b型流感嗜血杆菌荚膜多糖定量~1H-NMR法的建立及验证

目的建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量~1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即~1H-NMR法),并进行验证。方法精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液;采用Bruker Avance-600型超导核磁共振波谱仪,设置NMR实验参数条件,以重水为溶剂,二甲基砜为内标物建立定量~1H-NMR法进行多糖含量测定;对该方法进行专属性、准确度、线性、精密度及耐用性验证;应用建立的定量~1H-NMR法及化学法测定5批Hib荚膜多糖含量。结果经~1H-NMR谱、~(13)C-NMR谱、~1H-~1H COSY谱及~1H-13C HSQC谱归属显示,Hib荚膜多糖的定量峰(δ_(H)5. 06)及内标物二甲基砜的定量峰(δ_(H)3. 14)分离良好,互不干扰,且不受样品内其他谱峰的干扰,方法专属性良好;供试品溶液加入100、150及200μL国际标准品,加标回收率在101%～102%;Hib多糖质量浓度在1～20 mg/mL范围,线性方程为y=0. 234 3 x-0. 002 6(R~2=1. 000 0);供试品溶液6次重复性及中间精密度测定的定量峰积分面积比值的RSD分别为0. 78%及0. 60%,精密度良好;5 mg/mL的供试品溶液在不同脉冲角度及不同延迟时间定量峰积分面积比的RSD分别为0. 07%及0. 13%,耐用性良好。5批荚膜多糖经定量~1H-NMR法及化学法检测,核糖含量均在《中国药典》三部(2015版)规定合格范围内(320～410 mg/g)。结论成功建立了测定Hib荚膜多糖含量的定量~1H-NMR法,该方法具有良好的专属性、准确度、线性、精密度及耐用性,为Hib疫苗的质量控制研究奠定了基础。     

反相高效液相色谱法检测吸附无细胞百白破联合疫苗2-苯氧乙醇含量

目的建立检测吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTa P)中2-苯氧乙醇含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(1∶1),流速1.0 m L/min,检测波长270 nm,柱温25℃,以外标法测定2-苯氧乙醇含量,并对该方法进行线性、重复性、中间精密度、准确度、专属性、耐用性验证。结果 2-苯氧乙醇浓度在100~500μg/m L范围内,与峰面积线性关系良好,R2大于0.99;3批供试品重复性试验2-苯氧乙醇含量相对标准偏差(RSD)分别为0.8%、0.4%和1.2%,中间精密度验证2-苯氧乙醇含量RSD分别为2.38%、2.36%和2.68%;准确度回收率在97.4%~101.9%之间;供试品中加入戊二醛和甲醛对2-苯氧乙醇含量的检测无干扰,专属性较好;温度变化对检测结果无显著影响,耐用性较好。结论该检测方法简单、快速、可靠,可用于疫苗中2-苯氧乙醇含量检测。     

电位滴定法测定丁基硼酸的含量

目的：建立一种丁基硼酸起始物料的含量测定检测方法。方法：采用电位滴定法，用氢氧化钠滴定液进行滴定。结果：本方法空白试验溶液消耗滴定液体积为0.000 mL,对供试品滴定终点的判断无干扰，供试品滴定过程中有明显、单一的滴定突跃，专属性良好；重复性试验和中间精密度试验RSD均小于1.0%;在供试品约0.12～0.48 g范围内线性关系良好，r=0.999 9;含量回收率应在98%～101%,6份含量测定结果的RSD小于1.0%,准确度良好；分别对水浴加热时间、水浴温度、双氧水用量、D-甘露醇用量和滴定杯溶液总体积等五个因素各三个水平进行了分析方法的耐用性考察，各组考察因素下三个不同水平含量测定结果的RSD均小于1.0%,耐用性良好。结论：该方法操作简便、准确度好、精密度高、耐用性优良，可用于本品的含量检测。     

聚乙二醇化人睫状神经营养因子蛋白含量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立聚乙二醇化重组人睫状神经营养因子(PEGylated ciliary neurotrophic factor,PEG-CNTF)蛋白含量反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测方法,并进行验证。方法以未修饰的人CNTF原型蛋白为对照品,采用反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定PEG-CNTF的蛋白含量。色谱柱:Jupiter 5u C4 300A(150 mm×4.6 mm);流动相:0.1%三氟乙酸的水溶液、0.1%三氟乙酸的乙腈;检测波长:280 nm;流速:1 mL/min;柱温:室温;进样体积:20μL。对该方法进行专属性、线性、精密性、准确性、耐用性验证。结果空白溶剂在CNTF、PEG-CNTF样品设定积分范围内无特异峰出现;建立的方法在PEG-CNTF含量为0.125～4 mg/mL浓度范围内线性关系良好(R2 0.99);供试品重复性检测的相对标准偏差(RSD)分别为0.21%、0.19%、0.45%,中间精密性检测的RSD分别为0.42%、0.59%、0.83%;制备的高、中、低3个浓度供试品检测结果的回收率均在95%～101%之间;该方法的定量限为50μg/mL,检测限为15.625μg/mL;耐用性验证中连续5次进样CNTF、PEG-CNTF峰面积及保留时间的RSD均小于2%。结论建立的方法具有良好的专属性、线性、精密性、准确性、耐用性,可用于PEG-CNTF中蛋白含量的检测。     

