶的表达效率。其中在50 mL LB培养基中加入0.5%淀粉、0.1% K+和0.05% Mg2+的组合,总酶活达1207.83 U,比优化前提高了3.6倍。,Fe2+（10 mmol/L）、Mg2+（10 mmol/L）、牛血清蛋白（1%）和土温80（0.1%）均可在一定程度上提高该酶的活性。     

大花金挖耳细胞悬浮系的建立及黄酮类化合物的产生

研究不同培养基、蔗糖质量浓度、pH 值、接种量、NAA、6-BA、VB1 及培养时间对大花金挖耳细胞生长和黄酮类化合物合成的影响。结果表明：NT 液体培养基在pH5.5、蔗糖质量浓度40g/L、接种量40g/L 鲜质量细胞、NAA 1.0mg/L+6-BA 0.2mg/L 时有利于细胞的生长和黄酮类化合物合成,向NT 培养基中添加1.0～4.0mg/LVB1 有抑制细胞褐化的作用,大花金挖耳悬浮细胞的生长及黄酮类化合物合成随培养时间的延长,表现出先升高后降低的趋势,在接种15～21d 后,细胞生物量可达23.54～24.51g/L,黄酮类化合物得率为1.19%～1.23%。     

响应面法优化酶菌协同制备高抗氧化活性青钱柳发酵粉工艺

以青钱柳干燥叶为原料,采用复合酶（纤维素酶和半纤维素酶）对其进行酶解,酶解液经混合菌（植物乳杆菌和酿酒酵母）发酵后冷冻干燥制备成高抗氧化活性的青钱柳发酵粉。单因素实验研究了料液比、复合酶添加量、复合酶质量比、酶解时间、蔗糖添加量、混合菌添加量、混合菌质量比、发酵时间对青钱柳发酵粉DPPH自由基清除效果的影响。再进一步运用Plackett-Burnman（PB）试验设计和响应面法优化了青钱柳酶菌协同发酵工艺。结果表明,最优的青钱柳酶菌协同发酵工艺参数为:料液比1:12 g/mL、复合酶添加量0.80%、复合酶质量比2.20:1 g/g、酶解时间2.5 h、蔗糖添加量8.0%、混合菌添加量5.80%、混合菌质量比2:1 g/g、发酵时间42 h。在此条件下,青钱柳发酵粉DPPH自由基清除率为82.17%。对最优条件下制备的青钱柳发酵粉与未处理的样品进行了比较:DPPH自由基清除率增加了159.9%,青钱柳多糖含量增加了194.0%,青钱柳总黄酮含量增加了72.0%,青钱柳总三萜含量增加了52.6%。本文为青钱柳叶的精深加工和青钱柳即溶茶粉的产业化奠定了研究基础。     

青钱柳多糖的乙酰化修饰及抗氧化活性

以青钱柳多糖为原料,使用乙酸酐法制备得到乙酰化青钱柳多糖样品。以乙酰化多糖取代度为评价指标,采用正交试验考察乙酸酐-多糖比例、反应时间、反应温度对乙酰化修饰的影响。在此基础上,选择取代度为0.681的乙酰化多糖样品进行1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除实验。结果表明,青钱柳多糖乙酰化最优反应条件为：m（多糖）∶V（乙酸酐）＝1∶60、反应时间2 h、反应温度40 ℃,同时,乙酰化修饰可以显著提高青钱柳多糖的DPPH自由基清除活性,乙酰化修饰可作为青钱柳多糖改性的方法之一,为青钱柳资源的进一步开发利用提供新的方向。     

酶菌协同发酵产青钱柳多糖工艺优化

以青钱柳干燥后叶子为原料,青钱柳多糖的含量为评价指标,采用复合酶（纤维素酶与半纤维素酶质量比1∶1）对原料进行酶解处理,再经过混合菌种（粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）质量比1∶1）对酶解液进行发酵,并采用单因素试验及响应面试验对酶菌协同发酵产青钱柳多糖的工艺进行优化。结果表明,最优工艺条件为：料液比8∶100（mg∶mL）、纤维素酶与半纤维素酶质量比1.8∶1.0、复合酶添加量0.8%、酶解时间2.5 h、蔗糖添加量8.0%、粗糙脉孢菌和枯草芽孢杆菌质量比2∶1、混合菌添加量5.0%、发酵时间60 h。在此优化条件下,青钱柳多糖含量达到3.34 mg/mL。     

超高压提取青钱柳多糖条件优化及抗氧化活性

试验以青钱柳叶为原料,研究青钱柳多糖的超高压提取工艺,对提取的青钱柳粗多糖进行抗氧化活性试验。采用单因素及正交试验对青钱柳多糖的超高压提取工艺进行优化,结果显示,青钱柳多糖最佳提取条件为:料液比1︰25(g/mL)、提取温度30℃、提取压力500 MPa。在此条件下,青钱柳多糖得率最高,为3.70%。将青钱柳粗多糖进行清除DPPH自由基、清除羟基自由基试验,以抗坏血酸(VC)为对照,测定青钱柳叶粗多糖的体外抗氧化能力。结果表明,青钱柳叶粗多糖清除DPPH自由基效果较好且较对照组浓度低,最高清除率为93.0%,而清除羟基自由基效果低于对照。     

簕菜青钱柳复合多糖饮料研制及体外抗氧化降血糖作用

目的 优化簕菜青钱柳复合多糖饮料配方,并评价其体外抗氧化活性和降血糖作用.方法 以对 α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,确定簕菜多糖与青钱柳多糖的最佳配比;以感官评分和离心沉淀率为评价指标,通过单因素实验、响应面实验和正交实验,优化簕菜青钱柳复合多糖饮料的最佳配方;对复合多糖饮料进行体外抗氧化及降血糖功能相关指标的测定....     

