痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用

目的观察痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用。方法将痰热清注射液倍比稀释成1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512共9个浓度组,分别处理增殖期慢性髓系白血病K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果痰热清注射液能明显抑制K562细胞增殖,细胞倍增时间为24h,1:2至1:8稀释浓度组的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量和时间依赖性,IC50约为1:55稀释浓度。结论痰热清注射液对K562细胞具有抑制作用,这为临床应用痰热清注射液治疗血液肿瘤并发感染提供了实验基础。     

生长抑素对人红白血病K562细胞超微结构的影响

目的：观察生长抑素（somatostatin,SMS)对人红白血病K562细胞超微结构的影响。方法：采用体外细胞培养，加入不同浓度的8肽生长抑素（奥曲肽，octreotide)作用于K562细胞，透射电镜下观察不同浓度SMS对K562细胞超微结构影响的变化。结果：空白对照组细胞质内有各种发达的细胞器；SMS处理组随SMS浓度的增加细胞器有不同程度的变化，以10^-7mol/L-10^-6mol/L变化最明显，细胞核染色质靠核膜边集呈块状或新月形，胞浆中见核碎裂团块与空泡，线粒体基质深染、空泡样变和髓样变。结论：生长抑素可影响K562细胞的增殖，并呈现典型的细胞凋亡的超微结构变化。     

低强度中频超声对白血病细胞株k562杀伤作用的初步研究

目的：研究低强度中频超声对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法：取对数生长期的K562细胞,分成实验组和假辐照组,用MTT法和台盼兰染色计算细胞抑制率。结果：低强度中频超声照射各组间细胞抑制率与对照组相比有统计学差异,且组间存在统计学差异。结论：单纯低强度中频超声对白血病细胞株K562有较强的杀伤作用,且其杀伤效应与照射强度和时间明显相关。     

无线电电子学的应用

TN99 02041832毫米波辐射对K562细胞作用机制研究/方昆阳,赖声礼,罗绍凯,王霄(华南理工大学)∥华南理工大学学报。-2001,29(12).-6-9观察了毫米波辐射对K562细胞超微结构、钙离子沉淀分布和线粒体跨膜电位(△ψm)变化的影响,发现低功率密度的毫米波辐射可以引起多数细胞的细胞膜形态立即发生变化,同时引起内质网池极度扩张,边缘钙离子沉淀增多,辐射结束数小时内凋亡细胞逐步增多。表明低功率密度的毫米波辐射通过影响细胞膜和内质网,引起胞内钙离子浓度升高从而诱导细胞凋亡。图8表1参4(木)TN99,TP319 02041833水情遥测系统中快速差错校验的软件方法/茅志兵,孙玉龙,孙典红(河     

NKG2D配体在视网膜母细胞瘤RB细胞的表达及意义

目的：探讨视网膜母细胞瘤RB细胞株上NKG2D配体的表达情况及其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法：采用半定量RT-PCR法检测RB细胞及人红白血病细胞K562细胞上NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的mRNA表达情况。应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果：K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3,RB细胞表面表达MICA、MICB、ULBP2、ULBP3不表达ULBP1。K562细胞表面NKG2D的配体mRNA表达强度明显强于RB细胞（P〈0．05）。当效靶比分别为5：1、10：1、20：1、40：1时NK细胞对K562、RB细胞的杀伤活性分别为28．32％±2．06％、9．11％±0．89％;45．62％±1．17％、22．87％±1．38％;60．79％±1．78％、32．69％±0．37％;73．83％±3．05％、50．29％±2．49％,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较RB细胞明显增强（P〈0．05）。结论：NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,NKG2D配体表达水平可能决定着NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤作用。     

