胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法定量检测烟叶中霜霉威残留

【背景和目的】利用胶体金免疫层析技术研制霜霉威定量检测试纸条,并探究其在烟叶样品中的应用。【方法】将霜霉威单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制备金标抗体,优化试纸条反应材料,构建霜霉威免疫层析定量试纸条,验证该试纸条的检出限、定量限、准确性和特异性。【结果】（1）所研制的霜霉威定量试纸条的检测范围为1.25～20 mg/kg,检出限和定量限分别为1.187 mg/kg和3.147 mg/kg;加标回收率84.7%～116.7%,相对标准偏差5.3%～10.9%。（2）可特异性识别霜霉威,对烟草中常用杀菌剂无交叉反应。（3）试纸条检测结果与高效液相色谱-串联质谱法检测结果的相对误差在4.3%～20.1%,R2=0.9898。【结论】该试纸条具有操作方便、检测时间短、准确性高、特异性强的优点,可作为霜霉威残留现场检测的有效手段。     

胶体金免疫层析法半定量检测鸡肉中磺胺嘧啶残留

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体,磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该试纸条可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测,灵敏度为5ng/ml,与其它磺胺类药物无交叉反应,在鸡肉中的回收率为71%～95%;用试纸条与高效液相法对来自动物试验的56份鸡肉样品进行对比检测。以我国磺胺嘧啶残留限量标准(100ng/g)为标准,二者符合率为100%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

胶体金免疫层析法快速检测磺胺嘧啶残留

本实验用胶体金标记磺胺嘧啶多克隆抗体包被在胺体金垫上,磺胺嘧啶与牛血清白蛋白偶联物和羊抗兔二抗抗体分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线),制成免疫层析快速检测试剂条,用于快速检测组织等样品中的磺胺嘧啶残留量.T线与待测样品中所含磺胺嘧啶竞争结合胶体金标记的磺胺嘧啶多克隆抗体,并通过胶体金显色直接观察检测结果.检测猪肉等组织试样时,灵敏度最低值可达到20 ng/mL,只需3～5 min.本试剂条具有较高的灵敏度及特异性,操作简单,快速,结果稳定可靠,可作为磺胺嘧啶残留现场监控的有效筛检手段.     

基于免疫磁珠的胶体金免疫层析法快速检测水产品中地西泮残留

本研究针对水产品中地西泮残留的问题,建立了一种快速、灵敏的免疫磁珠-胶体金免疫层析法。采用链霉亲和素磁珠与生物素化地西泮单克隆抗体偶联制备的免疫磁珠,快速富集、分离水产品中地西泮残留,并结合胶体金免疫层析法进行半定量检测。结果表明,经过优化后试剂卡最佳工艺为金标抗体标记量25 μg/mL、T线抗原包被量0.6 mg/mL、C线羊抗鼠二抗包被量1.5 mg/mL、金标喷量3.0 μL/cm,地西泮加标浓度为1.0、5.0、10.0和15.0 μg/kg时回收率为78.34%~90.40%,相对标准偏差(RSD)为5.03%~8.96%。本方法特异性强、稳定性好,可在25 min内完成单个样本检测,对水产品中地西泮残留检出限为0.5 μg/kg,优于常规前处理法。经验证,对40份水产品样本检测结果与GC-MS法结果一致,证明免疫磁珠-胶体金免疫层析法可作为水产品中地西泮残留快速检测的有效手段。     

胶体金免疫层析法快速检测食用油中黄曲霉毒素残留

为建立用于快速检测粮油样品中黄曲霉毒素药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,我们采用免疫竞争法,将抗黄曲霉毒素单克隆抗体-胶体金复合物包被在微孔中,并将人工合成的黄曲霉毒素抗原包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面作为检测线(T 线)。待测样品中的黄曲霉毒素残留物将与NC膜上的黄曲霉毒素抗原竞争结合胶体金标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体,并以颜色直观显示检测结果。检测食用油样品时,灵敏度可达到0.5μg/L,仅需20 min。实验证明该检测试剂具有较高的灵敏度及很好的特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为黄曲霉毒素残留现场监控的有效快速筛检手段。     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

胶体金免疫层析法快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留

目的:以胶体金为标记物,根据竞争抑制免疫层析原理,建立一种快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留的方法.方法:采用柠檬酸三钠法制备40nm胶体金.电镜鉴定后标记磺胺二甲嘧啶多克隆抗体:磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条.结果:所建立的检测体系方法检出限为1 μg/L,将该法与高效液相色谱法(HPLC)对比检测猪肉和牛奶样品,在试纸务的检测范围内,与HPLC法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性.结论:通过消除基质影响,成功检测到猪肉及牛奶中的磺胺二甲嘧啶残留.该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,整个检测过程可在10min内完成.该方法适用于动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的大批量现场检测.     