HPLC法测定肺炎球菌多糖疫苗中的苯酚含量

目的建立测定肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量的HPLC法。方法采用Novo-Pak C-18色谱柱(3.9 mm×150 mm,4μm),以甲醇-水(20∶80)为流动相进行洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为271 nm,柱温为25℃,进样量为10μl。对该方法的适用性、专属性、精密度、重现性、稳定性、准确性进行验证,并确定该方法的线性范围及定量限。用建立的方法检测6批23价肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量,并与溴量滴定法进行比较。结果苯酚浓度在0.031 25~0.500 2 mg/ml范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000),定量限为0.31μg/ml;供试品溶液的色谱峰与苯酚对照品溶液的主峰保留时间均约在4.5 min;苯酚对照品溶液连续进样6次,峰面积相对标准偏差(RSD)为0.09%,保留时间的RSD为0.02%;6份同1批供试品溶液中苯酚含量的均值为2.42 mg/ml,RSD为0.48%;同1份供试品溶液室温下放置,0~24 h测定12次,保留时间均值为4.485,RSD为0.53%,峰面积平均值为1 037 336,RSD为0.29%;9份加标供试品溶液的平均回收率为99.63%,RSD为1.18%。6批23价肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量的两种方法检测结果基本一致。结论建立的HPLC法操作简便,专属性、精密度、准确度、重现性、稳定性好,可对23价肺炎球菌多糖疫苗中的苯酚进行准确定量。     

基于连续流动注射安培法定量检测多糖蛋白结合疫苗中氰化物的残留量

目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法，并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后，采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量，进样时间为：35 s；进样体积为：200μL；泵速为：40%；样品周期时间为：140 s；紫外波长为：312 nm；安培检测器。验证方法的专属性、基质效应、线性范围、检出限、定量限、准确性、精密性及稳定性。采用建立的方法检测5个厂家生产的b型流感嗜血杆菌结合疫苗及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物原液(13批)、结合物原液(21批)中氰化物残留量。结果 空白样品对检测无干扰；b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液基质效应溶液的回收率分别为97.4%、102.4%、96.8%、99.8%,CV均<15%；氰基浓度在0.312 5～80 ng/mL范围内，与峰高呈良好的线性关系，回归方程为：y=133.13 x+57.556,R²=0.999 1；检出限为0.2 ng/mL，定量限为0.6 ng/mL；加入氰基浓度为5、10、20 n...     

速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量

目的建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证。方法采用免疫化学系统(IMMAGE 800),选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品离心沉淀后用缓冲溶液复溶,经Na OH解吸附法处理样品和标准品。对方法进行线性、重复性、准确性、专属性、适用性验证,并采用建立的方法检测3批13价肺炎球菌结合疫苗样品中的各型多糖抗原含量。结果在设定的条件下,各型多糖抗原浓度在1~6μg/ml范围内,线性良好(相关系数0.99);各型多糖抗原含量重复检测的相对标准偏差(RSD)均低于8%;13型多糖结合抗原含量的回收率在70%~130%之间;6A与19A型特异性血清与其他12型多糖抗原有交叉反应,但与阳性对照的比值均较低(5%),其他12种特异性血清特异性良好,无交叉反应;除1、3型抗原外,其余型别的游离多糖抗原基本不干扰结合抗原的检测结果。结论建立的速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量重复性、准确性良好,1、3型结合抗原不适用于直接离心沉淀获得。     

破伤风抗毒素效价絮状单位测定方法(体外法)的验证及其与体内法的比较

目的对破伤风抗毒素絮状单位测定法(体外法)进行方法验证,并与小鼠中和试验法(体内法)进行比较。方法对用于破伤风抗毒素效价检测的絮状单位测定法进行准确度、精密度、专属性及耐用性验证。采用絮状单位测定法及小鼠中和试验法分别检测破伤风抗毒素原料血浆、原液及成品,并分析两种方法的相关性。结果对破伤风抗毒素国家标准品6次絮状测定回收率均为100%;重复性验证的变异系数(CV)均2%;对破伤风抗毒素效价检测具有良好的专属性,供试品中防腐剂对其检测无干扰;不同温度下检测结果的CV值2%。两种方法对原料血浆、原液及成品测定结果的相关系数分别为0.825、0.937及0.955,P均0.001,呈正相关,且相关性显著。结论破伤风抗毒素絮状单位测定法(体外法)操作简便,具有良好的准确性、精密性、专属性及耐用性,且与体内法具有显著相关性,可作为企业内控的一种辅助快速检测手段。     