PDT对反义bcr-abl寡核苷酸k562细胞转染的影响

目的 :体外研究光动力治疗 (PDT)对b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸 (ASO)慢性髓细胞性白血病 (CML)细胞株K5 6 2转染的影响 ,为PDT合并反义技术应用于CML患者治疗提供实验基础。方法 :半导体激光 ,波长 6 5 0nm ,剂量 9J cm2 垂直照射。光敏剂为血卟啉单甲醚(HMME) ,采用体外细胞培养技术 ,流式细胞仪检测PDT实验组与对照组荧光标记的反义bcr-abl寡核苷酸 (ASPO)K5 6 2细胞摄入率及荧光强度。结果 :①PDT可显著提高k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入 ,比直接转染增加转染率可达 4-1 0倍。且k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入和反义bcr-abl寡核苷酸浓度及作用时间有关。②光敏剂量浓度为 0 .9μmol·L- 1 时转染的效率最高 ,4小时点细胞内平均荧光强度最强 (P <0 .0 1 ) ,且细胞内平均荧光强度随ASPO浓度的增加而增高。但直接转染时 ,6小时才达到高峰。浓度为 0 .6 μmol·L- 1 ～ 0 .9μmol·L- 1 时K5 6 2细胞对荧光物质的摄入即达饱和。结论 :PDT可以增加反义bcr -abl寡核苷酸K5 6 2细胞转染率     

AFM观察稳恒磁场对细胞表面精细结构的影响

利用原子力显微镜(AFM)观察稳恒磁场(SMF)处理后,悬浮生长细胞(K562人白血病细胞)、贴壁生长细胞(人结肠癌SW480细胞)、小鼠肝癌细胞Hepal-6和原代小鼠肝细胞表面精细结构的变化,以了解SMF杀伤肿瘤细胞的可能机制.观察结果显示:随曝磁时间延长,SMF可在肿瘤细胞表面造成不同程度损伤,主要表现为细胞膜上出现许多大小不一的凹陷,且凹陷数量和直径随着曝磁时间延长而增加.与MTT检测相比,AFM观察到的各类细胞表面损伤远早于细胞的生长抑制.实验观察显示,悬浮生长细胞比贴壁生长细胞对磁场处理更为敏感,小鼠肝癌细胞比肝细胞对磁处理更敏感.实验结果显示,AFM能够及早观察到细胞表面因SMF作用而产生的精细结构方面的变化.     

毫米波辐射对细胞膜电位变化影响机理研究

用细胞膜电压荧光技术及荧光显微技术,研究了毫米波场辐射下悬液中K562细胞膜电压的变化。结果表明,在相同辐射条件下,不同细胞浓度组的K562细胞膜电压变化规律是不相同的。然后用场近似等效方法,建立了毫米波场辐射下,排列在平面上的悬液细胞膜电压计算模型。根据模型,计算了悬液中的细胞膜电压,用生物电磁学的观点,对实验现象的产生机理进行了探讨。     

绿茶多酚对鱼藤酮致PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:建立鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型,观察绿茶多酚对细胞活性、凋亡指标及多巴胺(DA)含量的影响。方法:以高度分化的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理后,再分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,测定caspase-3活性和多巴胺的含量,并对结果进行统计学分析。结果:绿茶多酚预处理组(5、15、45μmol/L)和司来吉兰(50μmol/L)预处理组的细胞活力均显著高于鱼藤酮对照组(2.5μmol/L)。流式细胞仪检测结果显示,鱼藤酮对照组、绿茶多酚(51、5、45μmol/L)预处理组、司来吉兰(50μmol/L)预处理组、正常对照组的细胞凋亡率依次为(28.7±1.8)%;(15.8±1.2)%(、10.2±1.3)%、(3.2±0.6)%;(7.24±1.0)%和(1.2±0.3)%。与鱼藤酮对照组相比,绿茶多酚处理组也能降低细胞caspase-3活性。绿茶多酚预处理后,可以增加鱼藤酮诱导PC12细胞模型中的DA含量,但仍然低于正常对照组。结论:绿茶多酚能抑制鱼藤酮诱导的PCI2细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与抗凋亡蛋白,维持多巴胺含量有关。     