发酵法生产衣康酸技术的研究——衣康酸发酵工艺条件的研究(Ⅱ)

以衣康酸高产菌株土曲霉HAT418为出发菌株 ,研究探讨了不同碳源、氮源、无机盐类以及温度、起始 pH值等因素对衣康酸发酵的影响 ,确定了较优培养基组成和发酵工艺条件。实验结果表明 ,土曲霉HAT418适合于多种原料的衣康酸生产 ,如玉米淀粉、山芋粉、低脂玉米粉、蔗糖、口服葡萄糖等 ;硝酸铵、硫酸铵是衣康酸发酵的最适氮源 ,玉米浆是必要的辅助氮源 ;适宜的发酵起始pH值在 2 5～ 3 0 ;适宜的发酵温度为 3 6～ 3 7℃ ;Mg2 + 对土曲霉HAT418菌株的衣康酸发酵影响显著 ,适量的Mg2 + 是衣康酸发酵必需的 ;Ca2 + 可抑制杂酸的形成 ,培养基中添加 0 1g/L的CaCl2 可以使发酵液中衣康酸占总酸的比例提高 1 2 3 %。土曲霉HAT418菌株以 12 0～ 160 g/L的玉米淀粉双酶水解糖为碳源 ,NH4NO3 为主要氮源 ,摇瓶发酵 80h左右 ,衣康酸产酸率达到 83 0～10 1 1g/L ,糖酸转化率为 63 13 %～ 69 17% ,发酵残糖为 0 9～ 9 7g/L。     

青钱柳多糖抗氧化活性的研究

目的:研究青钱柳多糖的抗氧化活性.方法:采用水提醇沉方法,Sevage法除蛋白,用D301R型大孔树脂纯化制备多糖;通过Fenton体系,DPPH·两种分析方法测定体外清除自由基能力;用青钱柳多糖对高脂小鼠进行干预后,测定肝脏SOD、MDA、GSH-Px、NEFA的含量,以此评定其体内抗氧化功能.结果:青钱柳多糖对羟基自由基、DPPH自由基清除效果显著,并且清除DPPH的效果优于羟基自由基;体内实验显示:青钱柳多糖能显著提高肝脏SOD和GSH-Px的活性,降低肝脏MDA及NEFA的含量.结论:体内及体外实验都显示青钱柳多糖具有显著的抗氧化活性.     

富硒青钱柳多糖对α葡萄糖苷酶及HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

以α-葡萄糖苷酶和HepG2细胞作为体外受体模型,研究富硒青钱柳多糖(Se-CPP)体外降血糖活性,并与青钱柳多糖(CPP)、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物比较。结果表明,Se-CPP对α-葡萄糖苷酶活性具有良好的抑制效果且呈现明显的剂量依赖性,其半抑制浓度(IC₅₀)为0.054 mg/mL,低于阿卡波糖、CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物。适宜浓度的Se-CPP可促进胰岛素抵抗状态HepG2细胞对葡萄糖的消耗,效果显著优于CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物(p<0.05)。     

氯化钙对食品致腐荧光假单胞菌生物被膜形成的影响

研究氯化钙（CaCl2）对食品腐败株荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）生物被膜形成特征的影响。采用结晶紫法、菌体计数、苯酚-硫酸法、共聚焦扫描显微镜和实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测Ca2＋对荧光假单胞菌的生物被膜形成、多糖分泌、被膜结构及相关基因表达的影响。结果表明,0.1 mmol/L Ca2＋刺激荧光假单胞菌生物被膜,随着浓度增加被膜形成增强,其中1 mmol/L促进最明显,而高于10 mmol/L作用减弱,并且Ca2＋不影响浮游细菌生长;同时,0.1 mmol/L和1 mmol/L Ca2＋对胞外多糖、薄膜和泳动性均呈现促进效果,而高浓度下呈现抑制;共聚焦扫描显微镜观察荧光假单胞菌对照组、1 mmol/L和20 mmol/L Ca2＋处理组的成熟生物被膜厚度分别为20.0、40.0 μm和25.0 μm,其中添加1 mmol/L Ca2＋显著增加PF07被膜厚度、菌体和胞外聚合物分泌量,使被膜结构更致密;实时荧光定量PCR检测显示,1 mmol/L Ca2＋刺激菌体黏附素lapA、藻多糖alg、鞭毛flgA基因表达量增加3～4 倍,并且Ca2＋均显著刺激AHLs合成酶luxI基因的表达,提示Ca2＋影响生物被膜与群体感应密切相关。可见,食品介质中CaCl2通过影响菌体黏附行为、胞外分泌物、基因表达导致荧光假单胞菌生物被膜形成特征和结构的改变,该研究为复杂的食品介质中腐败菌生物被膜形成和黏附提供依据。