抗CD52单克隆抗体外源DNA残留量检测方法的建立及验证

目的建立检测抗CD52单克隆抗体原液中残余DNA的方法,并对该方法进行验证。方法利用CHO Host Cell DNA Extraction&Amplification Kit,采用qPCR法检测抗CD52单克隆抗体中宿主细胞残留DNA含量,并进行方法的专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果该方法可以准确定量检测CHO细胞残留DNA含量。专属性验证试验中对照制剂无特异扩增曲线,而CHO细胞上清有明显的扩增曲线;5次试验中标准曲线相关系数R~2均≥0.98,表明该方法线性良好;准确度验证试验中所有试验的加标回收率均在70%~130%范围内;精密度验证试验中所有试验检测结果的相对标准偏差(RSD)均不大于30%;耐用性验证试验中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的CV为0.85%,不同稀释倍数的供试品加标回收率在70%~130%范围内,不同稀释倍数外源DNA检测结果CV为4.71%。结论该方法专属性、准确度、精密度、线性和耐用性均符合要求,可采用该试剂盒qPCR法检测外源DNA残留量。     

磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶修饰率的测定

目的建立磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶(PC-SOD)中蛋白和胆碱含量的测定方法,并计算PC-SOD的修饰率。方法采用凯氏定氮法,即通过测定供试品的总氮含量及经钨酸沉淀去除蛋白质的供试品滤液中的非蛋白氮含量,计算PC-SOD蛋白氮含量,并验证方法的准确性和重复性;应用磷脂C检测试剂盒,经碱水解显色法检测PCSOD的胆碱含量,并验证方法的准确性和重复性。通过PC-SOD中的蛋白氮和胆碱含量计算其修饰率。同时采用该方法对3批PC-SOD供试样品进行检测。结果凯氏定氮法的回收率为95%~105%,RSD为0.59%;碱水解显色法的回收率为95%~105%,RSD为1.65%。3批PC-SOD供试样品的修饰率分别为4.46、4.33和4.28。结论该方法操作简便,具有良好的准确性及重复性,可用于PC-SOD修饰率的检测。     

分解炉扩径的技术改造

我厂3号回转窑(Φ4m×60m)生产线在1996年年底由SP窑(产量912t/d)改为NSP窑(产量1320t/d),预分解系统为四级旋风预热器带离线式分解炉     

乙烯酮(双乙烯酮)下游产品废水的治理技术

乙烯酮(双乙烯酮)是十分重要的化工中间体,其下游产品较多。江苏某化工厂开发生产乙烯酮(双乙烯酮)下游产品三十多个,年生产规模三万多吨,是国内以乙烯酮(双乙烯酮)为中间体生产精细化学品的综合骨干企业。针对乙烯酮(双乙烯酮)下游产品废水特点,该厂结合企业实际,开展了产品优化,结构调整,清洁生产,资源循环利用,节水降耗等工作,从源头削减了污染物的生产。同时投资二千多万元新建预处理装置三套,6000m3/d废水生化处理装置一套,使全厂乙烯酮(双乙烯酮)下游产品的废水得到了有效的治理。     

水泥水化热测定方法综述

水泥水化热是中、低热水泥和核电工程用水泥的一项关键的技术指标。全球范围内测定水泥水化热的方法有溶解法、直接法/半绝热法、等温传导量热法三种。本文总结了中、美、欧相关方法标准,对其测试原理、仪器设备、试验过程等方面进行了比对,并对其在领域的应用做了简单的概括。     

几种乙炔加压设备性能的比较

阐述并比较了几种加压设备在乙炔加压清净过程中的性能和特点。     

A study of miscibility of blends of polybutadienes of varying microstructure

The miscibility of various amorphous polybutadienes with mixed microstructures of 1,4 addition units (cis, 1,4 and trans 1,4) and 1,2 addition units have been investigated. The studies here involved optical transparency, differential scanning calorimetry, and small angle light scattering. It was found that a 90 percent (cis) 1, 4 addition polybutadiene was immiscible with high (91 percent) 1,2 addition polybutadiene. Reduction of the 1,2 content to 71 percent induced an upper critical solution temperature (UCST) with the cis 1,4 polymer. Polybutadienes with 50 percent and 10 percent 1,2 contents were miscible above the crystalline melting temperature of the cis 1,4 polybutadiene. Immiscibility of the 91 percent 1,2 addition polymer was also found with a 10 percent 1,2 polybutadiene. The latter polymer also exhibits an UCST with the 71 percent 1,2 polymer. The results are used to interpret the characteristics of blends of polybutadienes of varying microstructure.     

粉煤灰中烧失量检测的不确定度分析

以F类粉煤灰为例,详细介绍了测定粉煤灰中烧失量的步骤、计算数学模型、影响测量不确定度的因素以及各项测量不确定度分量评定,人员、设备、材料、方法、环境都是影响测量不确定的因素。     

基于组件技术的化工原理实验课件的设计

利用组件技术开发化工原理实验课件,给出了系统层、组件库层和应用层的架构划分。重点讨论了组件库的设计,给出了流体阻力这一典型实验的实现描述。实践证实,基于组件技术可以提高仿真实验的开发效率。     

Effect of Plastic Component of Defromation on Accuracy of Prediction of Functional Properties of Polymeric Materials

Fibre Chemistry - Classical methods for predicting polymeric materials deformation processes are based on numerical solution of governing Boltzmann-Volterra viscoelasticity type of equations, which...