ALA-PDT破坏K562和HL60白血病细胞实验条件选择的研究

目的研究在5 -氨基乙酰丙酸( 5 -aminolaevulinicacid ,ALA)介导的光动力疗法(PDT)灭活K5 62和HL60白血病细胞株的实验中,光敏剂的浓度、暗室孵育时间、光源波长及ALA -PDT后继续培养对细胞存活率的影响。方法用不同浓度( 0 .5、1、1.5、2mmol/L)的ALA避光孵育细胞不同时间( 1、2、4、6、12h) ,给予不同波长( 4 10、5 77nm)光源照射后,即刻处理或继续培养,采用MTT法检测细胞存活率。结果ALA 光照能对白血病细胞产生灭活作用。细胞存活率随ALA浓度的增加而降低,在细胞密度为2×10 5个/ml,ALA浓度2mmol/L ,暗室孵育4h细胞存活率最低,光源波长为410nm时细胞存活率低于偏离此波长时的存活率。PDT后2 4hK5 62细胞的存活率较PDT后即刻的升高,而HL60则进一步降低,ALA -PDT对正常外周血单个核细胞及外周血干细胞存活率影响不大。结论ALA -PDT能够灭活K5 62和HL60白血病细胞。较理想的实验条件是2mmol/LALA避光孵育2×10 5/ml细胞,4h、光源波长410nm ,PDT后2 4h。在此条件下,K5 62细胞对PDT的反应不如HL60细胞敏感,对PBMC无灭活作用,对外周血造血干细胞影响较小。     

双氢青蒿素对骨肉瘤细胞143B影响的研究

目的：研究双氢青蒿素（Dihydroatemisinine,DHA）对人骨肉瘤细胞143B的影响及所导致的形态学变化。方法：采用人骨肉瘤143B细胞株,通过设置对照组和低浓度、中浓度、高浓度的DHA组,H．E染色观察Trandwell小室穿梭能力;划痕愈合实验观察迁移能力;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖抑制能力。结果：DHA表现出明显地抑制人骨肉瘤143B细胞的迁移、增殖以及促进凋亡（P〈0．05）,且伴随浓度的递增和时间的延长,抑制作用更明显。结论：DHA具有较强的抗入骨肉瘤作用,其机制可能与DHA诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其增殖有关。     

雷公藤内酯醇通过介导热休克蛋白27的表达诱导Hut78细胞凋亡

目的：探讨雷公藤内酯醇（Triptolide,TP）诱导皮肤T细胞淋巴瘤Se’zary综合征Hut78的凋亡及机制。方法：采用MTT法检测Hut78细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut78细胞的凋亡率,Westernblot检测Hut78细胞中小分子热休克蛋白27（HSP27）的表达。结果：雷公藤内酯醇可诱导Hut78细胞凋亡（P〈0.01）,雷公藤内酯醇干预组,HSP27的表达被抑制。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,雷公藤内酯醇诱导Hut78细胞凋亡率下降,HSP27的表达被抑制效应减弱。结论：雷公藤内酯醇可诱导Se’zary综合征细胞Hut78凋亡,该作用与抑制HSP27的表达密切有关,同时该作用可被p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制,提示p38MAPK信号通路也参与雷公藤内酯醇介导的Se’zary综合征细胞株Hut78中HSP27的表达。     

粉防己碱对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及神经元凋亡的影响

目的：探讨粉防己碱（Tet）对血管性痴呆（VaD）大鼠学习记忆能力和海马神经元凋亡的影响。方法：将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、Tet干预组（含10和30mg/kg两个剂量组）,采用双侧颈总动脉永久性结扎（2-VO法）建立VaD大鼠模型。造模12周后进行Morris水迷宫实验检测大鼠行为学,HE染色观察海马CAl...     

慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的实验研究

目的：观察慢病毒载体转染离体兔角膜基质细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法：转染组用慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白（Lentivirus-enhanced green fluorescent proteins,Lenti-EGFP）转染细胞,对照组则加入空白培养液,在不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）及感染后不同时间段在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并计算转染率;RT-PCR检测EGFP mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞技术（Flow cytometer,FCM）检测病毒对细胞增殖和凋亡的影响。结果：Lenti-EGFP转染细胞后从48h开始可见绿色荧光,在MOI=500时,转染后第5天转染率可达51%;RT-PCR检测转染组有EGFP的mRNA表达;MTT结果显示在MOI为1~500时,漫病毒不影响细胞的增殖;在MOI=500时,FCM检测慢病毒载体对细胞凋亡无影响。结论：慢病毒载体可以在体外稳定有效转染兔角膜基质细胞且不影响细胞活性,是角膜基质细胞理想的基因转染载体。     

汉防己甲素和艾氟龙对兔角膜基质细胞抑制作用的对比研究

目的：探讨比较汉防己甲素（Tet）和艾氟龙对离体兔角膜基质细胞的抑制作用及其作用机制。方法：选用原代及传代兔角膜基质细胞,Tet组加入含不同质量浓度Tet的培养液,艾氟龙组加入不同质量浓度艾氟龙的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测对细胞增生的抑制;免疫细胞化学法检测E2F1的表达状况。结果：Tet和艾氟龙对角膜基质细胞生长都具有抑制作用,各时间点IC50Tet均1低于艾氟龙。免疫细胞化学结果显示,Tet组、艾氟龙组和对照组均有E2F1蛋白的表达,但Tet组和艾氟龙组中E2F1蛋白的表达均减弱,Tet组中E2F1蛋白的表达减弱更明显。结论：Tet和艾氟龙对角膜基质细胞的增生均有抑制作用,且Tet对角膜基质细胞的抑制作用强于艾氟龙。Tet和艾氟龙可能通过降低E2F1的表达使细胞周期停滞而发挥其对角膜基质细胞的抗增生作用。     

靶向YB-1的microRNA表达载体的构建及其对MB-MDA-231细胞增殖的影响

目的：构建靶向YB-1基因的microRNA表达载体,研究其对乳腺癌细胞MB-MDA231增殖的影响。方法：采用microRNA靶基因预测软件预测可能作用于YB-1基因的micro RNA,构建其过表达载体,利用Lipofectamine2000转染细胞MB-MDA231,荧光显微镜下评估转染效果,real-time ...     

shRNA靶向干扰COX-2促进人肝癌裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡

目的：探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡的促进作用。方法：重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,成瘤4周后处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线,RT-PCR和Western blot检测肿瘤组...     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人前列腺癌细胞（PC-3）株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2．5、5．0、10．0kenol／L的5-Aza—CAR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应（tiT—PcR）检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应（BsP）检测UCHLlCpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法（Western Blot）检测UCHL1蛋白的表达。结果：5-Aza—CAR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;5-Aza—CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）;UCHL1 mRNA表达水平显著上调（P〈0．01）;UCHL1蛋白表达水平上升（P〈0．01）。结论：5-Aza—CAR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza—CdR能逆转PC-3细胞UCHLl启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

竹红菌乙素光动力对人舌鳞癌Tca8113细胞杀伤作用的初步研究

目的：本文是用实验的方法,初步探讨中药光敏剂竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对体外人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法：常规培养、选取对数生长期人舌鳞癌Tca8113细胞,用含有竹红菌乙素（HB）浓度分别为0μM、0．25μM、0．5μ／M、1μM、2μM的RPMI-1640培养液孵育细胞4h后,经470nmLED定制多光源半导体激光光照处理（PDT）,能量密度设置分别为0J／CM^2、1J／CM^2、2J／CM^2、3J／CM^2、4J／CM^2。PDT处理后细胞继续孵育24h后,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,并用甲基噻唑四唑法（MIT法）检测竹红菌乙素（HB）对细胞的抑制作用。并分别在激光照射6h及24h后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果：经PDT处理后细胞在光学显微镜及荧光显微镜下均可观察到细胞坏死和凋亡样改变;在一定浓度范围和光照能量密度范围内,竹红菌乙素（HB）在PDT作用下对人舌鳞癌Tca8113细胞生长增殖的抑制和诱导凋亡作用与药物浓度和能量密度成正相关变化。结论：竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对人舌鳞癌Tca8113细胞具有显著的杀伤作用,并在一定范围内呈浓度剂量和光剂量正相关依赖性。