胶体金免疫层析法快速检测烟草中吡虫啉残留

目的建立胶体金免疫层析法快速检测烟草中残留的吡虫啉。方法用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用它标记吡虫啉单克隆抗体,建立并优化胶体金免疫层析法。结果本方法对烟草中吡虫啉的检测限为5μg/mL,重复性较高,有假阳性情况出现,但假阳性率较低,与烟草中其他常用药物没有交叉反应,特异性良好,且与气相色谱检测法所得的结果差异较小。结论该方法快速、高效、可靠,可满足现场快速检测烟草中吡虫啉残留的需要,实现生物技术在烟草流通、消费领域的方便、快速检测。     

邻苯二甲酸二甲酯免疫层析快速检测试纸的研制

邻苯二甲酸酯类塑化剂是一类具有生殖毒性的环境激素类物质,通过违规添加或迁移而造成食品污染问题颇为严峻,开发适合现场的塑化剂快速监测方法非常重要。本研究以邻苯二甲酸二甲酯(DMP)为对象,建立了DMP的胶体金标记免疫层析检测试纸方法。采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记DMP多克隆抗体,制备了金标抗体;采用棋盘法和单因素试验确定最佳包被浓度和二抗浓度分别为3000μg/mL和1600μg/mL,抗体浓度为稀释1.4倍,基于此建立了DMP免疫层析快速检测方法,其检测限为0.4μg/mL,5 min内肉眼可观察到检测结果,与其它结构功能类似物无明显交叉反应,特异性良好,白酒样品添加检测结果与GC-MS法相符。本法快速简单,稳定可靠,适用于实际样品中DMP的现场快速检测。     

胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留

建立胶体金免疫层析检测法,用于动物组织或饲料样品中沙丁胺醇残留的快速检测。采用胶体金免疫竞争法,将兔抗沙丁胺醇多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金聚酯结合垫上,并将沙丁胺醇-BSA抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线,与待测试样中的沙丁胺醇竞争结合胶体金标记的兔抗沙丁胺醇多克隆抗体,从而判断试样中是否有沙丁胺醇存在。本文优化了检测试剂,可检测出猪肉等组织和饲料试样中沙丁胺醇的低限浓度为2 ng/mL,与盐酸克伦特罗的交叉反应率为2.67%,且试验在3 min内完成,肉眼可判断结果。本检测方法检测沙丁胺醇,灵敏度高,特异性好,可用于现场的快速检测和筛查。     

基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利

为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法（colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA）应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明：胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下,纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L,其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理,利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性,省去了有机溶剂吹干程序,加标样品平均回收率介于80.1%～109.6%之间,且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测,所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势,可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。     

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

胶体金免疫层析试纸条技术及其在食品安全检测中的应用研究进展

本论文介绍了胶体金免疫层析试纸条技术的基本原理和制备方法,并概述了该技术在医疗检测、食品检测和重金属检测领域的应用研究进展,展现了胶体金免疫层析技术所具有的敏感性和特异性高、操作便捷及可快速判读结果等特点,同时也提出了此项技术目前所存在的一些局限性,并探讨了其在未来研究应用中的发展方向,为我国食品安全快速定量检测技术发展提供文献支持。     

除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化.最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5min内可以通过目测进行结果判断.河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL.本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测.     

一种新型定量检测恩诺沙星量子点免疫层析方法的建立

恩诺沙星作为一种应用较为广泛的抗生素,因在实际抽检中出阳率较高引起了广泛的重视。本研究建立了一种可以快速定量检测恩诺沙星,采用量子点进行标记和示踪的免疫层析方法。通过对新型的纳米荧光材料量子点结合抗原抗体等活性材料的技术研究、样本前处理试剂的研发、浓度的筛选优化等技术实现量子点材料与食品基质的配适,建立定量检测恩诺沙星免疫层析的平台。通过对试剂盒整体的相关优化,本检测方法线性范围为2~1000 ng/mL,最低检测限为1.80 ng/mL,精密度可控在10%以内,热加速稳定性为37 ℃可稳定放置10 d,性能优越。与传统液相色谱方法比较,简便快捷,整体检测时间可控在20 min内,检测结果相关性较好,相关系数为0.98。本研究弥补国内对量子点与免疫层析技术相结合定量检测食品类抗生素残留方面研究的空缺,可实现大批量现场原材料的快速筛查,推动食品快检技术的发展。     

水产品中恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测及其前处理

目的:结合胶体金标记技术和免疫层析技术建立胶体金免疫层析毛细管检测技术,用于水产品中恩诺沙星残留的快速现场检测。方法:以间接竞争的实验原理,通过优化检测区抗原、质控区二抗、金标一抗检测浓度初步建立胶体金免疫层析毛细管检测方法,并进一步确定其检测灵敏度、特异性、重复性等及前处理的优化操作。结果:该方法检测恩诺沙星的视觉检测限为5 ng/mL,半定量检测限为1.29 ng/mL。在大菱鲆、鲅鱼、舌鳎、南美白对虾阴性样品中的平均添加回收率在78.3%~129%之间,相对标准偏差均小于10%。特异性实验表明,除对环丙沙星外,对其他相似物的特异性较好;环丙沙星的视觉检测限为10 ng/mL,半定量检测限为4.37 ng/mL,满足国标检测的限量要求。同时,针对免疫层析毛细管检测的前处理方法进行初步探究,最终确定采用常温条件下磺基水杨酸提取的前处理方法。结论:恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测技术具有简单、快速、易操作、重复性好的优势,为食品药物残留检测领域提供了检测新方法。同时,选择新型试剂作为胶体金免疫层析毛细管检测技术的前处理方法,该方法可以为多种快检技术的前处理提供理论基础与技术支撑。     

胶体金试纸条同时检测鲤鱼中7种苯并咪唑类药物的残留

为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗体,而后用合成的胶体金标记单克隆抗体制备胶体金试纸条。通过间接竞争ELSIA法(ic-ELISA)测得阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的半抑制浓度(IC50)分别为0.44、0.16、3.47、5.62、0.62、0.10、5.77 ng/mL。胶体金试纸条在鲤鱼中的阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的检测限分别为4、2、50、100、10、1、100 ng/g,检测时间为15 min。因此,该方法灵敏度高、成本低、速度快且无需仪器辅助,适宜现场大量鲤鱼样本的快速检测。